FIXAÇÃO DE AZOTO

A fixação do Azoto (N2) é menos comum que

a fixação do CO2, somente alguns
procarióticos, como as bactérias (Azotobacter
vinelendii e Clostridium pasteurianum),
cianobactérias (Nostoc muscorum e Anabaena
azollae) e as bactérias simbióticas Rhizobium,
designados por bactérias diazotróficas
possuem esta capacidade.
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FIXAÇÃO DE AZOTO
As bactérias diazotróficas vivem em simbiose com as
células dos nódulos de raízes de leguminosas
(Fabaceae), tais como os feijões, as forrageiras
(luzerna, alfafa), e trevo, onde convertem N2 em NH3,
segundo a equação global:

N2 + 8 H+ + 8e- + 16 ATP + 16 H2O 2 NH3 + H2 + 16 ADP + 16

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 O NH3 formado é incorporado ao

glutamato pela glutamato-desidrogenase
ou à glutamina pela glutamina-sintase.
 A quantidade de NH3 sintetizada é
superior às necessidades da planta e
deixada no solo, enriquecendo-o em
azoto assimilável.
 A enzima que cataliza a transformação de
N2 a NH3 é a Nitrogenase.
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 A Nitrogenase é constituida por duas

proteínas
 1-A Fe-Proteína, um dímero com sub-
unidades idênticas com um núcleo de
4Fe-4S e dois locais de ligação a ATP,
contendo Mo (molibdénio).
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 2-A MoFe-proteína, é uma proteína tetrâmica,

com estrutura dimérica α β , em que cada
dímero contêm dois centros redox
 A- Centro P ou Grupo P que consiste num grupo
4Fe-4S ligado a um grupo 4Fe-3S que estão em
conjunto ligados pelos átomos de S de 6
resíduos de Cys, um O da cadeia lateral da Ser
e um N da cadeia principal proteica.
 B-O cofactor FeMo que consiste em grupos de
4Fe-3S e Mo-3Fe-3S ligados por 3 SO32-. (sulfito)
 Nitrogenase
 A duas porções
a verde são a
Fe-Proteína e
as porções
centrais a
vermelho e
violeta a MoFe-
Proteína
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 Nitrogenase
 Cofactores
existentes na
nitrogenase e
transportadores
de ATP
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Cofactor da FeMo proteína
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 Estrutura do Cofactor Fe7MoS9.homocitrate
 Verde ou Negro= Fe
 Rosa ou Azul escuro=Mo
 Amarelo ou castanho claro= Enxofre
 Azul claro =N2
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 Os electrões são gerados por duas vias,

dependente do organismo:
 A-FOSFORILAÇÃO OXIDATIVA
 B-FOTOSSÍNTESE
 Iniciação do processo
 Os electrões são transferidos para a
ferrodoxina que contém 4Fe-4S que
transfere um e- para a Fe-proteína da
nitrogenase.
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 O grupo Mo é coordenado pelos 3 iões

SO32-, um N da His e dois O do homocitrato
que é um constituinte essencial do co-
factor.
 Pensa-se que o N2 se liga na parte central
deste co-factor.
 Como se viu anteriormente este processo
é extremamente dispendioso em termos
electrónicos e energéticos
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 Duas moléculas de ATP ligam-se à Fe-proteína

reduzida e são hidrolisados quando o e- passa
da Fe-Proteína para a MoFe-proteína da
nitrogenase.
 A hidrólise do ATP causa uma modificação
conformacional na Fe-proteína que passa o seu
potencial redox de -0,29 Vpara -0,40 V,
disponibilizando o e- para a redução do N2.

+ - 0
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 A redução do N2 dá-se na MoFe-proteína em

três passos, envolvendo cada um um par de
electrões:
 1º-Fixação de 2 protões e dois eléctrões com
formação de uma diimina

2H+ + 2e-

N N H N N H
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 2º-Transformação da Diimina em Hidrazina

2H+ + 2e-
H H
H N N H N N
Diimina H
 3º-Redução da hidrazina a duas
H moléculas
Hidrazina de
NH3.

2H+ + 2e-
H H
N N 2 NH3
H
H Hidrazina Amoníaco
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 Mecanismo da transferência electrónica

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 Mecanismo de transferência electrónica
 Mecanismo de transferência electrónica
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 Para fixar uma única molécula de N2 dá-se a

transferência de 6 e- e o gasto de 12 ATP.
 Um ciclo inútil pode aparecer neste processo, em
que a nitrogenase pode reduzir a água a
hidrogénio, que vai reagir com a diimina,
voltando a formar azoto atmosférico.

H N N H + H2 N2 + 2 H2
Diimina
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 A situação anterior pode existir quando o nível

do ATP é baixo ou a Fe-proteína é ineficiente.
 Verifica-se, no entanto, que se dá sempre este
processo, produzindo-se sempre uma molécula
de H2 por cada molécula de N2 reduzida. Isto
leva a um custo mínimo de 8e- e 16 ATP
hidrolisados por cada N2 transformado, o que é
um custo muito elevado.
 A maioria das plantas não é capaz de sustentar
o crescimento simbiótico de bactérias fixadoras
de azoto que necessitam de uma fonte de azoto
“pré-fixado” como o nitrato ou a amónia.
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 Estes nutrientes vêm de descargas de
relâmpagos e raios que representam 10%
do N2 fixado pelas plantas, da matéria
orgânica em decomposição no solo ou de
fertilizantes aplicados.
 Um dos objectivos a longo prazo da
engenharia genética é induzir em plantas
não leguminosas de uso agrícola a
fixação de azoto atmosférico.
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 Isto possibilitaria, em países em vias de

desenvolvimento, a possibilidade de não
serem comprados fertilizantes e não
deixarem parcelas de terreno em repouso,
não terem necessidade de destruir as
florestas tropicais das quais dependemos
a nível global.
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 Bibliografia
 http://images.google.pt/imgres?
imgurl=http://www.steve.gb.com/images/molecul
es/proteins/nitrogenase_(cofactors).jpg&imgrefur
l=http://www.steve.gb.com/science/nitrogen_met
abolism.html&h=500&w=499&sz=87&hl=pt-
PT&start=1&usg=__ivKCSqgn7m-
h6ugTcYj1a2jsTho=&tbnid=stBA1Eyffa7CNM:&t
bnh=130&tbnw=130&prev=/images%3Fq
%3DNitrogenase%26gbv%3D2%26hl%3Dpt-PT
Nitrogenase a cores
 FIXAÇÃO DE AZOTO
 http://images.google.pt/imgres?
imgurl=http://dcwww.camd.dtu.dk/campos/
Dacapo/nitrogenase_centralligand.jpg&im
grefurl=http://dcwww.camd.dtu.dk/campos
/Dacapo/&h=982&w=626&sz=182&hl=pt-
PT&start=2&usg=__v4pUbt5turJqdEEkj6
mQey1KLZs=&tbnid=T7SmKfmaD68eqM:
&tbnh=149&tbnw=95&prev=/images%3Fq
%3DNitrogenase%26gbv%3D2%26hl
%3Dpt-PT Centro activo da nitrogenase
 FIXAÇÃO DE AZOTO
 http://www.steve.gb.com/images/molecules/proteins/nitrogena
Subunidades da nitrogenase
 http://plantnet.rbgsyd.nsw.gov.au/PlantNet/cycad/nitrogen/figu
Mecanismo da nitrogenase
 http://images.google.pt/imgres?
imgurl=http://www.chemistry.unimelb.edu.au/staff/spbest
/research/Pictures/femocopic.gif&imgrefurl=http://www.c
hemistry.unimelb.edu.au/staff/spbest/research/projects/N
2ase.htm&h=567&w=768&sz=16&hl=pt-
PT&start=11&usg=__0dx4282WMdPFQ7ZH_j461bZ5fZ
U=&tbnid=7dYDZnfHoiM6VM:&tbnh=105&tbnw=142&pr
ev=/images%3Fq%3DNitrogenase%26gbv%3D2%26hl
%3Dpt-PT Cofactor MoFe
 FIXAÇÃO DE AZOTO
 http://images.google.pt/imgres?
imgurl=http://www.cse.scitech.ac.uk/ccg/j.kaestn
er/images/nitrogenase_cycle.jpg&imgrefurl=http:
//www.cse.scitech.ac.uk/ccg/j.kaestner/nitrogena
se.html&h=216&w=400&sz=36&hl=pt-
PT&start=16&usg=__TLTxIoNG9JuZvssFxWH6
8bfrehc=&tbnid=kzP8pnYi2KrAHM:&tbnh=67&tb
nw=124&prev=/images%3Fq%3DNitrogenase
%26gbv%3D2%26hl%3Dpt-PT Acção da
nitrogenase
 FIXAÇÃO DE AZOTO
 http://images.google.pt/imgres?
imgurl=http://www.nature.com/nrmicro/journal/v2
/n8/images/nrmicro954-
f1.gif&imgrefurl=http://www.nature.com/nrmicro/j
ournal/v2/n8/fig_tab/nrmicro954_F1.html&h=781
&w=600&sz=120&hl=pt-
PT&start=20&usg=__yfouW7jjMm81yS4jnbB2Et
nzBmI=&tbnid=gMy_6wLU75HTYM:&tbnh=143&
tbnw=110&prev=/images%3Fq%3DNitrogenase
%26gbv%3D2%26hl%3Dpt-PT Nitrogenase da
Azotobacter vinelandii
 FIXAÇÃO DE AZOTO
 http://images.google.pt/imgres?
imgurl=http://www.scripps.edu/news/sr/sr2004/imag
es/Noodleman.mb.fig1.gif&imgrefurl=http://www.scri
pps.edu/news/sr/sr2004/mb04noodleman.html&h=5
42&w=380&sz=10&hl=pt-
PT&start=27&usg=__PIgcQ1AjcjIgAg2UgkQOUnhn
oDI=&tbnid=Sg0V4vlphU4iyM:&tbnh=132&tbnw=93
&prev=/images%3Fq%3DNitrogenase%26start
%3D20%26gbv%3D2%26ndsp%3D20%26hl
%3Dpt-PT%26sa%3DN FeMo-cofactor