0003183742122COINV7.

AMYL2
α-Amylase EPS ver.2 Enzimas
Informações para encomenda
Analisador(es) onde o(s) suporte(s) de reagentes
cobas c pack(s) pode(m) ser utilizado(s)
03183742 122 α-Amylase EPS ver.2 (300 testes) ID de Sistema 07 6609 7 COBAS INTEGRA 400 plus
10759350 190 Calibrator f.a.s. (12 × 3 mL) ID de Sistema 07 3718 6
10759350 360 Calibrator f.a.s. (12 × 3 mL, nos EUA) ID de Sistema 07 3718 6
12149435 122 Precinorm U plus (10 × 3 mL) ID de Sistema 07 7999 7
12149435 160 Precinorm U plus (10 × 3 mL, nos EUA) ID de Sistema 07 7999 7
12149443 122 Precipath U plus (10 × 3 mL) ID de Sistema 07 8000 6
12149443 160 Precipath U plus (10 × 3 mL, nos EUA) ID de Sistema 07 8000 6
05117003 190 PreciControl ClinChem Multi 1 (20 × 5 mL) ID de Sistema 07 7469 3
05947626 190 PreciControl ClinChem Multi 1 (4 × 5 mL) ID de Sistema 07 7469 3
05947626 160 PreciControl ClinChem Multi 1 (4 × 5 mL, nos EUA) ID de Sistema 07 7469 3
05117216 190 PreciControl ClinChem Multi 2 (20 × 5 mL) ID de Sistema 07 7470 7
05947774 190 PreciControl ClinChem Multi 2 (4 × 5 mL) ID de Sistema 07 7470 7
05947774 160 PreciControl ClinChem Multi 2 (4 × 5 mL, nos EUA) ID de Sistema 07 7470 7

Português Princípio do teste10,11

Informações do sistema Ensaio colorimétrico enzimático de acordo com IFCC.
Teste AMYL2, ID do teste 0‑609 (soro, plasma) Oligossacáridos definidos, como o 4,6‑etilideno-(G7)-p‑nitrofenil‑(G1)-
α,D‑maltoheptaósido (etilideno‑G7PNP), são clivados pela acção catalítica
Teste AMYU2, ID do teste 0‑509 (urina) das α‑amilases. Os fragmentos G2PNP, G3PNP e G4PNP assim formados
Finalidade são completamente hidrolisados em p‑nitrofenol e glucose pela
Teste in vitro para a determinação quantitativa da actividade catalítica da α‑glicosidase.
α‑amilase (1,4‑α‑D‑glucano: glucanoidrolase; EC 3.2.1.1) em soro, plasma Esquema da reacção simplificado:
e urina humanos em sistemas COBAS INTEGRA.
Sumário1,2,3,4,5,6,7,8,9 α‑amilase
As α‑amilases (1,4‑α‑D‑glicanohidrolases, EC 3.2.1.1) catalisam a 5 etilideno‑G7PNPa) + 5 H2O 2 etilideno‑G5 + 2 G2PNP
degradação hidrolítica dos hidratos de carbono poliméricos, como a
amilose, a amilopectina e o glicogénio, mediante clivagem das ligações + 2 etilideno‑G4 + 2 G3PNP + etilideno‑G3 + G4PNP
1,4‑α‑glicosídicas. Nos polissacáridos e nos oligossacáridos, diversas
a) PNP = p‑nitrofenol
ligações glicosídicas são hidrolisadas simultaneamente. Apesar de ser a
mais pequena unidade hidrolisada, a maltotriose só é convertida muito α-glucosidase
lentamente em maltose e glucose. Existem dois tipos distintos de
α‑amilases: a de tipo pancreático (tipo P) e a de tipo salivar (tipo S). 2 G2PNP + 2 G3PNP + G4PNP + 14 H2O 5 PNP + 14 Gb)
Enquanto a α‑amilase de tipo P é atribuída quase exclusivamente ao b) G = Glucose
pâncreas e, logo, é específica do órgão, a de tipo S tem origem em
diversos locais. Além de se encontrar na saliva, existe também nas A intensidade da cor do p‑nitrofenol formado é directamente proporcional à
lágrimas, no suor, no leite materno, no líquido amniótico, nos pulmões, nos actividade da α‑amilase. É determinada medindo o aumento da
testículos e no epitélio das trompas de Falópio. absorvância a 409 nm.
As determinações da α-amilase são importantes no diagnóstico das Reagentes - soluções de trabalho
doenças pancreáticas, dado que estas apresentam poucos sintomas
clínicos específicos. Estas determinações são utilizadas sobretudo no R1 HEPES: 52.4 mmol/L; cloreto de sódio: 87 mmol/L; cloreto de
diagnóstico e monitorização terapêutica da pancreatite aguda. Além de cálcio: 0.08 mmol/L; cloreto de magnésio: 12.6 mmol/L;
ocorrer na pancreatite aguda e na fase inflamatória da pancreatite crónica, α‑glucosidase (microbiana): ≥ 66.8 µkat/L; pH 7.0 (37 °C);
também se pode observar uma hiperamilasemia em casos de insuficiência detergente; estabilizantes
renal (como resultado de filtração glomerular reduzida), bem como nos
tumores dos pulmões ou dos ovários, inflamação pulmonar, doenças das SR HEPES: 52.4 mmol/L; etilideno‑G7‑PNP: 22 mmol/L; pH 7.0
glândulas salivares, cetoacidose diabética, traumatismo craniano, (37 °C); detergente; estabilizantes
intervenções cirúrgicas e macroamilasemia. Para confirmar a
especificidade pancreática é sempre aconselhável a determinação de uma O R1 fica na posição B e o SR na posição C.
outra enzima específica do pâncreas, como a lipase ou a α‑amilase Precauções e avisos
pancreática. Preste atenção a todos os avisos e precauções incluídos na
Foram descritos diversos métodos para determinação da α‑amilase. Estes Secção 1 / Introdução deste Manual de Métodos.
determinam a redução da quantidade de substrato por viscometria, Nos EUA: Atenção: Segundo a lei federal norte-americana, a venda deste
turbidimetria, nefelometria e amiloclastia ou através da formação de um dispositivo é restrita a médicos ou por prescrição destes.
produto de degradação, sacarogénico ou cinético, através de reacções
sucessivas catalisadas por enzimas. O método cinético aqui descrito Este dispositivo contém componentes que estão classificados da seguinte
baseia-se na clivagem bem conhecida de forma, de acordo com o Regulamento (CE) N.º 1272/2008:
4,6‑etilideno‑(G7)‑1,4‑nitrofenil‑(G1)‑α,D‑maltoheptaósido (Ethylidene Cloridrato de 2-metil-2H-isotiazol-3-ona.
Protected Substrate = EPS) pela α‑amilase e hidrólise subsequente de
todos os produtos de degradação em p‑nitrofenol com a ajuda da EUH 208 Pode provocar uma reacção alérgica.
α‑glucosidase (libertação de cromóforo 100 %). Os resultados destes A rotulagem de segurança do produto cumpre as directivas EU GHS.
métodos estão correlacionados com os obtidos por HPLC.
Preparação dos reagentes
Pronto a ser utilizado

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AMYL2
α-Amylase EPS ver.2 Enzimas

Armazenamento e estabilidade Amostra 4 µL 4 µL

Validade a 2‑8 °C Consulte o prazo de validade SR 20 µL
no rótulo do cobas c pack Volume total 128 µL
No analisador a 10‑15 °C 12 semanas
Calibração
Colheita e preparação das amostras9,12
Calibrador Calibrator f.a.s.
Para colheita e preparação das amostras, utilize apenas tubos ou cuvetes
de amostra apropriados. Utilize água desionizada como
Apenas as amostras indicadas em seguida foram testadas e consideradas calibrador zero.
aceitáveis.
Soro Modo de calibração Regressão linear
Plasma: Plasma tratado com heparina (Li‑, Na‑, NH4+‑) ou EDTA (K2‑, K3‑) Repetição da calibração Duplicado recomendado
Os valores de plasma tratado com EDTA são aproximadamente 5‑10 % Intervalo de calibração Cada lote e conforme necessário,
inferiores aos valores séricos.
segundo os procedimentos de
Os tipos de amostras indicados foram testados usando tubos de colheita controlo da qualidade
de amostras seleccionados e comercialmente disponíveis à data do teste,
i.e. nem todos os tubos dos diferentes fabricantes disponíveis no mercado O intervalo de calibração pode ser excedido com base na verificação
foram testados. Os sistemas de colheita de amostras de diferentes aceitável da calibração pelo laboratório.
fabricantes podem, por sua vez, conter materiais diferentes que, em alguns Rastreabilidade: Este método foi padronizado manualmente contra
casos, podem afectar os resultados dos testes. Se processar amostras em reagente Roche (de acordo com IFCC).
tubos primários (sistemas de colheita de amostras) consulte as instruções
do fabricante dos tubos. Controlo da qualidade
Urina: Colha a urina sem aditivos. A α‑amilase é instável em urina ácida. Controlo da qualidade para soro e Precinorm U plus ou
Proceda imediatamente ao ensaio ou ajuste o pH para um intervalo alcalino para plasma PreciControl ClinChem Multi 1
(pH ligeiramente superior a 7) antes de armazenar.13
Consulte a secção sobre limitações e interferências, para obter Precipath U plus ou
informações mais pormenorizadas sobre possíveis interferências nas PreciControl ClinChem Multi 2
amostras.
Controlo da qualidade para urina Para o controlo da qualidade em
As amostras que contêm precipitado têm de ser centrifugadas antes da rotina, recomendam-se controlos
realização do ensaio.
quantitativos de urina.
Estabilidade no soro:13 7 dias a 15‑25 °C Intervalo de controlo 24 horas (recomendado)
1 mês a 2‑8 °C Sequência de controlo Definida pelo utilizador
Estabilidade na urina:14 2 dias a 15‑25 °C Controlo após calibração Recomendado
10 dias a 2‑8 °C Para o controlo da qualidade, utilize os materiais de controlo indicados na
As afirmações de estabilidade das amostras foram estabelecidas por dados secção "Informações para encomenda". Adicionalmente, pode ser utilizado
experimentais pelo fabricante ou com base na literatura de referência, e outro material de controlo adequado.
apenas nos quadros de temperaturas/tempo indicados na folha de Os intervalos e limites de controlo deverão ser adaptados às exigências
métodos. Cada laboratório é responsável por utilizar todas as referências específicas de cada laboratório. Os valores obtidos devem situar-se dentro
disponíveis e/ou os seus próprios estudos, para determinar critérios de dos limites definidos. Cada laboratório deve estabelecer as medidas
estabilidade específicos para o seu laboratório. correctivas a tomar no caso de os valores se situarem fora dos limites
definidos.
Materiais fornecidos
Cumpra os regulamentos governamentais aplicáveis e as directrizes locais
Consulte a secção “Reagentes - soluções de trabalho” para mais de controlo da qualidade.
informações sobre os reagentes.
Cálculo dos resultados
Ensaio
O analisador COBAS INTEGRA 400 plus calcula automaticamente a
Para assegurar a correcta execução do ensaio é importante cumprir as concentração de analito de cada amostra. Para mais informações, consulte
instruções fornecidas neste documento para o analisador utilizado. a secção Análise de dados na Ajuda online.
Consulte o manual do operador apropriado para obter instruções mais
específicas sobre o ensaio realizado neste analisador. Factor de conversão: U/L × 0.0167 = μkat/L
Aplicação para soro, plasma e urina Limitações – interferências
Não pipete com a boca e certifique-se de que o reagente não entra em
Definição do teste contacto com a pele. (A saliva e o suor contêm α‑amilase!)
Modo de medição Absorvância Critério: Recuperação dentro de ± 10 % do valor inicial.
Modo de cálculo da abs. Cinético Soro/plasma
Modo de reacção R1‑S‑SR Icterícia:15 Nenhuma interferência significativa até um índice I de 52 para a
bilirrubina conjugada e de 76 para a bilirrubina não conjugada
Sentido da reacção Aumento (concentração aproximada de bilirrubina conjugada: 889 µmol/L ou
52 mg/dL; concentração aproximada de bilirrubina não conjugada:
Comprimento de onda A/B 409/659 nm 1300 µmol/L ou 76 mg/dL).
Primeiro/último cálc. 50/69 Hemólise:15 Nenhuma interferência significativa até um índice H de 260
Unidade U/L (concentração aproximada de hemoglobina: 161 µmol/L ou 260 mg/dL).
Lipemia (Intralipid):15 Nenhuma interferência significativa até um índice L de
Parâmetros de pipetagem 2200. Existe uma correlação fraca entre o índice L (corresponde à turbidez)
e a concentração de triglicéridos.
Soro/plasma/urina Diluente (H2O)
Fármacos: Não se encontrou qualquer interferência com concentrações
R1 100 µL terapêuticas utilizando painéis de fármacos comuns.16,17 Excepções: Os

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α-Amylase EPS ver.2 Enzimas

fármacos baseados na icodextrina podem provocar resultados de amilase Rácio amilase/clearance da creatinina (RACC)13
artificialmente baixos.18 A RACC é calculada a partir da actividade da amilase e da concentração
Anticoagulantes: Observaram-se interferências com citrato e fluoreto.12 da creatinina. As amostras de soro e de urina devem ser colhidas na
Em casos muito raros, a gamapatia, em particular a de tipo IgM mesma altura.
(macroglobulinemia de Waldenstroem), pode produzir resultados pouco amilase de urina [U/L] × creatinina sérica [mg/L]
fiáveis.19 RACC [%] = × 100
amilase sérica [U/L] × creatinina na urina [mg/L]
Urina
Fármacos: Não se encontrou qualquer interferência com concentrações A RACC é aproximadamente igual a 2‑5 %.
terapêuticas utilizando painéis de fármacos comuns.17 Cada laboratório deve verificar a transferibilidade dos valores teóricos para
Critério: Recuperação dentro de ± 10 % do valor inicial, com uma a sua própria população de pacientes e, se necessário, determinar os seus
actividade da amilase correspondente a 460 U/L (7.68 µkat/L). próprios intervalos de referência.
Hemólise: Nenhuma interferência significativa até uma concentração de Dados específicos sobre o desempenho
hemoglobina de 311 µmol/L (500 mg/dL). São apresentados a seguir dados representativos do desempenho dos
Fosfato: Nenhuma interferência significativa do fosfato até uma analisadores COBAS INTEGRA. Os resultados podem diferir de laboratório
concentração de 70 mmol/L (217 mg/dL). para laboratório.
Ureia: Nenhuma interferência significativa da ureia até uma concentração Precisão
de 1500 mmol/L (9009 mg/dL). A precisão foi determinada utilizando amostras humanas e controlos num
Quando o objectivo é o diagnóstico, os resultados devem ser sempre protocolo interno com repetibilidade (n = 21) e precisão intermédia (1
interpretados em conjunto com a história clínica do paciente, o exame alíquota por série, 1 série por dia, 21 dias). Obtiveram-se os seguintes
clínico e outros resultados. resultados:
ACÇÃO NECESSÁRIA Soro/plasma
Programação de lavagem especial: É imprescindível efectuar ciclos de
lavagem suplementares sempre que determinadas combinações de testes Repetibilidade Nível 1 Nível 2
sejam executadas em conjunto nos analisadores COBAS INTEGRA. Média 76 U/L 192 U/L
Consulte a Folha de Métodos do CLEAN para obter mais instruções e para
obter a versão mais recente da lista de ciclos de lavagem Extra. (1.3 µkat/L) (3.2 µkat/L)
Sempre que necessário, devem ser implementados programas CV 1.4 % 1.2 %
especiais de lavagem/carry-over (arrastamento) antes de reportar os
resultados obtidos com este teste. Precisão intermédia Nível 1 Nível 2
Limites e intervalos Média 73 U/L 181 U/L
Intervalo de medição (1.2 µkat/L) (3.0 µkat/L)
Soro/plasma/urina
3‑2000 U/L (0.05‑33 µkat/L) CV 1.4 % 1.4 %
Determine as amostras com actividades superiores através da função de Urina
reanálise. As amostras são diluídas a 1:5 através da função de reanálise.
Os resultados obtidos de amostras diluídas utilizando a função de reanálise Repetibilidade Nível 1 Nível 2
são multiplicados automaticamente pelo factor 5.
Média 39.4 U/L 201 U/L
Limites inferiores de medição
(0.66 µkat/L) (3.4 µkat/L)
Limite inferior de detecção do teste:
3 U/L (0.05 µkat/L) CV 0.8 % 0.4 %
O limite de detecção inferior representa o nível de analito mais baixo
mensurável passível de ser distinguido de zero. É calculado como o valor Precisão intermédia Nível 1 Nível 2
situado 3 desvios padrão (DP) acima de uma amostra zero (amostra Média 36.7 U/L 189 U/L
zero + 3 DP, repetibilidade, n = 21).
(0.61 µkat/L) (3.2 µkat/L)
Valores teóricos9
CV 1.0 % 1.0 %
Soro/plasma
Comparação dos métodos
Homens/Mulheres 28‑100 U/L (0.47‑1.67 μkat/L)
Os valores de α‑amilase das amostras de soro, plasma e urina humanos
Urina espontânea obtidos num analisador COBAS INTEGRA 700 utilizando o reagente
COBAS INTEGRA α‑Amylase EPS ver.2 (AMYL2) (y) foram comparados
Homens 16‑491 U/L (0.27‑8.20 μkat/L) com os valores determinados utilizando o reagente correspondente num
analisador Roche/Hitachi 917 (x) e com o reagente anterior (AMYLL) num
Mulheres 21‑447 U/L (0.35‑7.46 μkat/L) analisador COBAS INTEGRA 700 (x).
Quociente de α‑amilase/creatinina Soro/plasma
Homens 58‑283 U/g (0.97‑4.73 μkat/g) Analisador Roche/Hitachi 917 Tamanho da amostra (n) = 64
Mulheres 75‑390 U/g (1.25‑6.51 μkat/g) Passing/Bablok20 Regressão linear
Quociente de α‑amilase/creatinina y = 0.98× + 0.51 U/L y = 1.00× - 1.28 U/L
Para permitir flutuações da actividade da α‑amilase na urina, é т = 0.987 r = 1.000
aconselhável determinar o quociente α‑amilase/creatinina. Para tal, é
necessário determinar a actividade da α‑amilase e a concentração de DP (md 95) = 5.57 Sy.x = 5.59
creatinina na urina espontânea. As actividades das amostras variaram entre 22 e 1900 U/L (0.37 e
α‑amilase [U/L ou µkat/L] 31.7 μkat/L).
Quociente [U/g ou µkat/mmol] =
creatinina [g/L ou mmol/L]

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α-Amylase EPS ver.2 Enzimas

Analisador COBAS INTEGRA 700 Tamanho da amostra (n) = 64 14 Hohenwallner W, Hägele EO, Scholer A, et al. Bestimmung von alpha-
Amylase mit p-Nitrophenylmaltoheptaosid als Substrat. Ber Öster Ges
Passing/Bablok20 Regressão linear Klin Chem 1983;6:101-112.
y = 0.98× + 1.72 U/L y = 0.97× + 3.01 U/L 15 Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of
т = 0.982 r = 1.000 Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation.
Clin Chem 1986;32:470-475.
DP (md 95) = 12.22 Sy.x = 5.71
16 Breuer J. Report on the Symposium “Drug effects in Clinical Chemistry
As actividades das amostras variaram entre 22 e 1930 U/L (0.37 e Methods”. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34:385-386.
32.2 μkat/L). 17 Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry:
Urina recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug
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Analisador Roche/Hitachi 917 Tamanho da amostra (n) = 59
18 Gokal R, Moberly J, Lindholm B, et al. Metabolic and laboratory effects
Passing/Bablok20 Regressão linear of icodextrin. Kidney Int 2002;62(81):62-71.
y = 0.98× - 0.32 U/L y = 0.99× - 1.03 U/L 19 Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry
assays: mechanisms, detection and prevention.
т = 0.988 r = 1.000 Clin Chem Lab Med 2007;45(9):1240-1243.
DP (md 95) = 17.3 Sy.x = 6.54 20 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure
As actividades das amostras variaram entre 0.66 e 1767 U/L (0.01 e for method transformation. Application of linear regression procedures
29.5 μkat/L). for method comparison studies in clinical chemistry, Part III.
J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790.
Analisador COBAS INTEGRA 700 Tamanho da amostra (n) = 59 Nesta Folha de Métodos é sempre utilizado um ponto como separador de
Passing/Bablok20 Regressão linear casas decimais para marcar a separação entre o número inteiro e as partes
fraccionadas de um número decimal. Não são utilizados separadores de
y = 0.96× + 0.54 U/L y = 0.95× + 1.92 U/L milhares.
т = 0.991 r = 1.000 Símbolos
DP (md 95) = 18.6 Sy.x = 6.28 A Roche Diagnostics utiliza os seguintes símbolos e sinais além dos
listados na norma ISO 15223‑1 (nos EUA: visite dialog.roche.com para
As actividades das amostras variaram entre 0.64 e 1853 U/L (0.01 e consultar a definição dos símbolos utilizados):
30.9 μkat/L).
Bibliografia Conteúdo do dispositivo
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Pathobiochemie, 3rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag 1995. homogeneização
2 Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik für die Praxis, 2nd ed. GTIN Global Trade Item Number
Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag 1991:354-361.
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11 Kurrle-Weittenhiller A, Hölzel W, Engel D, et al. Method for the
determination of total and pancreatic α-amylase based on 100 %
cleavage of the protected substrate ethylidiene-4-nitrophenyl-
maltoheptaoside. Clin Chem 1996;42(S6):S98.
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AACC Press 1997, 2nd edition 1997.
13 Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. Philadelphia
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