IMUNOLOGIA

Expresso da ligao Ag-Ac

H vrios tipos de reaco Ag-Ac, segundo a natureza do
Ag, a classe do Ac e a forma de deteco da unio

Reaco de precipitao
Reaco de aglutinao
Reaco de neutralizao
Fixao do complemento
Reaco com elementos marcados
Provas cutneas

As reaces de precipitao e aglutinao fora as primeiras

a ser descobertas

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Expresso da ligao Ag-Ac
Reaco de precipitao
Baseia-se na capacidade que alguns Acs (precipitinas) tm
para formarem com Ags solveis, macromolculas suficientemente grandes para precipitarem
mais eficaz para detectar Ags do que Acs
Permite determinar ttulos de Acs quando se coloca uma
quantidade fixa de Ag em soluo perante diluies
sucessivas da amostra
A precipitao s se observa quando se obtm um ponto
de equivalncia de concentraes do Ag e do Ac
(Fenmeno de prozona)

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Unio Ag-Ac

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Modificaes da reaco de precipitao
1. Imunodifuso passiva
Difuso em gel
Tcnica de Ouchterlony (1948)
Realiza-se em poos perfurados num gel de agar onde se
colocam solues de Ags e Acs
A difuso de ambos na espessura do agar levar ao seu
encontro produzindo bandas de precipitao

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Padres de reaco em imunodifuso dupla
(Tcnica de Ouchterlony)

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Modificaes da reaco de precipitao
1. Imunodifuso passiva
Imunodifuso radial (IDR)
Tcnica de Mancini (1965)
Utiliza um gel de agar em que se incorporou um Ac
Poos feitos no agar servem para acrescentar Ags ou
factores do complemento
A difuso do Ag provoca um halo de precipitao em volta
do poo
O dimetro do halo directamente proporcional concentrao do Ag, que calculada face aos dimetros dos
halos produzidos por soros de concentrao conhecida

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Imunodifuso radial (IDR)

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Modificaes da reaco de precipitao
2. Imunoelectroforese
um excelente mtodo para detectar diversos sistemas
Ag-Ac sobre um gel de agar ou outro meio slido, tendo
por base uma separao electrofortica prvia das vrias
protenas de uma soluo antignica complexa que depois
se pe em contacto com os Acs para dar as linhas de
precipitao

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Tcnica de
imunoelectroforese

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Modificaes da reaco de precipitao
3. Imunodifuso activa
Contraimunoelectroforese
Usa uma placa de gel de agar com 2 poos em oposio
onde se coloca Ag num e Ac no outro
Submetida, a placa, a uma corrente elctrica Ag e Ac
migraram ao encontro um do outro para dar uma linha
de precipitao
Boa para detectar Ags bacterianos em lquidos orgnicos
Ex. Ags de meningococo ou de pneumococo no LCR
quando no so visveis na colorao de Gram

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Tcnica de contraimunoelectroforese

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Modificaes da reaco de precipitao
3. Imunodifuso activa
Electroimunodifuso a duas dimenses

Tecnicamente consegue-se que o Ac permanea fixo e o

Ag que migra no gel
Com este mtodo consegue-se que os precipitados tenham
uma forma de ponta de lana
A altura dos precipitados proporcional concentrao do
Ag
Com um pH adequado pode fazer-se o contrrio

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Modificaes da reaco de precipitao
3. Imunodifuso activa
Electroforese cruzada de Laurell

Comea-se por realizar uma electroforese de protenas

Uma vez concluda a separao, a placa de agar adere-se
a outra que tem os Ags e submete-se a uma electroforese cruzada
Tambm permite uma quantificao

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Tcnica de Laurell

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Expresso da ligao Ag-Ac
Reaco de aglutinao
Possibilidade de alguns Acs ( aglutininas) provocarem
aglutinao com Ags particulados (eritrcitos, bactrias,
partculas de ltex, etc.)
Os Acs mais aglutinantes so os da classe IgM
Est tambm sujeita aos fenmenos de prozona e pode
utilizar-se como tcnica qualitativa, semiquantitativa e
quantitativa, em que o ttulo da reaco corresponder
maior diluio em que ainda se observa a aglutinao
Consoante a forma de se realizar, assim :
Directa
Passiva

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Reaco de aglutinao
1. Reaco de aglutinao directa
Consoante o tipo de Ag que se empregue assim o resultado da unio Ag-Ac se pode observar de maneira
diferente
No caso de bactrias, observa-se a formao de pequenos
depsitos finamente granulares que se ressuspendem
sem se desmancharem. Podem ser de tipo somticos ou
flagelares
Nos casos em que o Ag est representado por clulas
inteiras como as hemceas, produz-se o fenmeno de
hemaglutinao, com a formao de grumos

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Reaco de aglutinao

2. Reaco de aglutinao passiva

Por adsoro de Ags solveis sobre a superfcie de uma
clula (GV) ou de uma partcula sinttica (Ltex),
consegue-se converter uma prova de precipitao
em reaco de aglutinao, melhorando a sua sensibilidade
Uma vez sensibilizadas pem-se em presena do soro
problema e observa-se se h ou no aglutinao
possvel uma semiquantificao da taxa de Acs

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Reaco de aglutinao passiva

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Expresso da ligao Ag-Ac
Reaco de neutralizao
Neste tipo de reaco vai observar-se o fenmeno
fisiolgico de inactivao de um processo biolgico
A unio do Ag-Ac revela-se pelo desaparecimento de
determinadas propriedades biolgicas como sejam:
Neutralizao de vrus
Neutralizao de toxinas in vitro
Neutralizao da mobilidade

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Imunoensaios
(Ensaios de ligao)

1.

Ensaios heterogneos

Existe separao entre a fase ligada e a fase livre

Doseia-se a fase ligada

2a. Competitivos (Ag*)

2b. Imunomtricos (Ac*)

2.

Ensaios homogneos

No h separao e ocorre uma modulao da actividade

da substncia marcada
S doseiam Ag
EMIT
FPIA

-Enzyme multiplied immuno assay technic

-Fluorescente polarization assay

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Imunoensaios
(Ensaios de ligao)

1.

Ensaios heterogneos

Tipo de marcadores (*)

Radioistopos
Enzimas
Compostos fluorescentes
Compostos luminescentes

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Ensaios heterogneos Competitivos
RIA
EIA
FIA
LIA

-Radio immuno assay

-Enzyme immuno assay
-Fluoro immuno assay
-Luminescente immuno assay

[Ac fixo em fase slida + Amostra (Ag a dosear) + Ag*]

A probabilidade que o Ag* tem de se ligar ao Ac inversamente proporcional concentrao do Ag no marcado
que interessa dosear

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Ensaios heterogneos imunomtricos
(Ensaio tipo Sandwich)

IRMA
IEMA
IFMA
ILMA

-Immuno
-Immuno
-Immuno
-Immuno

radio metric assay

enzymo metric assay
fluoro metric assay
luminescente metric assay

[Ac fixo em fase slida + Amostra (Ag a dosear) + Ac* ]

A fraco ligada directamente proporcional concentrao na amostra
ELISA

-Enzyme linked Immuno Sorbent Assay (IEMA)

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Sfilis (Lues)
Testes inespecficos:
Reaco de VDRL
RPR (rapid plasma reagin) - VDRL clssico, mod.
Servem para pesquisar a reaginas sifilticas e usam como Ag a
cardiolipina-lecitina
Ttulos sugestivos se > 1/16
til para monitorizao da teraputica

Testes especficos:
FTA-Abs (Fluorescent Treponema Antibody-Absorption) Usa
uma tcnica de imunoflorescncia
TPHA uma reaco de hemaglutinao passiva, visto que
usa GVs de galinha revestidos com Ag treponmico
TPI um teste de imobilizao treponmica
EIA e Western-Blot

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Transio materno-fetal

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Brucelose (Febre de Malta)
Hemocultura (Mtodo de Castaeda)
Reaco de Huddlesson reaco de aglutinao rpida
em lmina para deteco de Acs anti-Brucella abortus
Reaco de Wright - reaco de aglutinao lenta em
tubo para deteco de Acs anti-Brucella abortus
Ttulos de 1:80 a 1:160 so indicativos e os de 1:320 so conclusivos a
partir da 2 semana

Reaco de Rosa Bengala reaco de aglutinao

rpida em lmina que usa uma suspenso tamponada
de Brucella abortus corada com Rosa Bengala
D resultados qualitativos e til em estudos epidemiolgicos em larga
escala
Revela a brucelose aguda 4 a 6 dias depois da R. de Wright, mas permanece um pouco mais tempo positiva nos casos de brucelose antiga

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Febre tifide
Hemocultura (Kayser)
Coprocultura (meio de WilsonBlair com verde brilhante)
Reaco de Widal em lmina ou em tubo uma prova de
aglutinao para deteco de Acs contra:
Salmonella typhi - O (somtico) e H (flagelar)
Salmonella paratyphi A AH (flagelar)
Salmonella paratyphi B BH (flagelar)

Esperar grandes aumentos entre o 8 e 15 dia da doena

Os Ags O so os primeiros a subir e declinam rapidamente com o
tratamento
Os Ags H sobem mais lentamente e persistem denunciando uma
infeco antiga ou vacinao
Ttulos de 1:160 em O e de 1:80 em H so indicativos
Nos casos positivos, a demonstrao do Ag Vi (superficial ou de
virulncia) interessa para o despiste de portadores. Ttulos
20 j so suspeitos

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Mononucleose infecciosa

Reaco de Paul-Bunnell-Davidsohn reaco de hemaglutinao para deteco de Acs heterfilos ou de Acs

inespecficos de tipo Forssman

Monoteste teste de aglutinao em lmina em que

antes da adio de Ag EBV, se adiciona a uma parte da
amostra Gvs de boi para adsorverem os Acs heterfilos
e, a outra parte, rim de cobaia para adsorver os Acs
inespecficos

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Febre escaro-nodular (Febre da carraa)
Reaco de Weil-Flix em lmina ou em tubo uma
prova de aglutinao para deteco de Acs anti-Proteus
usando suspenses bacterianas coradas e inactivadas
de:
Ag Proteus OX2
Ag Proteus OXK
Ag Proteus OX19

Prova obsoleta por inespecfica

A doena causada pela Rickettsia conorii e o vector a
carraa do co

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Hidatidose (Quisto hidtico)
uma Equinococose (Echinococcus granulosus) em que o
co o hospedeiro definitivo albergando o parasita
adulto
Reaco de Wienberg que uma reaco de fixao
do complemento
Reaco de Casoni intradermoreaco

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Artrite reumatide
RA Teste (Factores reumatides)
O termo Factor reumatide (FR) engloba um grupo heterogneo de auto-Acs (na sua maioria IgM), que so capazes de reagir com diferentes eptopos da regio Fc da
IgG humana
A pesquisa pode fazer-se por:
Reaco de aglutinao em lmina
Imuno-turbidimetria
Nefelometria

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Artrite reumatide
Reaco de Waller-Rose
uma tcnica de hemaglutinao que utiliza glbulos de
carneiro sensibilizados por imunoglobulinas de coelho
anti-eritrcitos de carneiro
Em presena de FR, observa-se a hemaglutinao
coelho
anti-GV

Ac

GV carneiro

Outras tcnicas:

Imuno-turbidimetria
Nefelometria
ELISA e RIA

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Lpus eritematoso disseminado (LED)
LE teste (fenmeno LE)
O teste uma reaco de aglutinao em lmina em que
partculas de ltex revestidas com (DNP) desoxiribonucleoprotenas, aglutinam se o soro do doente tiver
Acs anti-DNP
Pesquisa de clulas LE
Em 1948 descobriu-se que o fenmeno da clula LE era
devido fagocitose, por neutrfilos, de ncleos celulares opsonizados por auto-Acs

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Infeco estreptoccica
No homem, os estreptococos dos grupos A, C e G de Lancefield podem causar faringite, mas praticamente s os
do grupo A ocasionam febre reumtica e glomerulonefrite
Estes estreptococos elaboram um grande nmero de produtos extracelulares como:
Estreptolisinas O e S (ASO/TASO)
Desoxiribonuclease B (DNAse)
Hialuronidase
A pesquisa pode fazer-se por:
Reaco de aglutinao em lmina
Imuno-turbidimetria
Nefelometria

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Gravidez
DIG (Diagnstico Imunolgico de gravidez)
Teste presuntivo de gravidez que faz a deteco de hCG,
se esta estiver acima de determinado nvel de sensibilidade do teste (25 mUI/mL)
A pesquisa pode fazer-se por:
Teste de aglutinao em lmina
Teste imunocromatogrfico

Doseamento de -hCG