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Eduardo Alcio CEFET/PE

Mtodos Microbiolgicos para Contagem de Fungos e Bactrias

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Contagem Padro em Placa

um mtodo de inoculao, onde se introduz uma quantidade de amostra num meio de cultura adequado. Inoculao em placas de Petri: Tcnica em superfcie (Spread Plate)
Adiciona-se 0,1 mL de uma diluio da amostra com pipeta estril no centro da placa e espalha-se com o auxlio de uma ala de Drigalski ou um basto estril. Amostra

Meio Slido

Espalhamento

Incubao

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Contagem Padro em Placa (cont.)

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Inoculao em placas de Petri: Tcnica em Profundidade (Pour Plate)

Adiciona-se 1 mL da amostra ou sua diluio na placa de Petri vazia. Verte-se 20 mL de meio de cultura fundido e resfriado a 45C. Agita-se a placa em movimentos circulares . Meio Lquido

Amostra

Incubao

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Contagem Padro em Placa (cont.)

Resultado a ser alcanado: Que no meio slido cada clula vivel (UFC) d origem a uma colnia isolada.

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Nmero Mais Provvel - NMP

Tcnica de diluio idealizada por McCrady (1915), onde se faz uma estimativa da densidade mdia dos microrganismos na amostra De fcil execuo, mas laboriosa. Baseia-se em frmulas de probabilidade estimada utilizando frmula ou tabelas A densidade microbiana estimada pela relao de tubos positivos e negativos Aplicado apenas para contagem de Bactrias

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Nmero Mais Provvel - NMP (cont.)

1. Diluies sucessivas:
1mL 1mL

2. Incubao: Em meios adequados

10 g da Amostra 90mL 9 mL Dil 1/10 Dil 1/100 9 mL Dil 1/100 1 mL Dil. 1/100 1 mL Dil. 1/10

1 mL Dil. 1/1000

1 mL Diluente

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Nmero Mais Provvel - NMP (cont.)

Leitura: Tabela estatstica
Nmero de tubos cujo crescimento visvel para cada quantidade do produto sob exame 100 mg ou 0,1 mL /tubo 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 3 10 mg ou 0,01 mL /tubo 0 0 1 0 0 1 1 2 0 0 1 1 2 3 3 3 3 1 mg ou 0,001 mL /tubo 0 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1 2 0 1 2 3 Nmero Mais Provvel de microrga nismos por g ou mL <3 3 3 4 7 7 11 11 9 14 15 20 210 240 460 1100 >2.400 Limite NMP

Inferio r <0,5 <0,5 0,5 1 1 3 3 1 3 3 7 35 36 71 50 -

Inferio r 9 13 20 21 23 36 36 36 37 44 89 470 1300 2400 4800 -

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Filtrao por Membrana

O mtodo baseia-se na filtrao de volumes adequados da amostra diluda atravs de membrana filtrante com porosidade de 0,45 m. As bactrias e fungos a serem detectados, apresentando dimenses maiores, ficaro retidas na superfcie da membrana, a qual ento transferida para placa de Petri contendo meio seletivo e diferencial.

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Filtrao por Membrana (cont.)

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1. Diluir a amostra

2. Montar assepticamente a membrana no sistema de filtrao

3. Ligar a fonte de vcuo

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Filtrao por Membrana (cont.)

4. Filtrar a amostra diluda (Equivalente a 1g da amostra)

5. Transferir o filtro para o meio slido em placa de Petri

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Filtrao por Membrana (cont.)

6. Incubar em temperatura para bactria e fungo 7. Contar as colnias e calcular o n de microrganismo / g ou mL

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Contagem de Microrganismos Viveis Totais em Produtos Farmacuticos (Farmacopia Brasileira 4 edio, 1988)
Determinar o nmero total de bactrias e fungos em produtos e matrias-primas No-estreis -Contagem da populao microbiana que cresce aps 4 dias em gar Casena-soja a 30-35C -Contagem da populao microbiana que cresce aps 7 dias em gar Sabouraud Dextrose a 20-25C Sobre o Mtodo: Realizar o teste preferencialmente em capela de fluxo laminar. Quando possvel utilizar filtrao por membrana.
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Contagem de Microrganismos Viveis Totais em Produtos Farmacuticos (cont.) Limites Microbianos para Produtos Farmacuticos (USP XXIV) -Preparaes para Uso Oral e Tpico: Bactrias mesfilas aerbias: Bolores e leveduras: -Outros Produtos Bactrias mesfilas aerbias: Bolores e leveduras: Mximo 103/g ou mL Mximo 102/g ou mL Mximo 500/g ou mL Ausncia

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