09/09/2019

MORFOLOGIA E ULTRA-
ESTRUTURA DE BACTÉRIAS

Microbiologia FFI 0751

Profa. Dra. Ilana Camargo
Continuação (aula 5)

MORFOLOGIA E ULTRA-ESTRUTURA DE BACTÉRIAS

✓ Parede
✓ Estruturas internas à parede
✓ Membrana citoplasmática
✓ Citoplasma
✓ Inclusões
✓ Endósporos
o Estruturas externas à parede
o Camada limosa ou cápsula
o Flagelos
o Fímbrias e Pili
o Locomoção da célula bacteriana
o Flagelar
o Deslizamento
o Taxias (fototaxia, quimiotaxia)

1
 09/09/2019

Glicocálice
Camada limosa e cápsula

Estruturas externas à parede – Camada limosa ou

cápsula

Glicocálice/Glicocalix: Camada de material viscoso que

envolve as células bacterianas.

Produzido na maioria dos casos dentro da célula e

excretado para a superfície celular.

Composto de polímeros (viscoso e gelatinoso) situado

externamente à parede celular.

Cápsula – Se estiver organizado e acoplado firmemente à parede

celular (exclui partículas pequenas como tinta naquim);

Camada limosa – Se estiver desorganizado, sem forma e acoplado

frouxamente à parede celular → tende a ser solúvel em água.

2
 09/09/2019

Estruturas externas à parede – Camada limosa ou

cápsula

Podem ser:
espessas ou delgadas,
rígidas ou flexíveis,

dependendo na sua composição química

e grau de hidratação

Cápsula

Cápsulas bacterianas. (a) Demonstração da presença de cápsulas por coloração negativa

com tinta nanquim em Acinetobacter, observada em MO de fase. (b) Micrografia eletrônica de
uma seção fina de célula de Rhizobium trifolli, corada com vermelho de rutênio, revelando a
cápsula. Madigan et el., 2004.

3
 09/09/2019

Estruturas externas à parede – Camada limosa ou

cápsula
Composição:
Único tipo de açúcar –homopolissacarídeos;
Ex.: Streptococcus mutans
Sacarose – glicina = polímero para aderir às
superfícies lisas dos dentes e causa a cárie! Sem
a glicina, a bactéria seria expelida pelo fluxo da
saliva.

Mais de um tipo de açúcar – heteropolissacarídeos;

Ex. Streptococcus pneumoniae
Possui a cápsula tipo VI de Glicose, Galactose e
Ramnose.

Estruturas externas à parede – Camada limosa ou

cápsula

A determinação dos constituintes da cápsula é

normalmente um passo importante na identificação de
certas bactérias patogênicas.

Algumas cápsulas são de polipeptídeos.

Ex. Bacillus anthracis (agente do carbúnculo/ antrax)
– Cápsula de ácido glutâmico.

4
 09/09/2019

Funções do glicocálice:

-Aderência à superfícies sólidas;

- Proteção contra o dessecamento temporário se ligando a

moléculas de água;

-Reservatório de alimentos;

-Evita a adsorção e lise da célula por bacteriófagos;

Vírus que atacam bactérias.

-Proteção para as bactérias patogênicas contra fagocitose por

células sanguíneas, aumentando a chance de infecção.

Praga na indústria – responsável pelo acúmulo de lodo nos

equipamentos, afetando a qualidade dos produtos.
http://www.nehmi-ip.com.br/imagens_servicos/bio_7_p.gif

Estruturas externas à parede – Camada limosa ou

cápsula
Glicocálice: cápsulas e camadas limosas
– Maior parte de natureza polissacarídica
(exopolissacarídeos = EPS).

5
 09/09/2019

EPS e Biofilme
Sob determinadas condições, os microrganismos se aderem, interagem
com as superfícies e iniciam crescimento celular.
Essa multiplicação dá origem a colônias e quando a massa celular é
suficiente para agregar nutrientes, resíduos e outros microrganismos
(camada espessa), está formado o que se denomina BIOFILME.

➢São complexos ecossistemas microbiológicos embebidos em uma matriz

de polímeros orgânicos, aderidos a uma superfície;

➢Forma-se um cultivo puro ou uma associação com outros

microrganismos.

➢Os microrganismos em biofilmes estão mais resistentes à ação de

agentes químicos e físicos.

http://www.textbookofbacteriology.net/biofilm_formation.gif
http://ehp.niehs.nih.gov/realfiles/docs/1998/106-12/innovations.html

6
 09/09/2019

Biofilmes bacterianos

Fixação Crescimento Separação

Células
planctônicas

Biofilme

7
 09/09/2019

Biofilme

Encontrado onde há água e suporte sólido

Dentes, canos, lentes de contato, sistemas digestivos

8
 09/09/2019

MORFOLOGIA E ULTRA-ESTRUTURA DE BACTÉRIAS

✓ Parede
✓ Estruturas internas à parede
✓ Membrana citoplasmática
✓ Inclusões
✓ Endósporos
o Estruturas externas à parede
✓ Camada limosa ou cápsula
o Fímbrias e Pili
o Flagelos
o Locomoção da célula bacteriana
o Flagelar
o Deslizamento
o Taxias (fototaxia, quimiotaxia)

Fímbrias e Pili

Estruturas filamentosas compostas por proteínas que se

projetam a partir da superfície de uma célula, podendo
apresentar muitas funções

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/57/caphtm/cap0401.htm http://www.dbi.ufla.br/Ledson/LBMP/Bact24.htm

9
 09/09/2019

Estruturas externas à parede – Fímbrias

• Mais curtas e mais numerosas que flagelo.

• Função de adesão.
• Pilina: proteína formadora, distribuídas de modo helicoidal
em torno de um eixo.

• Neisseria gonorrhoeae –
agente causador da
gonorréia: fímbrias
ajudam a colonização das
membranas mucosas.

Fímbrias em célula em divisão de

E. coli (Fonte: Tortora et al.,
2005).

http://www.nibib.nih.gov/NewsEvents/ResearchHighlights/Archive/2007/06June07

Estruturas externas à parede – Fímbrias

➢ Podem ser vistos somente pelo Microscópio Eletrônico

➢ Penetram na parede celular, mas não possuem ancoragem

complexa como os flagelos

➢ São ocos, mas possuem Pilina, proteínas arranjadas em

forma de espiral em torno de um espaço central para formar a
estrutura.

Em infecção, as fímbrias auxiliam a

bactéria patogênica a aderir às
células superficiais do trato
respiratório, intestinal ou
geniturinário.
http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Fimbriae%2C+Bacterial&lang=1

10
 09/09/2019

Pili

Estruturas externas à parede – Pili

• Pili (singular Pilus): mais longos que as fímbrias e há apenas um

ou dois por célula.
• Mesma estrutura das fímbrias.
• Função sexual: auxilia a aproximação entre duas células
bacterianas para que ocorra transferência de DNA.

Presença de pilus em célula de E. coli, revelada pela adesão de

bacteriófagos ao pilus. O contato entre duas bactérias conjugantes
é feito pelo pilus, que as aproxima por retração
(despolimerização da pilina). Fonte: Madigan et al., 2004

11
 09/09/2019

Estruturas externas à parede – Pili

• Outras funções:
– aderência
– a classe de pili tipo IV realiza uma forma incomum
de motilidade: motilidade pulsante!!
Por deslizamento: movimento ao longo de uma
superfície sólida através da extensão dos pili
seguida da sua retração.

MORFOLOGIA E ULTRA-ESTRUTURA DE BACTÉRIAS

✓ Parede
✓ Estruturas internas à parede
✓ Membrana citoplasmática
✓ Inclusões
✓ Endósporos
o Estruturas externas à parede
✓ Camada limosa ou cápsula
✓ Fímbrias e Pili
o Flagelos
o Locomoção da célula bacteriana
o Flagelar
o Deslizamento
o Taxias (fototaxia, quimiotaxia)

12
 09/09/2019

Flagelos

Estruturas externas à parede – Flagelos

Os flagelos são muitas vezes mais longos que as células, mas o

diâmetro é muito fino e por isso não podem ser vistos com o
microscópio óptico.

Procedimentos de coloração colocam uma camada de corante

precipitado na superfície dos flagelos fazem com que apareçam mais
espessos e, assim, visíveis ao microscópio óptico.

Os corantes são a base de acetato de pararosanilina e

hidrocloreto de pararosanilina.

Flagelos – corado de vermelho

Não flagelo – corado de azul

13
 09/09/2019

Estruturas externas à parede – Flagelos

Estruturas externas à parede – Flagelos

• Associado à locomoção da célula (movimento natatório),

oferece uma vantagem na exploração dos recursos dos
ambientes.
• Apêndices longos e finos (~20 nm de espessura).
• Único ou vários, em diferentes arranjos

Monotríquio: Flagelo único e polar;

Anfitríquio: Um flagelo em cada extremidade;

Lofotríquio: Dois ou mais flagelos em um pólo da célula;

Peritríquio: Flagelos distribuídos por toda a célula.

14
 09/09/2019

Estruturas externas à parede – Flagelos

Fonte: Tortora et al., 2005

Estrutura do flagelo
procariótico

• Semi-rígida helicoidal (não

fica reto).
• Formado pelo motor,
gancho e filamento.
• Motor: ancorado na
Membrana citoplasmática e
parede, bastão + anéis,
proteínas Mot (rotação) e Fli
(reversão do sentido de
rotação).
• Gancho: base mais rígida.
• Filamento: formado por
subunidades de flagelina. Anel C

Fonte: Madigan et al, 2004.

15
 09/09/2019

Estrutura do flagelo procariótico

2002

Estrutura do flagelo procariótico

Bactéria Gram-negativo Bactéria Gram-positivo

2002

16
 09/09/2019

Tipos de movimentação em procariotos

com flagelação
-Energia para rotação: movimento de prótons na membrana,
passando pelo complexo Mot (força próton motiva). Translocação de
1.000 prótons para cada rotação.

-Velocidade até 60 comprimentos celulares/segundo

-Capazes de girar até 300 revoluções por segundo!!

Fonte: Madigan et al, 2004.

Velocidade não é constante e pode-se aumentar ou diminuir de acordo com a

intensidade da força próton motiva

Nem Usain Bolt é capaz!!!

Impulsão em meio líquido → 0,00017 Km/h

60 comprimentos celulares/segundo!!

17
 09/09/2019

Proteus mirabilis

Crescimento da colônia seguido por “ondas”.

Células normais com 2 m e de 6-10 flagelos

Células de expansão com 40 m e de milhares de flagelos → movem-se para a

extremidade do ágar, perdem a diferenciação e voltam ao normal e novas
células de expansão se formam...

http://microblog.me.uk/wp-content/uploads/petri.0.jpg

Momento I

“Aprendendo Microbiologia com Poema e Poesia”

By Ilana Camargo

http://www.icej.org.br/?p=372

18
 09/09/2019

Oh Meu Deus! Isso deve ser Proteus! ( por Ilana Camargo)

Ninguém, por mais que fosse desatento,

deixaria de notar tal véu no crescimento.
Um bacilo Gram negativo com tal mobilidade,
migra sobre o meio sólido com grande habilidade.

Com tantos flagelos após grande diferenciação,

migra pela superfície do ágar durante a incubação.

A morfologia ao redor de suas colônias... Hm! Com seu colega comente!

O entrega até mesmo para o menos experiente:
Basta observar o véu no ágar nutriente.

No ágar MacConkey, no entanto,

há colônias em crescimento,
mas o grande véu some como por encanto
e a inibição eu não entendo!

Como sugestão eu digo

e meu colega repete comigo:
Oh Meu Deus! Isso deve ser Proteus!

Locomoção e taxia

19
 09/09/2019

Locomoção microbiana - deslizamento

Movimento mais lento e suave

Requer contato com superfície sólida

Mecanismo proposto para a motilidade por

deslizamento em Flavobacterium johnsoniae –
movimentação de proteínas na superfície celular.
Madigan et al., 2004.

Cianobactéria filamentosa
Oscillatoria princeps. Os filamentos
deslizam por meio da secreção de
um polissacarídeo limoso.
Madigan et al., 2004.

20
 09/09/2019

Locomoção microbiana - deslizamento

• Motilidade pulsante com pili tipo IV

Respostas comportamentais - Taxias

• Movimento de uma bactéria para perto ou longe de um

estímulo particular.

• Melhor conhecido em bactérias que apresentam locomoção

flagelar.

• Quimiotaxia – resposta a um agente químico.

• Fototaxia – resposta a um estímulo luminoso.

• Outras taxias (p.e., aerotaxia).

21
 09/09/2019

Regulação da quimiotaxia

• Proteínas sensoras localizadas na membrana –

quimiorreceptores – percebem o gradiente químico e
interagem com as proteínas que afetam a direção do
motor flagelar.

• Principais agentes quimiotáticos bacterianos:

nutrientes excretados por células como algas e
protozoários, ou por organismos macroscópicos mortos.

Quimiotaxia

Ocilação corrida

Gradiente maior
do agente
atrativo

22
 09/09/2019

Fototaxia

Fototaxia positiva de uma colônia inteira da bactéria púrpura

Rhodospirillum centenum, por um período de duas horas. No detalhe,
MET de célula de R. centenum, com flagelação peritríquia induzida.
Madigan et al., 2004.

Parte II: Colorações

Sobre a aula prática

23
 09/09/2019

Colorações

microscopia óptica → o aumento do contraste melhora a

imagem final observada.

A técnica de coloração é uma forma rápida e simples de melhorar o

contraste.

Colorações
Simples Diferencial
Um único corante
Para constatação de microrganismo

Observar estruturas
Positiva Separação de grupos
Esporos
Coloração de Gram
Cápsulas
Negativa Coloração de Ziehl-Neelsen
Flagelo

24
 09/09/2019

Colorações
Azul de metileno (1 – 2 minutos)
Simples Cristal de violeta (20 – 60 segundos)
Um único corante Carbolfucsina (15 – 30 segundos)
Para constatação de microrganismo
Positiva: baseada na utilização de corantes
carregados positivamente (corantes básicos) que se
ligam às cargas negativas de superfície de células e de
Positiva material nucléico

Negativa
Negativa: baseada na coloração com corantes
acídicos que são repelidos pela carga negativa da
superfície de células. A lâmina de vidro ficará corada
enquanto que o microrganismo aparecerá mais claro

Nigrosina
Tinta nanquim

Colorações
Diferencial
Dois corantes contrastantes que gerarão
colorações diferentes em grupos
distintos de bactérias

Observar estruturas
Separação de grupos
Esporos (Schaeffer-Fulton)
Coloração de Gram
Cápsulas (Gins)
Coloração de Ziehl-Neelsen
Flagelo (pararosanilina)

25
 09/09/2019

Partindo de cultura líquida

26

Partindo de cultura sólida
Adicione uma gota de solução
fisiológica e em seguida adicione uma
porção de uma colônia com o auxílio de
uma agulha de inoculação, misture e
espalhe sobre a lâmina
Coloração de Gram
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
09/09/2019
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
Vi Lulu Ali A Fumar !
27
 09/09/2019

Coloração de Gram

Fixação das bactérias na lâmina

Pelo calor (Fogo)

Cristal Violeta – 1 minuto

Lugol (Iodo) – 1 minuto

Álcool Cetona

Água destilada
Fucsina - 30 segundos

Cristal Violeta

Se infiltra na parede celular e

cora as células de roxo!

Solução de Iodo (Lugol)

Mordente

Substância que forma

um complexo com o
Cristal Violeta e o
precipita na parede da
célula!

28
 09/09/2019

O tratamento de álcool (ou álcool cetona) extrai os lipídeos

resultando em uma porosidade ou permeabilidade
aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativo. O
complexo Cristal Violeta – Iodo (CV-I) é retirado com a
lavagem e as bactérias Gram-negativo são descoradas.

As bactérias Gram-positivas têm parede celular de

composição diferente e se desidrata durante o
tratamento com o álcool, diminuindo a porosidade e o
complexo CV-I não pode ser extraído.

Última etapa: coloração pela Fucsina

G+ - a célula não é afetada, permanecendo violeta

G- - a célula adquire o corante, tornando-se vermelha/rosa.

Cocos Gram-positivo Cocos Gram-negativo

FUNÇÃO: Observar as características morfológicas das

bactérias isoladas – Excelente também como exame
direto para avaliar o material clínico (escarro).

29
 09/09/2019

Coloração de Gram

Cocos
Gram-positivo

Espiral
Gram-negativo Bacilo
Gram-positivo

Cocos Gram positivos

estafilococos

30
 09/09/2019

Gram positivos retém o cristal violeta e as bactérias Gram-negativo não.

No entanto, isto não é um fenômeno absoluto. Muitas vezes, culturas de
bactérias GRAM (+) parecem Gram (-) ou misturadas (+ e -).

Existem algumas razões para isto:

1 – Super descoloração
2 – Fixação pelo calor muito drástica
3 – esfregaço muito espesso
4 – Passos de lavagens impróprios
5 – Cultura muito velha
6 - Cultura misturada ou impura

Como a coloração de Gram depende da estrutura da parede celular, sempre

que houver um dano na parede a coloração de Gram poderá variar.

Uma bactéria Gram-positivo poderá aparecer Gram-negativo, porém, uma

bactéria Gram-negativo será sempre Gram-negativo.

31
 09/09/2019

As características morfológicas das bactérias:

- Tamanho: Pequeno, médio e grande (de 0,5 a 1,0 m de

diâmetro ou largura);

- Forma: cocos (esféricas), bacilos (cilíndricas) ou

espirilos (espiraladas);
Bactérias pleomórficas → mudam de forma a medida que
a cultura envelhece. Por exemplo: Arthrobacter.

- Arranjo: estafilo..., estrepto..., diplo..., tétrade, sarcina,

paliçada.

Podem ser determinadas por microscopia e colorações!

Coloração de Gram

32

Momento II
“Aprendendo Microbiologia com Poema e Poesia”
http://www.icej.org.br/?p=372
Gram: ser ou não ser, eis a questão
(por Ilana Camargo)
Do aconchego dos nossos clones nos levam...
Para onde vamos nesta alça quente?
Deslizam-nos em uma gota de salina sobre uma lâmina de vidro
O que vão fazer com a gente?
Ficamos à espera,
Ficamos aflitos...
A lâmina seca.
Ouço dos humanos alguns gritos.
De repente, nos fixam ao calor do fogo
Aí que chega a realidade:
É a primeira aula sobre a coloração desse povo!
Então vamos mostrar a nossa identidade!!
Será que vão acertar?
Enxergamos tudo roxo por um minuto.
é o cristal violeta a nos corar.
Depois vem o lugol como um mordente
E por mais um minuto coram a gente.
Hora do banho de cachoeira
É uma breve e leve ducha.
Mas que os humanos chamam de torneira.
De repente tudo fica gelado,
e um arrepio vem à tona:
É a vez do álcool cetona.
09/09/2019
Eu e meus irmãos nos descoramos.
Lá vem a fucsina rapidamente.
Vão nos reconhecer estes humanos?
Mais uma ducha gostosa,
Depois nos deixam secar.
Ficamos todos cor de rosa:
Será que vão adivinhar?
Do microscópio veio uma luminosidade:
Tem alguém a nos espiar.
Tentam observar a nossa identidade...
acho que vão acertar.
“Estas são todas rosa claro!!”
O humano tem certeza disso.
“Porém o Gram eu não declaro!!”
O medo de errar é coisa de Bixo!
Gram positivo ou Gram negativo?
Eis a questão!
Se somos rosa depois da sua proeza,
Fala ai seu Bixão:
Somos Gram negativos com certeza!!
33