Lactase non-persistence is

directed by DNA variation-

dependent epigenetic aging
Lactase
Lactase, enzima encontrada no intestino delgado de mamíferos que
catalisa a quebra da lactose (açúcar do leite) nos açúcares simples
glicose e galactose. Em humanos, a lactase é particularmente
abundante durante a infância. É uma enzima de borda de pincel,
produzida por células conhecidas como enterócitos que revestem as
paredes intestinais e formam a borda do pincel (uma barreira química
pela qual os alimentos devem passar para serem absorvidos).
MCM6
O gene MCM6 codifica o fator de licenciamento de replicação de DNA de proteína
MCM6, uma das proteínas complexas de manutenção de mini cromossomo altamente
conservadas que são essenciais para o início da replicação do genoma eucariótico.
O MCM6 contém duas das regiões regulatórias para LCT, o gene que codifica a
proteína lactase, localizada em dois dos introns MCM6 próximos, rs182549 e
rs4988235, aproximadamente 14 kb (-13910) e 22 kb (-22018) a montante de LCT. A
região (-13910), tem sido mostrada como um elemento potencial capaz de ativar
diferencialmente a transcrição do promotor de LCT. Mutações nessas regiões são
frequentemente associadas à tolerância à lactose na vida adulta.
O gene da lactase humana (LCT)
encontra-se no cromossomo 2. Vizinho
ao gene LCT encontra-se o gene MCM6
(mini-chromosome maintenance
proteins 6).
Dentro deste gene, encontra-se um
“enhancer” do gene LCT, ou seja, uma
região que aumenta a expressão do gene
LCT.
A troca de um único nucleotídeo (de C para T) na posição -13.910 do
gene LCT, impede que uma série de modificações epigenéticas
ocorram nos introns do gene vizinho MCM6.
O intron 16 e o exon 15 do gene MCM6 funcionam como “enhancers”
(estimuladores) do gene da lactase (LCT).
A intolerância à lactose de fato é um
processo fisiológico, ou seja, normal no
adulto. A lactose é o açúcar que está
presente no leite e em seus derivados.
Este açúcar precisa ser quebrado para
poder ser absorvido e digerido
adequadamente. A enzima responsável
por esta quebra é chamada lactase. 
O gene que produz esta enzima é chamado
LCT e, muito próximo dele, existe uma
região chamada  MCM6, cuja
compactação regula o gene da lactase.
Quando somos bebês e crianças o nosso gene LCT
está ligado o tempo todo, produzindo muita lactase,
pois nessa fase ingerimos muitos alimentos ricos em
lactose. No entanto, conforme vamos crescendo, a
nossa produção de lactase vai diminuindo. E na
maioria das pessoas, o gene LCT é desligado (pelo
menos de forma parcial), assim temos pouca ou
quase nenhuma lactase disponível para quebrar a
lactose.
Porém, existe uma pequena porcentagem da
população que mesmo na fase adulta continua com
o gene LCT ligado. Isso acontece por conta da
presença de polimorfismos na região MCM6.
Pessoas intolerantes a lactose não produzem a
enzima lactase, o que provoca o acumulo da
lactose no intestino, servindo de alimento para
nossas bactérias. O crescimento excessivo das
bactérias que metabolizam a lactose não
digerida, leva a produção de gases e acidificação
do intestino. O ácido irrita a mucosa intestinal e
produz a diarreia.
Síntese da
Pesquisa
Nosso estudo ajuda a delinear ainda mais os princípios e diretrizes para estudos
epigenéticos de outras características e doenças. As principais lições aprendidas são
1) a investigação necessária do tipo de célula específico envolvido centralmente no
fenótipo em vez do volume do tecido ou órgão, 2) uso de fenótipos quantitativos e
endofenótipos (neste caso níveis de mRNA), 3) locais contendo trechos de Os CPGs
diferencialmente modificados foram replicáveis e mais biologicamente plausíveis
do que os CPGs solitários (uma consideração que afeta os métodos de detecção de
CPG único, isto é, matrizes ilumina 450k), 4) o benefício de comparações entre
espécies que mostraram uma conservação parcial de elementos regulatórios entre
camundongos e humanos, 5 ) Exame de múltiplas camadas epigenéticas para obter
informações sobre as funções de elementos regulatórios e 6) o potencial de fatores
de risco de sequência de DNA para se associar estreitamente às anormalidades
epigenéticas que juntos influenciam os elementos reguladores do gene.
Modificações epigenéticas de proteínas de DNA e histonas podem contribuir
para a não persistência da lactase, pois regulam efetivamente a transcrição
gênica, diferem acentuadamente entre tecidos e tipos celulares e também
mudam no mesmo indivíduo ao longo do tempo. De fato, evidências sugerem
que muitas manifestações do envelhecimento, incluindo doenças dependentes
da idade, têm base epigenética. À luz disso, nos propusemos a realizar a
primeira investigação examinando até que ponto os processos epigenéticos
mediam a regulação negativa da LCT dependente da idade e do tipo de célula
que resulta na não persistência da lactase. Neste estudo, realizamos perfis
cromossômicos de modificação de DNA (consistindo em metilação e outras
modificações epigenéticas de citosina) usando MicroArrays de ladrilhos de
alta densidade, seguidos por interrogação baseada em sequenciamento de
bissulfito direcionado dos genes da lactase humana e de camundongo em
células intestinais e outros tecidos.
Detectamos mudanças nas densidades de modificação do DNA em vários
elementos reguladores distintos que direcionam o declínio gradual na
expressão do gene da lactase após a infância em mamíferos. Em seguida,
exploramos como os fatores genéticos podem afetar as mudanças específicas
da idade nas marcas epigenéticas e descobrimos que o SNP C/T-13910
contendo haplótipos contribuiu para o envelhecimento epigenético do LCT-
MCM6. Para validar os elementos reguladores epigeneticamente controlados
para o gene da lactase, usamos RNA de interferência (RNAi) em cultura de
tecidos humanos e deleções genéticas induzidas por CRISPR-Cas9 no
camundongo. Nosso estudo revelou que a não persistência da lactase resulta
do acúmulo de alterações epigenéticas transcricionalmente supressoras em
haplótipos que carregam o alelo SNP C-13010, enquanto os haplótipos
contendo T-13910 escapam da inativação epigenética para facilitar a
persistência da lactase.
Embora os ensaios de repórter examinando a indução do promotor de LCT e
as mudanças de gel, bem como experimentos com camundongos
transgênicos, apoiem a importância do SNP C/T-13910 na regulação de
LCT em populações europeias, as diferenças relatadas entre variantes
alélicas são modestas (variante T-13910 mostra uma atividade ~1,5 vezes
maior em comparação com a variante ancestral). Isso sugere que, além dos
SNPs, pode haver outros fatores que contribuem para as diferenças de
mRNA de LCT em indivíduos persistentes e não persistentes com lactase.
Também não está claro quais mecanismos moleculares podem explicar as
mudanças dependentes da idade da expressão de LCT; desde muito alta na
infância até uma subregulação substancial na maioria dos adultos. Como a
sequência de DNA é estável, sistemas regulatórios mais dinâmicos devem
estar envolvidos na dimensão temporal da não persistência da lactase.
Obrigado (a)!