TECNOLOGIA DE

HIBRIDOMAS
Prof. Michel Gantus
 O que são
hibridomas?
 Como induzir a Imunidade?
Imunização passiva – confere imunidade temporária pela administração de anticorpos
para combater um organismo invasor, sua duração depende da quantidade de anticorpo e
a frequência da administração.
• Imunização activa – visa a administração de antigénios de agentes patogénicos
atenuados.
Resposta Acumulativa
Expansão Clonal
Cada tipo de linfócito B produz um
anticorpo específico, e a sua
multiplicação é explicada pela
expansão clonal dos linfócitos B.
Diferentes tipos de
Hibridomas
 Meio HAT
Os mielomas não expressam a enzima hipoxantina fosforribosil transferase (HPRT), que catalisa um passo
da via de hipoxantina a purina. As células do hibridoma se dividem normalmente, uma vez que apresentam
atividade da HPRT herdada do linfócito B esplênico parental, podendo assim, usar a hipoxantina como
substrato para síntese de DNA.
 Como obter Anticorpos?

Células de mieloma possuem a

capacidade de se multiplicarem
indefinidamente em cultura.

Os antigénios do agente
patogénico são injectados
em ratos, que passam a
produzir os linfócitos B
capazes de sintetizarem
os anticorpos específicos.

A fusão laboratorial Os hibridonas produzem Os anticorpos produzidos

dos dois tipos de anticorpos monoclonais, podem ser facilmente
células forma um mantendo-se facilmente recuperados e aplicados em
hibridoma. em cultura laboratorial. vacinas, tratamento de
picadas de serpente, etc.
Imunização dos Animais
Imunização dos Animais
Teste de Soro - Sangramento
Teste de Soro - Laboratório
Mensuração dos Anticorpos

Burton, Dennis R. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 14943, 2005
Hibridomas
Estrutura dos Anticorpos
Estrutura dos Anticorpos
Estrutura dos Anticorpos
Genética dos Anticorpos: Cadeia Kappa
Genética dos Anticorpos:
Cadeia Pesada
Estimativa da Quantidade de Anticorpos
ENGENHARIA GENÉTICA
DOS
ANTICORPOS
 Imunogeneicidade dos mABs

Anticorpos estranhos de
outro organimo

Human abs anti-mAbs Sem efeito

Atividade biológica
neutralizada e Indução de
comprometimento de Alterações efeitos adversos
terapias futuras com farmacocinéticas e choque anafilático/
anticorpos hypersensibilidade
biovariabilidade
Humanização do Anticorpo
 Hibridomas Terapêuticos

OKT3 é o único anticorpo de origem murina utilizado porque previne a rejeição de

transplantes. É um antígeno CD3 da superfície de linfócitos T, eliminando-os da
circulação.
Camundongo Trangênico
 mABs Modificados

 Quiméricos – região variável de camundongos + constante de humano.

 Humanizados – Camundongo CDRs + região constante e FR humano.
 mABs Humanos – muito difíceis de serem produzidos.

(0% Human) (67% Human) (90% Human) (100% Human)

mABs
Quiméricos
 mABs
Humanizados
 mABs Humanos

Célula tronco de camundongo

com o loci gênico inativado para
as cadeias leve e pesadas. Camundongo incapaz de
produzir anticorpos

Criação
Célula tronco
embrionária de
camundongo

Camundongo produzindo
apenas anticorpo humano

Célula tronco de
camundongo contendo Criação
gen humano
Camundongo produzindo anticorpos de
camundongo e humanos
 Anticorpos Farmacêuticos

 Segmento farmacêutico de maior crescimento

 $14 bilhões de vendas em 2005.
 Esperado um crescimento para $30 billhões em 2010

 Hoje, existem 20 mABs disponíveis no mercado.

 Todavia, mais de 500 terapias estão em desenvolvimento

utilizando-se mABs.
 Anticorpos contra o Câncer

Mab name Cancer Approved in

1. Rituximab non-Hodgkin lymphoma 1997

2. Trastuzumab breast cancer 1998
3. Gemtuzumab/
ozogamicin acute myelogenous leukemia 2000
4. Alemtuzumab chronic lymphocytic leukemia 2001
5. Ibritumomab/
tiuxetan non-Hodgkin lymphoma 2002
6. Tositumomab non-Hodgkin lymphoma 2003
7. Cetuximab colorectal cancer 2004
head & neck cancers 2006
8. Bevacizumab colorectal cancer 2004
non-small cell lung cancer 2006
breast cancer 2008
glioblastoma 2009
kidney cancer 2009
9. Panitumumab colorectal cancer 2006
10. Ofatumumab chronic lymphocytic leukemia 2009
 Epub Nov 29, 2018

❑ 14 anticorpos identificados.

❑ Indicações clínicas - linfomas, leucemias, câncer de mama e câncer colorretal.

❑ 3 anticorpos quiméricos, 6 humanizados e 5 humanos.

❑ A Roche possui o registro de 6 dos 14 mABs, o que representa 43%.

Empresas – Receita 2015 - 2022