Engenharia genética e processos biotecnológicos de manipulação

QUESTÃO DE AULA 6
de DNA

O Prémio Nobel da Química, em 2020, foi atribuído às cientistas Jennifer Doudna e Emmanuelle
Charpentier, pelo desenvolvimento de um método de edição do genoma, denominado CRISPR/Cas9.

O CRISPR/Cas9 é uma técnica de biologia molecular capaz de editar sequências de DNA localizadas
em qualquer região do genoma. Esta técnica, que permite a edição do DNA humano in vitro, é baseada
num sistema de memória imunológica presente nas bactérias, usado para as proteger dos vírus.

O sistema CRISPR/Cas9 – Figura 1 – consiste em duas moléculas:

• Cas9: uma enzima que atua como um par de “tesouras”, cortando as duas cadeias
complementares do DNA num local específico do genoma;

• RNA guia (gRNA): uma pequena sequência de RNA complementar à sequência de DNA-alvo,
que “guia” a Cas9 para a parte do genoma que deverá ser cortada.

1
Protospacer
adjacent motif (PAM) − é uma sequência nucleotídica existente no DNA-alvo, cuja presença é
essencial para o desenrolamento do alvo pela Cas9. Na ausência da sequência PAM, o DNA-alvo não
é reconhecido pela Cas9 mesmo que a sequência de nucleótidos do gRNA seja totalmente
complementar.

Baseado em: C. Costa et al., «Sistema CRISPR/Cas9 e perspectivas de aplicações na cadeia produtiva animal»,
in Rev Bras. Reprod. Anim., Vol. 45(01), 2021.

O CRISPR/Cas9 tem um enorme potencial para ser usado como ferramenta no tratamento de
diversas doenças. Tem sido aplicado, por exemplo, para editar mutações em genes que causam divisão
celular descontrolada, responsáveis pelo aparecimento do cancro, ou em estudos de desenvolvimento de
terapia génica para diversas doenças genéticas, tais como a surdez, a distrofia muscular de Duchenne, a
hemofilia e a anemia falciforme.
Baseado em: https://blog.mendelics.com.br/crispr-cas9-edicao-do-dna-e-o-tratamento-de-doencas/
(consultado em agosto de 2022)

1. Selecione, de entre as afirmações relacionadas com o funcionamento do sistema CRISPR/Cas9,

as três afirmações corretas.

Transcreva para a folha de respostas os números selecionados.

I. O método referenciado consiste num processo semelhante ao da replicação do DNA.
II. O CRISPR/Cas9 é um mecanismo naturalmente presente nas bactérias.
III. Um ser vivo sujeito ao método referido é um organismo geneticamente modificado.
IV. A sequência PAM é eliminada aquando da etapa de reparação do DNA.
V. A edição de genes, pelo método descrito, visa a reparação de DNA em células de pacientes
com doenças genéticas.

2. A sequência de DNA-alvo reconhecida pelo gRNA da Figura 1 é

(A) 3’-TAGCTAGCT-5’
(B) 3’-UAGCTAGCU-5’
(C) 5’-ATCGATCGA-3’
(D) 5’-TAGCTAGCT-3’

3. O sistema CRISPR/Cas9 pode ser utilizado para

(A) inativar os genes responsáveis pela apoptose.
(B) estimular a multiplicação celular.
(C) corrigir mutações em genes supressores tumorais.
(D) impedir a exposição celular a agentes mutagénicos.

4. De acordo com os dados, o sistema CRISPR/Cas9 pode ser utilizado quando se verifica
(A) a inativação de oncogenes pelos agentes mutagénicos.
(B) a transformação de oncogenes em proto-oncogenes.
(C) o aparecimento de mutações no gene p53.
(D) o funcionamento dos pontos de controlo do ciclo celular.

5. Outros estudos demonstraram que, muitas vezes, o sistema CRISPR/Cas9 erra o alvo e acaba por
editar outras regiões do genoma, acontecimento designado por mutações off-targets (fora do alvo).

Explique em que medida a análise de off-targets pode permitir, aos cientistas, aprimorar o sistema
CRISPR/Cas9, de forma a aplicá-lo em larga escala.
6. Vários estudos em células-tronco demonstram o potencial protetor de algumas mutações do gene
CCR5 contra o vírus HIV.

Em 2018, um cientista chinês anunciou que duas bebés gémeas nasceram após os embriões
serem geneticamente modificados através do sistema CRISPR/Cas9. O gene CCR5 dos embriões
foi modificado para que fossem resistentes ao HIV. Apesar de as bebés terem nascido saudáveis,
o cientista foi condenado.

Explique esta aparente contradição.

7. Têm sido desenvolvidos estudos em que o sistema CRISPR/Cas9 é conjugado com outras
técnicas de engenharia genética.

Analise, com atenção, a Figura 2 que representa a técnica de PCR.

Baseado em: J. L. Neto et al., «A genética e

 o mar», in Rev. Ciência Elem., Vol. 7(01):015, 2019.

7.1. As afirmações seguintes dizem respeito à técnica de PCR. Selecione a alternativa que as avalia
corretamente.
I. Utiliza enzimas de restrição.
II. É utilizada quando a amostra contém uma pequena quantidade de DNA.
III. Pode ocorrer, in vivo, sujeitando as células vivas a baixas temperaturas.

(A) III é verdadeira; I e II são falsas.

(B) II é verdadeira; I e III são falsas.
(C) I e II são verdadeiras; III é falsa.
(D) II e III são verdadeiras; I é falsa.

7.2. Ordene as expressões identificadas pelas letras de A a E, de modo a reconstituir a sequência

correta de acontecimentos relacionados com a técnica de PCR.
A – Atuação da DNA polimerase.
B – Desnaturação da dupla hélice do DNA.
C – Produção de cópias do fragmento de DNA original.
D – Extração de material genético nuclear.
E – Ligação dos primers às cadeias de DNA originais.

7.3. Ao fim do terceiro ciclo de PCR, é possível obter, por cada fragmento de DNA inicial,
(A) 4 moléculas de DNA.
(B) 8 moléculas de DNA.
(C) 16 moléculas de DNA.
(D) 32 moléculas de DNA.

7.4. A utilização da Taq polimerase, enzima isolada de bactérias termófilas, trouxe muitas vantagens à
técnica de PCR, uma vez que
(A) permite a sua adição a cada novo ciclo.
(B) pode ser utilizada em todos os seres procariontes.
(C) desnatura à temperatura de desnaturação do DNA.
(D) mantém a estrutura durante o processo experimental.

8. Associe a cada uma das técnicas de engenharia genética, apresentados na coluna I, as

características da coluna II que lhes correspondem.

Cada um dos algarismos deve ser associado apenas a uma letra e todos os algarismos devem ser
utilizados.

Coluna I Coluna II
 (1) Envolve a atuação da transcriptase reversa.
(2) Ocorre manipulação do genoma.
(a) cDNA (3) Permite a comparação de amostras distintas de DNA num gel.
(b) DNA fingerprint (4) Envolve a introdução de genes provenientes de outros
(c) Transformação organismos.
genética de (5) Permite estudar a paternidade de um indivíduo.
organismos (6) Possibilita a clonagem de genes apenas com regiões
codificantes.
(7) Produz-se DNA, a partir de uma molécula de mRNA maturado.