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Apresentao
As enzimas so biomolculas responsveis pela catlise de diferentes
reaes em sistemas biolgicos. Atravs da diminuio da energia de
ativao reacional, elas possibilitam que a vida possa ocorrer em condies
amenas de temperatura e presso. Industrialmente, esse fato vem despertando
muito interesse, pois permite a economia de energia a ser aportada
aos processos de converso, gera menos co-produtos e resduos, sendo
parte de um sistema ambientalmente amigvel.
Cintica enzimtica
Enzimas so protenas que catalisam reaes que, sob condies naturais,
seriam muito lentas. O aumento da velocidade de uma reao se deve diminuio
de energia livre de ativao. A cintica enzimtica tem por objetivo a compreenso
do mecanismo de ao das diferentes enzimas e da velocidade das reaes por elas
catalisadas. Este estudo tambm avalia as alteraes na velocidade da reao em
resposta a modificaes de parmetros experimentais, como a concentrao de
substrato, o tempo de incubao, a temperatura de incubao ou a variao do pH.
Ao enzimtica da invertase:
A enzima sacarase ou invertase (-fructofuranosidase) uma enzima que catalisa a
hidrlise da sacarose (acar no redutor) em glucose e frutose (dois acares
redutores, capazes de reduzir os ies frrico ou cprico, presente no reagente de
Fehling):
Sacarose + H2O Glucose + Frutose
Por definio, 1 unidade (U) de invertase hidrolisa 1 mol de sacarose a glucose e
frutose por minuto, a pH 4,6 (25C). A reao pode seguir-se facilmente
determinando a quantidade de acares redutores libertados por ao da enzima,
utilizando, por exemplo, a reao do cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS).
Materiais usados:
Sacarose 0,2 M
Invertase em tampo acetato de sdio 0,05 M pH 4,7
Tampo acetato de sdio 0,05 M pH 4,7
Reagente 3,5 dinitro saliclico (DNS) em meio alcalino
Banho-maria a 37
Espectrofotmetro
Reagentes (ml)
Tubo
Tubo
1
2
Tampo acetato (50
mM pH 4,7)
Agua
Sacarose (0,2M)
Soluo de enzima
(0,05 mg/ml)
Tubo
3
Tubo
4
Tubo
5
1
0,5
0,8
0,5
0,8
0,5
0,8
0,5
0,8
0,5
0,2
0,2
0,2
0,2
Metodologia
Identificar os tubos; o primeiro com a letra 1B, o segundo com o nmero 2, o terceiro
com nmero 3, e assim por diante at o nmero 5.
Adicionar Tampo acetato aos tubos de ensaio 1ml, em cada tubo
Adicionar gua aos tubos de ensaio. No tubo B foi adicionado 1ml de gua, no tubo
2 foi adicionado 0,8ml, no tubo seguinte 0,8ml, o tubo 3 adicionou-se 0,8ml, no tubo
4 foi adicionado 0,8ml, e no ultimo.
Em seguida, adicionou-se Sacarose em cada um dos tubos, No tubo 1 B foi
adicionado 0,5ml, no 2 foi 0,5ml, no 3 foi 0,5ml, no 4 foi 0,5ml, e no tubo 5 foi
adicionado 0,5 de glicose.
Em seguida, adicionou-se soluo enzima, com exceo do tubo nmero 1B, 2 foi
adicionado 0,8ml, no tubo seguinte 0,2ml, o tubo 3 adicionou-se 0,2ml, no tubo 4 foi
adicionado 0,2ml, e no ultimo.
Os tubos 3, 4 e 5 foram levados a o banho-maria ao a 25 0C, onde ficaro por cerca
de 5 mim, logo aps o banho foram incubados por tempos diferentes durante 5 min.
(tubo 3), 10 min. (tubo 4), 15 min. (tubo 5).
1
540
2
3
4
1.175 0,552 0,602
5
...