Apostila de Parasitologia

Protozorios - Helmintos

Professora Especialista: Rose Felipe

2009

Parasitologia - Introduo

I) EXAME DIRETO
EXAME MACROSCPICO DE PREPARAES A FRESCO
O diagnstico realizado pela observao microscpica dos oocistos entre lminas e lamnulas. O
exame direto a fresco realizado diretamente das fezes diarreicas, ou aps a diluio das fezes
pastosas, em soluo salina a 0,85% (1:5). Examinar com objetiva de imerso. A microscopia de
contraste de fase facilita a observao dos parasitas.
Observaes: O oocisto no exame direto aparece maior que aqueles observados nos esfregaos
fixados e corados. Os oocistos apresentam-se como elemento esfricos de 5 a 6 m de dimetro,
com membrana externa fina, com um citoplasma finalmente granulado, e com mancha negra
proeminente, central ou lateral, quer representa os corpos residuais. Os quatro esporozotos livres
aparecem como pequenas manchas dispostas na periferia em forma de "C". O ncleo visto no
centro do organismo (GARCIA et al., 1983; LEMETEIL, 1987; MEHLHORN, 1988).

2) Mtodo de Faust e cols: centrfugo - flutuao

1) Princpio do teste
A pesquisa de cistos nas fezes pode ser realizada por diferentes mtodos. O mtodo de Faust
est baseado na centrifugao e na flutuao em uma soluo de Sulfato de zinco. Uma alquota
de fezes filtrada e posteriormente centrifugada. O sobrenadante colocado numa soluo de
Sulfato de zinco e centrifugado. O material a examinar retirado da parte superficial, tratado com
soluo de lugol e observado ao microscpio.
2) Aplicao clnica
A principal aplicao do mtodo de Faust a pesquisa de cistos de protozorios, destacando-se a
pesquisa de cistos de Iodameba btschlii, Entamoeba histolytica, Entamoeba coli, Endolimax
nana. Outros cistos de protozorios, ovos e larvas de helmintos podem ser pesquisados.
3) Reagentes

3.1 Lugol
1 g de Iodo macerada com 2 g de Iodeto de potssio. Medir 200 mL de gua Tipo I. Adicionar
lentamente pequena quantidade desta gua com homogeneizao constante. Quando houver
solubilizao total, adicionar o volume restante desta gua. Armazenar em um frasco de vidro
mbar e rotular. Transferir 20 mL para um frasco conta-gotas mbar, o qual ser usado no diaa-dia.
3.2 Sulfato de zinco a 33 %

Preparar uma soluo em gua Tipo I de modo produzir uma soluo de Sulfato de zinco a 33 %
com densidade 1.180 g/L. Habitualmente a soluo de Sulfato de zinco a 33 % apresenta
densidade 1.180 g/L, mas a densidade deve ser medida e corrigida conforme necessrio.
4) Outros insumos
4.1 Borrel ou frasco de vidro.
4.2 Funil de plstico pequeno.
4.3 Palito de sorvete
4.4 Tubo cnico de plstico.
4.5 Caneta para marcar tubo.
4.6 Gaze tipo queijo ou tamiz metlico de 80 a 100 malhas/cm2.
4.7 Estante.
4.8 Lmina de vidro.
4.9 Lamnula de vidro.
4.10 Ala de inoculao ou pipeta Pasteur.
5) Equipamentos
5.1 Centrfuga.
5.2 Microscpio.

6) Procedimento detalhado

OBS: Para executar este procedimento indispensvel o uso de luvas, mscara e avental.

1 Preparar uma suspenso 1:10 de fezes em gua Tipo II num frasco do tipo Borrel,
identificado com o nmero de registro do paciente.
2 Adaptar a gaze ao funil de vidro.
3 Identificar um tubo cnico com o nmero de registro do paciente.
4 - Filtrar a suspenso para este tubo cnico.
5 Centrifugar a 2500 rpm por 1 minuto.
6 Desprezar o sobrenadante.
7 Adicionar 3 mL de gua Tipo II e misturar.
8 Repetir os itens 5, 6 e 7 mais duas vezes.
9 No ltimo sedimento, adicionar 3 mL de soluo de Sulfato de zinco.
10 Agitar e completar o volume do tubo com o Sulfato de zinco.
11 Centrifugar a 2500 rpm por 1 minuto.
12 Aspirar a pelcula superior.

13 Identificar a lmina de vidro com o nmero de registro do paciente.

13 Colocar 1 gota na lmina de vidro.
14 Colocar 1 gota de lugol na lmina de vidro.
15 Homogeneizar.
16 Colocar a lminula de vidro.
17 Observar no microscpio, inicialmente com pequeno aumento.
18 Registrar o resultado na Planilha de exame
7) Leitura
1 A riqueza de cistos pode ser verificada com pequeno aumento do microscpio.
2 As caractersticas de cada espcie so observadas com grande aumento ou imerso.
3 Observar: o nmero de nuclolos dos cistos, a sua estrutura, a distribuio, a colorao e o aspecto
do glicognio neles contido.
8) Limitaes do mtodo
1 Amostra do paciente contendo poucos cistos pode fornecer resultado falso negativos.
2 A incapacidade do observador em identificar as caractersticas morfolgicas das
diferentes espcies poder causar resultados enganosos.

III) Tcnica de Colorao por Hematoxilina Frrica

A hematoxilina frrica utilizando fezes preservadas sem dvida, o mtodo que maior segurana
oferece na identificao e no diagnstico da E. histolytica.
Os trofozotas apresentam uma cor cinza-azulada, diferenciando-se de estruturas de tonalidades
escuras. Seu tamanho varia entre 15 a 60 micra.
O citoplasma distinto e observa-se uma ntida diferenciao entre o ectoplasma e o
endoplasma, principalmente se a forma observada estava emitindo pseudpodes quando da sua
fixao. O ectoplasma apresenta-se hialino com uma colorao cinza-clara, diferenciando-se do
endoplasma, que se apresenta granuloso e mais intensamente corado. No seu interior pode-se
observar uma ou mais hemcias coradas de negro, evidenciadas nitidamente por um halo claro em
toda sua parte externa. O ncleo geralmente no central, permanecendo em local afastado da
emisso dos pseudpodes, corando suas estruturas em negro. O cariossoma geralmente central,
mais corado, os grnulos de cromatina so escuros e distribudos uniformemente no interior da
membrana nuclear.

A forma pr-cistica geralmente esfrica, podendo apresentar-se oval, corando em azulacinzentado e no apresentando diferenciao entre o ectoplasma e o endoplasma. O vacolo
ocupa 2/3 do parasito, que o vacolo de glicognio, pouco corado. Os corpos cromatides, corados
em negro, se apresentam como um ou dois bastonetes de tamanhos diferentes. O ncleo se
apresenta um pouco maior na forma pr-cistica. O cariosoma grande, de aspecto geralmente
uniforme.
J nos cistos pode-se observar uma ntida membrana cstica corada em negro e o citoplasma se
apresenta em uma cor cinza-azulada contendo um vacolo de glicognio grande e no corado. Os
corpos cromatides, mais freqentes nos cistos imaturos, coram em negro e apresentam-se em
quantidades variveis, porm dificilmente so observados nos cistos tetranucleados. Outros
protozorios de interesse nos exames de fezes so: E. coli, E. hartmani, Endolimax nana,
Iodamoeba butschlii, Isospora belli, Balantidium coli. Pode usar para pesquisa de Trichomonas
vaginalis (secreo vaginal e uretral)
Procedimento Prtico

I)

Material para anlise: fezes diarricas obtidas por purgantes (30 gramas de
sulfato de sdio dissolvidos em gua). Evacuao deve ser feita no laboratrio

II)

Fezes muito pastosas ou endurecidas devem ser colocadas em fixador de

preferncia o de Schaudinn (veneno).

III)

Utilizar lamnulas limpas e desengorduradas presas a um suporte de borracha

para facilitar a manipulao (figura 1).

IV)

Com uma pzinha de sorvete espalhar as fezes fazendo um esfregao e aps

emergir ema placa de Petri contendo o fixador de Schaudinn.

V)

Passar esta preparao pelos seguintes lquidos:

1- lcool iodado - 1 minuto

2- lcool a 95% - 1 minuto
3- gua corrente para lavagem 1 minuto dentro da cuba
4- Mordente (alumnio de ferro) 3 minutos
5- gua corrente - 1 minuto dentro da cuba
6- Soluo de Hematoxilina frrica 5 minutos
7- gua corrente - 1 minuto dentro da cuba
8- Diferenciador (alumnio de ferro) at que o esfregao adquira uma
transparncia adequada. (muita experincia): momento crucial
9- gua corrente - 2 minutos dentro da cuba.
10- lcool absoluto 2 minutos.

11- lcool a 95% - 2 minutos

12- lcool creosoto - 2 minutos
13- Creosoto de Faia - 2 minutos
14- Montar com blsamo do Canad: sobre uma lmina limpa e desengordurada colocar
uma gota de blsamo, e sem deixar bolhas de ar, colocar a preparao com o
esfregao voltado para baixo, sobre o mesmo.
A preparao poder ser colocada em estufa a 37 C para a secagem do blsamo do
Canad, limpando-se o excesso com auxlio de xilol e papel de filtro. Examinar com
objetiva de imerso e ocular 5x ou 10x.

Entamoeba histolytica

cisto

Entamoeba coli
(trofozoto e cisto)

Trofozoto

Giardia lamblia
cisto

Trofozoto

Desenhos das Lminas

Protozorios sanguneos
Preparao do esfregao sanguneo e colorao Mtodo de GIEMSA:
(diagnstico do tripanosomas, dos plasmdios, das leishmanias e Toxoplasma).
I) Preparo de esfregao sanguneo
A) Sangue com EDTA
B) Preparam-se esfregaos finos tocando uma lmina limpa, desengordurada,
em uma pequena gota de sangue, de modo que fique prximo de uma
extrimidade da lmina. Uma segunda lmina espalhadora (lmina de
extenso) segurada pelas bordas, em ngulo de 30 graus sobre a lmina
que tem o material e recuada sobre a gota fazendo que se espalhe ao longo
da borda da lmina espalhadora. Com suavidez e rapidez, empurre a lmina
espalhadora para frente, de modo que o sangue se espalhe e corra em
camada plana.
C) Deixe secar ao ar e core conforme a descrio.
II) Procedimento de colorao

A) Identificao do Trypanosoma cruzi hemoflagelado

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Objetivos da aula: reconhecer as seguintes formas evolutivas: tripomastigotas,

amatigostas e epimastigotas de T. cruzi.
1) Tripomastigotas

Examinar lmina de esfregao sanguneo corado pelo mtodo Giemsa

(visualizar o parasito entre as hemceas).

Descrever a posio do cinestoplasto, posio do ncleo, membrana

ondulante e flagelo.
Epimastigota de T.cruzi

Amastigota de T. cruzi

B) Identificao de Leishmania spp.

Objetivos da aula: reconhecer as seguintes formas evolutivas: promastigotas e
amastigotas de Leishamnia ssp.

1) Promastigotas

As promastigotas de Leishmania ssp so encontradas no trato intestinal do

mosquisto Flebotomneo (mosquito palha), mas tambm podem ser encontrados em

culturas in vitro

Descrever a posio do cinestoplasto, posio do ncleo e flagelo.

2) Amastigotas

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As amastigotas sero encontradas em clulas do sistema fagocitrio, presentes

no sangue circulante ou nos rgos de indivduos infectados.

Examinar lminas obtidas de amstigotas obtidas em linfonodo.

Descrever a posio do cinestoplasto, posio do ncleo e flagelo.

D) Identificao de Plasmdios (Plasmodium sp)

Objetivos da aula: reconhecimento das formas sanguneas dos palsmdios

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D) Identificao de Toxoplasma gondii.

Objetivos da aula: reconhecimento dos principais estgios parasitrios de gondii, diferenciando
estgios encontrados na fase aguda (taquizotos) da fase crnica (bradizotos em cistos
teciduais).

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Taquizotos

Bradizoto

Desenhos das Lminas

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Schistosoma mansoni

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Desenhos das Lminas

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Mtodo de Lutz ou de Hoffmann (sedimentao espontnea)

Princpio do mtodo:
Mtodo baseado na sedimentao espontnea, especfico para a pesquisa de ovos de Schistosoma
mansoni, porm altamente eficiente e amplamente utilizado para a pesquisa de todos os parasitos.

Material necessrio:
1. Clice de decantao
2. Peneira
3. Gaze dobrada em 4
4. gua corrente ou destilada
5. Esptula de madeira (tipo abaixador de lngua)
6. Lmina e lamnula
Tomar cerca de 2 g de fezes recm emitidas, dissolv-las no prprio recipiente de coleta (frasco padro
para coleta de amostra) utilizando um pouco de gua. Transferir o material dissolvido para um clice de
decantao fazendo filtrar em peneira contendo gaze em 4. Completar at do volume de gua e
deixar repousar em superfcie firme e livre de vibraes por no mnimo 2 horas.
Retirar o sedimento com um canudo ou pipeta Pasteur e transferir para lmina de vidro adicionando 2
gotas de soluo de Lugol e cobrindo com lamnula. Observar ao microscpio em objetiva de 10x.

Taenia sp
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Desenhos das Lminas

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Hymenolepis nana

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Ascaris sp

Ovo

Ovo

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Desenhos das Lminas

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FLUTUAO SIMPLES - WILLIS (flutuao em salina saturada)

Essa tcnica se baseia na propriedade que alguns ovos de helmintos apresentam de flutuarem na
superfcie de uma soluo de densidade elevada e de aderirem ao vidro. Este procedimento especfico
para a pesquisa de ovos de Ancilostomdeos.
1. A soluo saturada de cloreto de sdio feita adicionando aproximadamente 40g de NaCl a 100mL
de gua sob aquecimento at o ponto em que o sal no se dissolva mais na gua. A densidade desta
soluo deve ser de aproximadamente 1,20g/mL.
2. Colocar uma quantidade de fezes (aproximadamente 2 g) coletadas de vrias partes do bolo fecal em
uma pequena cuba contendo uma parte de soluo saturada de cloreto de sdio, dissolver as fezes
nesta soluo e acrescentar gua at a borda.
3. Colocar sob a borda da cuba uma lmina de vidro quase tocando a soluo saturada e deixar de 30 a
45 minutos . Aps este tempo, inverter a lmina rapidamente e observar ao microscpio.

Ancylostoma sp

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Desenhos das Lminas

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Rugai e cols

Barmann Moraes

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Strongyloides stercoralis

Desenhos das Lminas

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COLETA PARA PESQUISA DE ENTEROBIUS VERMICULARIS

(TCNICA DA FITA ADESIVA OU SWAB PERIANAL NOTURNO)
Material necessrio

1. Fita de celofane adesiva e transparente (tipo Durex)

2. Toluol (tolueno), Xilol (xileno) ou Iodo-xilol
3. Lmina para microscopia.
Tcnica

1. Colocar um pedao de fita adesiva transparente em uma esptula de madeira tipo abaixador de lngua
com a parte adesiva voltada para fora
2. Pressionar firmemente a esptula contendo a fita adesiva contra as pregas anais e perianais
3. Colar a fita adesiva em lmina devidamente identificada
4. No momento da execuo do exame, levantar cuidadosamente a fita da lmina e pingar uma gota de
toluol ou xileno e pressionar novamente a fita contra a lmina. A preparao ficar clara ou levemente
corada, tornando os ovos bem visveis.
Caso o material no seja examinado imediatamente, no acrescentar o toluol.

Fita gomada ou anal swab

Ovos da coleta do anal

swab

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Enterobius vermiculares

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Trichuris trichiura

Wuchereria bancrofti
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Desenhos das lminas

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Ectoparasitos

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DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA
INSTITUTO DE BIOLOGIA / UNICAMP
PROTOZORIOS INTESTINAIS E CAVITRIOS
AMEBAS PARASITAS E COMENSAIS

Entamoeba histolytica
cisto

Entamoeba histolytica
cisto (corado pelo lugol)

Entamoeba histolytica
cisto

Entamoeba histolytica
trofozota

Entamoeba histolytica
trofozota

Entamoeba histolytica
trofozota

Entamoeba coli
cisto (corado pelo lugol)

Entamoeba coli
cisto (corado pelo lugol)

Entamoeba coli
trofozota

Iodamoeba btchlii
cisto

Endolimax nana
cisto

Endolimax nana
trofozota

Entamoeba coli
trofozota

FLAGELADOS INTESTINAIS E CAVITRIOS

Giardia lamblia
trofozota

Giardia lamblia
trofozota

Giardia lamblia
cisto

Giardia lamblia
cisto

Trichomonas vaginalis

CILIADOS INTESTINAIS

Balantidium coli
cisto

Balantidium coli
trofozota

Balantidium coli em corte de

intestino

Balantidium coli em corte do

intestino grosso

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DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA
INSTITUTO DE BIOLOGIA / UNICAMP
PROTOZORIOS DO SANGUE E OUTROS TECIDOS

Plasmodium falciparum
trofozota

Plasmodium vivax
trofozota

Plasmodium falciparum
gametcitos

Plasmodium vivax
esquizonte

Trypanosoma cruzi
epimastigota

Leishmania sp.
amastigota

Plasmodium falciparum
microgametcito

Plasmodium vivax
merozoto

Plasmodium vivax
microgametcito

Trypanosoma cruzi
tripomastigota

Leishmania sp.
amastigota

Plasmodium falciparum
macrogametcito

Trypanosoma cruzi
tripomastigota

Leishmania sp.
promastigota

Plasmodium vivax
macrogametcito

Trypanosoma cruzi
amastigota

Toxoplasma gondii
trofozota

Toxoplasma gondii
cisto

VETORES
Barbeiros

Triatoma

Panstrongylus

Rhodnius
Anophelini

Ovos

Larva

Pupa

Macho
Fmea
Adultos

Posio de pouso do adulto

Macho
Fmea
Adultos

Posio de pouso do adulto

Culicini

Ovos

Larvas

Pupa

DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA
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INSTITUTO DE BIOLOGIA / UNICAMP

HELMINTOS INTESTINAIS

Ovo de
Ancilostomatdeo

Ovo de Ascaris
(fertilizado)

Ovo larvado de
Ancilostomatdeo

Ovo de Ancilostomatdeo

Ovo de Enterobius
vermicularis

Ovo de Ascaris (fertilizado) Ovo de Ascaris (larvado e

decorticado)

Ovo de Ascaris
(infrtil)

Ovo de Schistosoma
mansoni

Ovo de Fasciola hepatica

Ovos de Taenia

Ovo de Hymenolepis
diminuta

Ovo de Hymenolepis
nana

Cpsula bucal
Ancilostoma duodenale

Cpsula bucal Ancilostoma

duodenale

Ovo de Trichuris trichiura

Cpsula bucal
Necator americanus

Ovos de Enterobius
vermicularis

Ovo de Ascaris (infrtil)

Ovo de Taenia

Proglote grvido
Taenia solium

Ovo larvado de
Trichuris trichiura

Proglote grvido
Taenia saginata

Cpsula bucal Necator Bolsa copuladora de A.

americanus
duodenale

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Bibliografia Consultada
- DE CARLI, G.A. Parasitologia Clnica Seleo de Mtodos e Tcnicas de Laboratrio para
o Diagnstico das Parasitoses Humanas Editora Atheneu, So Paulo, 2001.
- CIMERMAN, B. & FRANCO, M.A. - Atlas de parasitologia: artrpodes, protozorios e helmintos.
So Paulo, Ed. Atheneu, 1999.
- LEVENTHAL, R. & CHEADLE, R.- Parasitologia Mdica. Texto e Atlas. 4ed. Editora Premiere,
2000.
- NEVES, D.P. - Parasitologia humana. 10 ed. Editora Atheneu (SP), 2003
- REY, L. - Bases da parasitologia mdica. 2 ed. Guanabara Koogan (RJ), 2002.
- VALLADA, E.P.; -Manual de Exames de Fezes - coprologa e parasitologia. Editora Atheneu
So Paulo, 1993
- NEVES, D.P. - Parasitologia dinmica. 1 ed. Editora Atheneu (SP), 2003.
- FERREIRA, M.U. e SCHHUMAKER, T.T.S. Fundamentos Biolgicos da Parasitologia
Humana. Editora Manole, So Paulo, 2003.
- VERONESI, R. & FOCACCIA, R. - Tratado de Infectologia. So Paulo, Editora Atheneu, 1999

Pginas de internet:
WWW.dpd.cdc.gov/dpdx/Default.htm : pgina do Center for Disease Control and Prevention com
imagens e textos sobre parasitos de importncia em sade pblica.
www.cdfound.to.it/html/atlas.htm
www.fcfrp.usp.br/dactb/Parasitologia/ATLAS_DE_PARASITOLOGIA.htm
www.farmacia.ufmg.br/ACT/atlas/

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