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AVICULTURA
2013
SUMRIO:
Orientaes gerais para colheita de material para exames laboratoriais
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1.2. Amostragem
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1.4.3. Embalagem
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1.4.8. Resultados
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1.6.2. rgos
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1.6.2.1. Articulaes
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1.6.2.2. Pintos
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1.6.11. Mecnio
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1.6.13. Penugem
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1.6.14. P
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1.6.17. Desinfetantes
33
1.6.18. gua
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1.6.19. Cama
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1.6.22. Parasitolgico
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ORIENTAES
GERAIS
PARA
COLHEITA
DE
MATERIAL
PARA
EXAMES
LABORATORIAIS
O sucesso de um teste de diagnstico inicia-se com a definio do material a ser coletado
de acordo com a suspeita clnica, a forma como o mesmo coletado e enviado ao
laboratrio, alm do envio de dados dos lotes ao mesmo (histrico: sinais clnicos, leses
macroscpicas e suspeita clnica). Em caso de dvidas, o mdico veterinrio deve entrar em
contato com o um dos responsveis tcnicos do CDMA.
1.2. Amostragem
A amostragem um dos pontos mais crticos para o sucesso do diagnstico, sendo um
nmero inadequado de amostras equivalente a amostras no representativas do lote. A
escolha das aves a serem amostradas deve ser direcionada de acordo com o objetivo do
teste a ser usado se para diagnstico ou monitoramento. No caso de diagnstico de
alguma enfermidade que esteja acometendo um lote a escolha das aves deve ser sempre
aleatria e em diferentes momentos da evoluo da doena (aves no incio dos sinais
clnicos e com sinais tpicos), devendo incluir machos e fmeas. Se o avirio dividido em
boxes, aves de cada boxe devem ser includas na amostragem de forma a assegurar que a
colheita de amostras seja representativa da populao de aves.
A quantidade de aves a ser amostrada num lote deve seguir tabelas de amostragem que
indicaro o nmero de amostras adequadas para que o resultado seja confivel em cada
prevalncia e ocorrncia estimada, dentro de um determinado intervalo de confiana (Tabela
1).
Tabela 1- Amostragem do lote indicando o nmero de animais a ser avaliado de acordo com prevalncia estimada (%) e os nveis de confiana
desejados (%)
Soros hemolisado;
Vsceras em putrefao;
Erro na concentrao do formol usado para fixao dos tecidos coletados para
exames histopatolgicos ou utilizao de frascos pequenos frgeis, ocasionando
compresso da vscera;
1.4.3. Embalagem:
Colocar as amostras em embalagens internas separadas, em sacos plsticos limpos e se
possvel estreis. A embalagem no pode estar danificada para evitar vazamentos e para
no contaminar outros materiais. Embalagens danificadas podem alterar os resultados.
A escolha do tamanho da embalagem deve ser em funo da finalidade do material a ser
enviado, da quantidade de material na embalagem, distncia e durao do transporte.
Pelo fato das caixas de isopor serem de difcil desinfeco as mesmas no retornam s
granjas de forma a evitar a transmisso de patgenos.
1.4.8. Resultados:
Este servio solicitado durante o cadastro do cliente. Na opo RELATRIO DE
RESULTADO na ficha de ordem de servio, o cliente seleciona qual melhor forma de envio
do resultado. O CDMA disponibiliza o Servio de entrega de resultado por E-mail, Correio,
Fax e Website. Os resultados sero enviados apenas aos requisitantes, j que
responsabilidade de divulgao a terceiros do mesmo.
Informao de Resultados Parciais por Telefone: Em casos especficos resultados
parciais so discutidos com os responsveis tcnicos do laboratrio, diretamente com o
cliente.
O prazo de envio de resultados enviado juntamente com o Oramento quando solicitado
pelo cliente via Website ou E-mail, sendo definido pelo tipo de exame laboratorial e de
Manual da Colheita para Aves
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acordo com a enfermidade a ser pesquisada. Entretanto, importante ressaltar que este
prazo depende de uma boa colheita, remessa e correta identificao, incluindo o sistema de
transporte da amostra at o laboratrio. Em caso de dvidas, favor entrar em contato com o
CDMA.
Funo
Prop seco/umedecido.
Gaze/
esponja
estreis
umedecidos
Gaze para suabe de arrasto.
Frasco
para
coleta
de
histopatolgico.
Agulhas e seringas.
Pipeta de Pasteur.
Embalagem de material.
Suabe
Coleta
de
amostras
clnicas
para
clnicas
para
isolamento de Salmonella
Frasco com gua peptonada.
Coleta
de
amostras
isolamento de Salmonella
FTA Card Elute.
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Puno cardaca: Realizar a conteno da ave com a imobilizao das pernas e asas com
uma das mos e puncionar no meio da regio da quilha (base do esterno), onde h um
vazio, tendo o cuidado para no atingir o pulmo. Inserir a agulha (40X12 aves adultas,
25X6 ou 25X7 pintos) no peito da ave de maneira perpendicular ao ponto de entrada e
paralelo coluna vertebral, at atingir o corao. Puxar lentamente o mbolo at obter a
quantidade desejada.
Aps colheita do sangue da ave pela puno cardaca, venosa ou outros mtodos de prtica
transferir delicadamente, sem a agulha, o contedo para um tubo siliconizado contendo em
seu interior um suabe (ou cotonete novo e limpo), sem anticoagulante Evite de formar
bolhas ou de apertar o mbolo da seringa rapidamente, pois isto pode causar hemlise na
amostra e inviabilizar o teste. Manter o frasco ou tubo inclinado, caso no tenha suporte
para mant-los em p, a temperatura ambiente para que o sangue coagule e libere o soro.
Aguardar a formao do cogulo a temperatura ambiente, protegendo o frasco de calor (sol)
(entre 3 a 12 horas). Quanto maior a temperatura ambiente mais rpido ser formado o
cogulo. Retirar o suabe, fechar o tubo e envi-lo refrigerado ao laboratrio. Caso precise
conserv-lo por mais de um dia antes de enviar ao laboratrio, congelar o soro. Neste caso
deve-se avisar ao laboratrio que o soro foi congelado, incluindo no pedido de exames.
Outra forma de enviar o soro, aps a formao do cogulo no tubo, pela transferncia do
soro para uma pipeta Pasteur ou microtubo tipo Eppendorf. No caso da pipeta Pasteur a
ponta deve ser lacrada com calor.
O sangue das demais aves pode ser coletado com a mesma seringa (no necessrio lavla, somente retirar o excesso).
NOTA:
1- Para se obter um soro sem hemlise, ao transferir o sangue da seringa para o para o
tubo, deve-se faz-lo cuidadosamente, deixando que o sangue escorra pela parede lateral
do tubo . Nunca esgotar o sangue de forma brusca e nem no fundo do tubo. Evitar mexer os
frascos ou tubos enquanto o sangue est em descanso para separar o sangue.
2- Identificar as amostras de forma legvel. Essa identificao no pode se apagar ou perder
durante o transporte.
3- Para evitar que os tubos se movimentem muito no transporte, pode fixa-los uns aos
outros com auxlio de fita crepe. Na caixa preencher os espaos vazios com papel, de forma
a evitar que os frascos se quebrem ou abram durante o transporte.
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1.6.2. RGOS
O que colher: rgos inteiros.
Traquia, pulmo, orofaringe, corao, fgado, bao, rins, bolsa cloacal, crebro, cerebelo,
nervo citico e seus plexos, proventrculo, moela, pncreas, tonsilas cecais, duodeno,
jejuno, leo, ceco.
Exames:
a) Microbiolgico (bacteriolgico, micolgico);
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b) MEM (Meio Essencial Mnimo) com 10% de soro bovino (ou 10% de soro fetal bovino)
com soluo de antibiticos (0,5X); BHI com soluo de antibiticos (0,5X); Caldo Triptose
Fosfato Tamponado (TPB) com soluo de antibiticos (0,5X);
c) Soluo de formol 10% (100 mL de formaldedo a 37% e 900 mL de gua v/v). Colocar
Recipiente:
a e b) Frasco coletor estril ou tubos tipo Falcon.
c) Frasco coletor para histopatologia
Temperatura da Amostra para Transporte:
a) Refrigerada (+ 2C a + 8C);
b) Congelada (- 20C). Biologia molecular: para alguns tipos de amostras a mesma poder
ser encaminhada a temperatura ambiente dependendo do meio de transporte. Para isso,
confirmar anteriormente com o CDMA.
c) Ambiente. Nunca congelar
Tempo Crtico para chegada ao Laboratrio:
a) At 24 horas;
b) At 48 horas; Biologia molecular: quando a amostra estiver em meio de transporte
apropriado (consultar quais diretamente com o CDMA) no h perodo crtico de chegada ao
laboratrio.
c) Remeter no mesmo tempo que as demais amostras. As amostras em soluo de formol
10%, mesmo no completamente xadas, podem ser enviadas ao laboratrio.
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Exames:
Bacteriolgico e/ ou biologia molecular
1.6.2.3. Barbela/ cabea inchada: coletar a cabea e pescoo inteiros (sem abrir) e
colocar em embalagem plstica estril. Caso outros rgos estejam acometidos no mesmo
quadro ver item 1.6.2 (Amostra: RGOS)
Temperatura da amostra para transporte:
Refrigerada (+ 2C a + 8C);
Tempo crtico para chegada ao laboratrio:
Ate 24 horas.
Exames:
Bacteriolgico e/ ou biologia molecular
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Quantidade:
Mnimo 5 aves/lote, em diferentes estgios da doena quando forem aves adultas. Para
aves de um dia pelo menos 10 aves/ lote
Observao:
Avaliar anteriormente o tempo de transporte das aves e a quantidade de gelo necessria
para manuteno da temperatura das carcaas uniforme entre a remessa do material e a
chegada ao laboratrio.
Quantidade:
Mnimo 5 aves/lote, em diferentes estgios da doena quando forem aves adultas. Para
aves de um dia pelo menos 10 aves/ lote
Observao:
Avaliar anteriormente o tempo de transporte das aves para que as mesmas cheguem vivas
e em condies de serem avaliadas e utilizadas para o diagnstico.
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Os suabes de cloaca devero ser enviados em frascos ou bolsas estreis que acompanham
o mesmo.
Tempo Crtico para chegada ao Laboratrio:
Refrigerado: At 24 horas.
Congelado: caso demore mais que 24 horas.
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ambientais que contenham Salmonella. Caso seja gaze ou esponja esterilizada e esta esteja
associada a um cordo segurar o suabe por este cordo e caminhar pelo galpo,
arrastando-o sobre a cama, principalmente entre comedouros e bebedouros, por 20 a 30
minutos (Figura 4). A gaze, esponja ou lenos umedecidos tambm podem ser utilizados
para recolher a poeira depositada sobre equipamentos, cantos da instalao, superfcie
externa de encanamentos e outros pontos de difcil acesso.
Colocar o suabe dentro do recipiente com o meio para transporte. Caso este suabe
contenha o cordo cort-lo antes de acondiciona-lo no recipiente com meio de transporte.
Mant-lo resfriado at o transporte.
b) Calar o prop esterilizado sobre a bota de plstico e caminhar pelo galpo,
principalmente entre comedouros e bebedouros. Retirar o prop utilizando luvas
descartveis e colocar dentro do recipiente com o meio para conservao.
Tempo Crtico para chegada ao Laboratrio: At 24 horas.
Figura 4 Suabe de arrasto: aves criadas sobre a cama (a) e aves criadas em gaiola
(b)
(a)
(b)
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Como colher:
a) Suabe: usando luvas descartveis, esfregar gaze estril por toda a superfcie interna da
caixa, preferencialmente sobre fezes, e coloc-la depois em recipiente adequado.
b) Fundo da caixa: usando luvas descartveis, dobrar o fundo das caixas, de modo que o
lado sujo com fezes que para dentro, e coloc-lo depois em recipiente adequado.
Quantidade:
a) 1 suabe/2 caixas. Mnimo: 50 amostras/lote, agrupando todos os suabes do lote num
mesmo recipiente.
b) Fundo de no mnimo 4 caixas, agrupados por lote em um mesmo recipiente.
NOTA: A quantidade poder ser ajustada em caso de monitoria oficial em caso de
legislao vigente.
Meio:
a) Suabes: gua peptonada tamponada esterilizada.
b) Fundo de caixa: nenhum.
Recipiente:
a) Suabes: Bolsa de amostra ou frasco estril;
b) Fundo de caixa: Sacos plsticos resistentes e limpos.
Temperatura da amostra para transporte:
a) Suabes: Refrigerados (+ 2C a + 8C);
b) Fundo de caixa: Refrigerado (+ 2C a + 8C) ou Temperatura ambiente.
Tempo crtico para chegada ao laboratrio:
Ate 24 horas.
Exames:
Bacteriolgico e Micolgico.
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Avirio.
Como colher:
Usando luvas descartveis e com auxlio de esptula esterilizada, recolher as amostras de
fezes frescas de vrios pontos do avirio (pelo menos de 10 pontos distintos do galpo),
incluindo amostras de descarga cecal. Colocar todas as amostras numa mesma embalagem
por lote.
Exames:
a) Bacteriolgico
b) Biologia Molecular e/ ou isolamento viral.
Quantidade:
a) 1 pool de 100 amostras/ncleo, colocadas num mesmo recipiente. Deve-se inserir
tambm nestas amostras fezes cecais. Mnimo 25 gramas.
b) 50 a 100g/lote. Deve-se inserir tambm nestas amostras fezes cecais.
Recipiente:
a) Sacos plsticos resistentes e estreis;
b) Bolsa de amostra ou frasco estril.
Temperatura da amostra para transporte:
Refrigerada (+2C a +8C).
Tempo crtico para chegada ao laboratrio:
At 24 horas.
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1.6.13. PENUGEM:
Onde colher:
Incubatrio
Como colher:
A penugem preferencialmente deve ser coletada por nascedouro e por dia de nascimento.
Quantidade:
100 g/ lote. Mnimo: 25 gramas.
Recipiente:
Embalagens estreis.
Temperatura da amostra para transporte:
Refrigerada (+2C a +8C);
Tempo crtico para chegada ao laboratrio:
At 24 horas
Exames:
Microbiolgico (bacteriolgico, micolgico). PCR
1.6.14. P:
Onde colher:
Instalaes como avirio, fbrica de raes e incubatrio.
Como colher:
Usando luvas descartveis e com auxlio de uma esptula estril, gaze ou lenos
umedecidos.
Quantidade:
Coletar 10 pontos de p avirio (aproximadamente 25 g)
Recipiente:
Embalagens estreis.
Temperatura da amostra para transporte:
Refrigerada (+2C a +8C);
Tempo crtico para chegada ao laboratrio:
At 24 horas
Exames:
Microbiolgico (nfase em bacteriolgico para Salmonella)
1.6.15. PLACAS DE EXPOSIO:
Onde colher:
Incubatrio
Como colher:
Manual da Colheita para Aves
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Para suabes: Transferir o contedo dos suabes (traquia ou outros rgos) pressionando
sobre o FTA Card (Figura 7). Quando for suabe: 20 aves comporo um carto. Cada 5
suabes de traquia compe 1 crculo do FTA Card.
Figura 7 Amostra sendo aplicada com suabe no FTA Card
Aps passar as amostras no FTA Card deixar secar em local protegido de luz e calor por
pelo menos 1 hora. Identificar no prprio FTA Card (alm do formulrio) quais amostras
foram impressas no mesmo, de quais lotes e para quais exames. Fech-lo para envio
(Figura 8).
Figura 8 Envelope do FTA Card e FTA Card prontos para submisso
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NOTA:
Solicitar com pelo menos 7 dias de antecedncia ao laboratrio os FTA Cards e demais
utenslios para colheita.
Temperatura da amostra para transporte:
Temperatura ambiente (via correio SEDEX)
Tempo crtico para chegada ao laboratrio:
No h.
1.6.17. DESINFETANTES:
Onde colher:
Incubatrio/ Granja
Exames:
Teste de eficincia
Quantidade:
Um frasco lacrado.
NOTA:
Enviar junto com o desinfetante a ser avaliado sua bula ou recomendaes do fabricante
quanto a diluio a ser usada, partida, data de validade.
Temperatura da amostra para transporte:
Ambiente
1.6.18. GUA:
Onde colher:
Incubatrio/ granjas/ abatedouros
Como colher:
Lavar as mos com gua e sabo. Usar luvas descartveis para a coleta. Limpar a parte
externa de torneiras ou nipple com auxlio de uma gaze ou leno umedecido fornecido pelo
laboratrio. Deixar a gua escorrer por pelo menos 1 minuto. Coletar a gua com o frasco
de colheita estril tomando o cuidado de no encostar na sada de gua. Certificar-se que o
volume coletado est correto para a anlise a ser realizada. Fechar bem o frasco, identificlo (melhor na tampa). Preencher no formulrio de pedido de exames os seguintes dados:
local da coleta, gua clorada ou no clorada, data, coletado pr, observaes adicionais.
Encaminhar a amostra imediatamente ao laboratrio. Para coletas de cisternas e caixas
dgua favor consultar o procedimento com a equipe tcnica do CDMA.
Quantidade:
Bacteriolgico: Mnimo de 100 mL de lquido.
Fsico-qumico: Mnimo de 2 litros de lquido.
Manual da Colheita para Aves
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NOTA:
Solicitar com antecedncia ao laboratrio os frascos estreis para coleta de gua.
Temperatura da amostra para transporte:
a) Refrigerada (+2C a +8C);
b) Temperatura ambiente (6 horas para anlise entre a coleta e o exame)
Tempo crtico para chegada ao laboratrio:
At 24 horas. Excepcionalmente at 48 horas contando o tempo de envio.
Exames:
Bacteriolgico e Fsico-qumico
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Recipientes:
Sacos plsticos resistentes e limpos.
Temperatura da amostra para transporte:
Ambiente.
Tempo crtico para chegada ao laboratrio:
At 24 horas.
Exames:
Bacteriolgico. Micolgico. Pesquisa de micotoxinas.
1.6.22. PARASITOLGICO:
Materiais analisados:
Fezes,
Intestino,
Cama de avirio,
Aves vivas.
Materiais necessrios:
Frascos ou sacos plsticos limpos.
Como colher:
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Colher em mdia 25 g de fezes frescas, incluindo descarga cecal de vrios pontos do galpo
(pelo menos 10 pontos), e acondicionar em saco plstico ou frasco novo e limpo.
Para amostras de intestino, colher a poro do intestino que contenha os parasitos a serem
identificados, acondicionar em frascos ou sacos plsticos limpos.
Cama de avirios: colher de pelo menos 10 pontos do galpo amostras de cama (parte
superior da mesma, evitar reas compactadas), de forma que ao final se obtenha pelo
menos 500 g. Acondicionar frascos ou sacos plsticos novos e limpos.
Aves vivas: com incio dos sinais clnicos (ver item 1.6.4)
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Tabela 2 Material e exames recomendados para anlise de acordo com a suspeita clnica (doenas virais)
Agente
Etiolgico
Suspeita clnica
Biologia molecular
Histopatolgico
Adenovirose
Adenovrus
grupo I
Fgado e intestino
Anemia Infecciosa
Girovrus
20-30 soros
Artrite viral
Reovrus
20-30 soros
Bouba aviria
Avipoxvrus
Bronquite infecciosa
Coronavrus
20-30 soros
Traquia, rins, pulmes, intestino (se for forma entrica), oviduto, testculo,
tonsilas cecais. Suabes de traquia e cloaca.
Avibirnavrus
20-30 soros
Doena de Marek
Herpesvrus
SNC (inteiro), nervos perifricos e seus plexos, fgado, prventrculo, moela, intestinos, rgos com leses tumorais
Doena de Newcastle
Avulavrus
20-30 soros
Encefalomielite aviria
Picornavrus
20-30 soros
Influenza aviria
Influenzavirus
A
30 soros
Laringotraquete
infecciosa
Iltovrus
20-30 soros
Leucose aviria
Retrovrus
Mnimo 20 soros
ou albmen ou
mecnio: ELISA
de captura
SNC (inteiro), nervos perifricos e seus plexos, fgado, prventrculo, moela, intestinos, rgos com leses tumorais
Pneumovirose
Metapneumov
20-30 soros
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rus
Reticuloendoteliose
Retrovrus
Sndrome de Enterite e
Mortalidade dos Perus
(PEMS)
Coronavrus e
associaes
Sndrome da queda de
postura (EDS)
Aviadenovrus
20-30 soros
Sndrome do refugo ou
nanismo
Reovrus e
associaes
20-30 soros
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Tabela 3 Material e exames recomendados para anlise de acordo com a suspeita clnica (doenas bacterianas)
Agente
Etiolgico
Suspeita clnica
Microbiolgico
Biologia molecular
Histopatolgico
Bordeteliose
Bordetella avium
Traquia (inteira)
Botulismo
Clostridium
botulinum
20 soros
Campilobacteriose
Campylobacter
jejuni
Clera aviria
Pasteurella
multocida
20 soros
Colibacilose
Escherichia coli
Coriza infecciosa
Avibacterium
paragallinarum
Enterite necrticoa
Clostridium
perfringens
Enterite ulcerativa
Clostridium
colinum
Micoplasmose aviria
(MG, MS, MM, MI)
M. gallisepticum,
M. synoviae, M.
meleagridis, M.
iowae
20-30 soros.
Coletas oficiais
consultar
Ornitobacteriose
Ornithobacterium
rhinotracheale
20-30 soros
Salmonelose aviria
(tifo e pulorose)
Salmonella
Pullorum, S.
Gallinarum
20-30 soros.
Coletas oficiais
consultar
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Salmonelose aviria
(Paratifo)
S. Enteritidis,
S. Typhimurium,
20-30 soros.
Coletas oficiais
consultar
Salmonella spp.
Tabela 4 Material e exames recomendados para anlise de acordo com a suspeita clnica (doenas fngicas, parasitrias, doenas
metabolicas)
Agente Etiolgico
Suspeita clnica
Biologia molecular
Histopatolgico
Aspergilose
Aspergillus e outros
fungos
Coccidiose
Eimeria
Intestinos ou aves
Encefalomalcia, Ditese
exudativa, Distrofia
muscular
Deficincia vitamina E e
selnio
Micotoxicoses
Fungos e Micotoxinas
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Redao:
Profa. Josiane Tavares de Abreu
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