UNIVERSIDADE DE SO PAULO

Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos

Departamento de Cincias Bsicas

BIOQUMICA FUNDAMENTAL
PROF. DR. MARCELO DE CERQUEIRA CESAR
ENGENHARIA DE ALIMENTOS XIV - DIURNO

ESTUDO DA AO ENZIMTICA DA INVERTASE

CAROLINE OLIVEIRA AGOSTINI 9006913

Pirassununga
2015

SUMRIO

RESUMO......................................................................................................... 3
1.

INTRODUO........................................................................................... 4

2.

OBJETIVO................................................................................................. 7

3.

MTODO................................................................................................... 8

4.

RESULTADOS E DISCUSSO...................................................................10

5.

CONCLUSO.......................................................................................... 12

6.

BIBLIOGRAFIA........................................................................................ 13

RESUMO
Enzimas catalisam inmeras reaes em diversos organismos, um
exemplo quebra ou hidrlise da sacarose, formando um xarope composto de
-glicose, -frutose e sacarose, mais conhecido como acar invertido. No
experimento desse relatrio, 5 tubos contendo sacarose, gua destilada,
tampo acetato e diferentes concentraes da enzima invertase (obtida em
leveduras), foram submetidos incubao a 25C por 15 minutos, aps esse
tempo a ao da enzima foi interrompida e aps a realizao do mtodo
Somogyi Nelson, a absorbncia dos tubos foi medida em espectrofotmetro
535nm. A absorbncia foi mensurada a partir da quantidade de acares
redutores no tubo, sendo assim, quanto maior a concentrao de invertase,
mais acares redutores foram formados, maior a absorbncia e maior a ao
enzimtica.
Palavras chave: enzima, invertase, acar invertido, Somogyi Nelson,
absorbncia, espectrofotmetro

1. INTRODUO
H duas condies fundamentais para a vida. Primeiro, a entidade viva
deve ser capaz de se autorreplicar; segundo, o organismo deve ser capaz de
catalisar as reaes qumicas eficiente e seletivamente (LEHNINGER, 2006).
Sendo assim, as enzimas, catalisadoras das reaes dos sistemas biolgicos,
so essenciais para a vida.
As enzimas so extremamente especficas, tanto que, para cada reao
existe uma enzima especfica para ela e tambm um substrato (reagente)
especfico. Elas podem ser classificadas de acordo com as reaes que
catalisam como mostra a tabela abaixo:

Tabela 1 Classificao enzimtica

Classificao
Oxidorrredutases
Transferases
Hidrolases

Liases

Tipo de reao catalisada

Transferncia de eltrons (ons
hidreto ou tomos de H)
Reaes de transferncia de grupos
Reaes de hidrlise (transferncia
de grupos funcionais da gua)
Adio de grupos a ligaes duplas,
ou formao de duplas ligaes pela
remoo de grupos
Transferncia de grupos dentro de

Isomerases

molculas para produzir formas

isomricas
Formao de ligaes C-C, C-S, C-O

Ligases

e C-N pelas reaes de condensao

acopladas clivagem do ATP

Alguns fatores influenciam a atividade enzimtica como, por exemplo, a

temperatura, pH e tempo. Conforme temperatura aumenta, a atividade
4

enzimtica tambm, porm somente at certa temperatura, em temperaturas

muito altas as enzimas se desnaturam, ou seja, a sua estrutura se rompe e,
portanto impossibilita a formao do complexo enzima-substrato. A relao
entre pH e atividade enzimtica a mesma da temperatura. E, quanto maior o
tempo que a enzima fica em contato com o substrato mais produtos sero
produzidos, enquanto houver substrato.
Algumas enzimas so usadas na indstria alimentcia, por exemplo, na
produo de bombons com recheios lquidos, que s so possveis devido
produo de acar invertido (Figura 1) pela enzima invertase (experimento
deste relatrio). Esse processo consiste na hidrlise, inverso ou simplesmente
quebra da sacarose em -glicose e -frutose, formando um xarope composto
de glicose, frutose e sacarose. A sacarose no possui propriedades redutoras,
por esse motivo pode-se medir a ao da invertase determinando a formao
de acar redutor (VILLELA, 1973).

Figura 1 Formao de acar invertido

Fonte: http://www.klickeducacao.com.br/conteudo/pagina_vestibular/0,6414,POR-525,00.html

A enzima invertase pode ser encontrada em leveduras, fungos,

bactrias, insetos, mamferos e vegetais, mas a principal fonte de invertase
industrial so as leveduras. A invertase de leveduras apresenta-se em duas
5

formas, pode estar localizada entre a membrana plasmtica e a parede celular

(80%) ou desprovidas de carboidratos e localizadas no protoplasma (20%)
(CABRAL, 1982; ISIK et al., 2003).
Para quantificar o teor de acares redutores em diversas amostras,
usa-se o mtodo Somogyi Nelson. Os acares redutores da amostra em
questo, aquecidos em meio alcalino, transformam-se em Enodiis que
reduzem o on Cprico presente no reativo de Somogyi, a on Cuproso. O
xido Cuproso (Cu2O), assim formado, reduz o composto Arsnio-Molibdico
para xido de Molibdnio de colorao azul cuja intensidade de cor
proporcional quantidade de acares redutores existentes na amostra,
podendo ser mensurado colorimetricamente em espectrofotmetros (NELSON,
1944; SOMOGYI, 1945).

2. OBJETIVO
Este experimento teve como objetivo medir o efeito da concentrao
enzimtica de levedura temperatura fixa de incubao

3. MTODO
Primeiramente, adicionou-se 100 L da levedura em um tubo Falcon
de 50mL e completou-se o tubo at o volume de 20mL com gua destilada.
Foram numerados 7 tubos Falcon de 1 a 7 e foram realizadas diluies,
utilizando pipetador automtico, nas quantidades mostradas na tabela abaixo:

Tubo

Tampo

gua

Enzima

Sacarose

Acetato

Destilada (

Diluda 1/200

0,3M ( L)

0,05M pH 4,6

L)

( L)

( L)
1
2
3
4
5
6
7

1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000

990
975
950
900
800
1000
1800

10
25
50
100
200
200

1000
1000
1000
1000
1000
1000
-

Em seguida, os tubos foram fechados e agitados vagarosamente na

horizontal e incubados 25C durante 15 minutos. A atividade enzimtica foi
interrompida ao adicionar 500 L de Sulfato de Zinco 5% em todos os tubos.
Ento adicionou-se 500 L de Hidrxido de Brio 0,3N em todos os tubos.
Eles foram fechados, agitados vagarosamente na horizontal e centrifugados a
3000 rpm durante 10 minutos.
Aps a centrifugao, retirou-se 1 mL do sobrenadante de cada tubo e
transferiu-se para outros respectivos tubos, que foram enumerados tambm de
1 a 7. Adicionou-se 1 mL de gua destilada e 1 mL do reativo de Somogyi em
todos os tubos. Fecharam-se os tubos, agitou-se vagarosamente na horizontal
e incubou-os em banho maria 95C durante 10 minutos.

Aps o banho, os tubos foram resfriados em gua corrente para poder

adicionar 1 mL do reativo de Nelson em todos eles. A seguir, completou-se o
volume dos tubos at a marcao de 10 mL com gua destilada, fechou-se os
tubos, agitou-os vagarosamente na horizontal, misturando bem. Por fim, fez-se
as leituras dos tubos no espectrofotmetro 535nm.

4. RESULTADOS E DISCUSSO
Aps a leitura dos tubos foram obtidas as seguintes absorbncias:
Tubo
1
2
3
4
5
6*
7*

Enzima diluda (mL)

0,01
0,025
0,05
0,1
0,2
0,2

ABS
0,054
0,058
0,069
0,111
0,211
0,049
0,051

*Os tubos 6 e 7 so controles

As absorbncias indicam a quantidade de acares redutores formados

(-glicose e -frutose). A partir desses dados, foi possvel construir um grfico
relacionando a concentrao de enzimas no tubo com suas respectivas
absorbncias:

Figura 2 Ao enzimtica da invertase

A partir do grfico pode-se observar que medida que a concentrao

de enzimas aumenta, aumenta tambm a absorbncias dos tubos, ou seja,
aumenta a quantidade de acares redutores, mostrando que a atividade
enzimtica aumenta conforme a concentrao de enzimas aumenta.
10

11

5. CONCLUSO
Pode-se concluir que a atividade da enzima invertase proporcional
sua concentrao em soluo, ou seja, quanto maior a concentrao, maior a
atividade.

12

6. BIBLIOGRAFIA

Berg, J. M., Tymoczko, J. L., & Stryer, L. (2008). Bioqumica (6 ed.). Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan.
Lehninger, D., & Cox, M. (2006). Princpios de Bioqumica (4 ed.). So Paulo:
Sarvier.
Marquez, L. D. (2007). Produo de acar invertido pelo uso de invertase
imobilizada em resinas. Uberlndia.
Nelson, N. (3 de fevereiro de 1944). A fotometric adaptaion of Somogyi
method for the determination of glucose. The Journal of Biological
Chemistry, 375-380.
Somogyi, M. (28 de maio de 1945). A New Reagent for Determination of
Sugars. The Journal of Biological Chemistry, 61-68.
Villela, G. G., Bacila, M., & Tastaldi, H. (1973). Tcnicas e Experimentos de
Bioqumica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan.

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