1.

Parasitismo

Para se verificar a mortalidade dos nematoides sob a ação de isolados de Trichoderma

sp., foram preparadas suspensões de esporos, calibradas na concentração de 1 x 107
esporos/mL, sendo 1 mL dessa suspensão adiocionados em tubos eppendors de 2 mL. Em
seguido, foi adicionado ao tubo 1 mL de solução contendo 100 nematóides. Foi utilizado um
tratamento com o nematicida Avicta, na concentração de ....... O tratamento controle foi
feito apenas com a adição de água destilada. As avaliações foram realizadas 24, 48 e 72
horas após a incubação, contando-se os nematoides vivos e mortos na suspensão. Para
facilitar a identificação dos nematoides vivos, será adicionado a cada tubo, NaOH 1N a
10% do volume da solução, no momento exato da avaliação da amostra.

2. Teste de metabólitos voláteis

Para a avaliação de produção de compostos voláteis produzidos pelos isolados

de Trichoderma spp.na mortalidade dos fitonematóides estudados, será adicionado em
um lado de uma placa bipartida, discos de micélio de 5 mm dos isolados de
Trichoderma spp., inoculados em meio de cultura BDA. Estes serão tampadas e
vedados com plástico filme, sendo mantidos em câmara do tipo B.O.D. (25 graus). Dois
dias após, será inoculado do outro lado da placa bipartidada, 1 mL de suspensão com
100 nematóides. A inoculação foi realizada com auxílio de seringa e agulha, realizando
um orifício diretamente na tampa da placa. Após a inoculação, o orifio foi
imediatamente coberto com fita, e as placas foram novamente armazendas em câmara
B.O.D. e mantidas por sete dias. Transcorrido este período, foi quantificada a
quantidade de nematoides mortos em cada placa.

3. Oleos essenciais

Para a avaliação da mortalidade dos nematoides sob a ação de óleos essenciais,

os mesmos serão solubilizados em Tween, obtendo as concentrações de 25, 50, 100 e
150 μL/mL. Em tubos eppendorf de 2 mL, serão adicionados solução de 1 mL contendo
100 nematóides. Em seguida, serão adionadas 1 mL das suspensões de óleos essenciais,
nas diferentes concentrações. Os controles serão realizados somente com a adição de
água ou Tween, sem a emulsão de OE. Ainda, foi utilizado um tratamento com o
nematicida Avicta, na concentração de ....... As avaliações serão realizadas 24 e 48
horas após a incubação, contando-se os nematoides vivos e mortos na suspensão. Para
facilitar a identificação dos nematoides vivos, será adicionado a cada tubo, NaOH 1N a
10% do volume da solução, no momento exato da avaliação da amostra.

4. Compatibilidade de isolados de Trichoderma sp. com nematicida in vitro

Discos de 4 mm de diâmetro dos isolados foram removidos das bordas das

colônias cultivadas em meio batata-dextrose-água (BDA), e transferidos cada um para o
centro de cada placa de Petri de 9 cm de diâmetro, contendo BDA + nematicida nas
concentrações finais de 0, 10, 100, 500, 1000 ou 1500 μL/L. Os produtos foram
incorporados ao meio de cultura fundente (± 45°C), e o disco com o fungo foi colocado
sobre o meio em temperatura ambiente e incubado em fotoperíodo de 12 horas, a 28°C
por 3 dias. A avaliação do crescimento micelial foi realizada por meio de medições dos
diâmetros (cm) das colônias em dois sentidos perpendiculares entre si, fazendo-se a
média das duas medidas. As medições foram realizadas em 3 dias consecutivos em
intervalos de 24 horas. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente
casualizado em arranjo fatorial XXX x XXX (tratamentos x concentrações), com quatro
repetições por tratamento. Cada placa de Petri representou uma unidade experimental.