MICROCULTIVO

DE FUNGOS
Profa. Louise Oliveira
Arvore filogenética 3 Domínios
Arvore filogenética 5 Reinos
Nutrição e crescimento

Nutrição microbiana:
Componentes necessários às células (Meios de cultura)

Condições ambientais:
Crescimento populacional
Velocidade de crescimento
Tempo de geração
Medidas do crescimento
 Dois grandes avanços permitiram seu reconhecimento: o
primeiro microscópio sofisticado e um método para cultivar
 Experimento de Pasteur onde ele utiliza um caldo nutritivo
semelhante a uma sopa para provar a necessidade de um meio de
cultivo para o crescimento de micro-organismos.
MEIO DE CULTURA
Os meios de culturas são uma associação equilibrada de
nutrientes, em quantidades e qualidades necessárias ao
crescimento microbiano, que favorece e possibilita o cultivo
dos microrganismos viáveis no laboratório, sob a forma
de culturas puras.
CRITÉRIOS PARA O CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS EM
MEIOS DE CULTURA

• Componentes nutricionais corretos, em quantidades e proporções

• Condições adequadas de incubação
• pH ajustado
• Estéril
CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA – ESTADO FÍSICO
CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA

NATURAIS→Meio de Löwenstein Jensen

(Mycobacterium tuberculosis) contém
sais, ovos e pedaços de batata

Artificiais (ou Quimicamente definidos)→

composição química definida usados para
microrganismos mais específicos e exigentes
Substâncias nutritivas em concentrações adequadas, que
devem servir como:

• Fonte de carbono
• Fonte de sais e íons
• Fonte de nitrogênio
• Fatores de crescimento
• Fonte de fósforo
• Fonte de enxofre
• Agentes oxidantes
• Agentes e redutores
VIDEO https://www.youtube.com/watch?v=0Hw0fy3EGKA&t=182s
TÉCNICAS DE VISUALIZAÇÃO DE
MICRORGANISMOS

• Equipamento para
microscopia

• Preparação adequada
Equipamento para microscopia
Aspectos das colônias fúngicas quanto à textura:
É a característica mais importante utilizada na caracterização de uma
colônia fúngica. A textura descreve a altura das hifas aéreas.

1. Colônias algodonosas;
2. Colônias furfuráceas;
3. Colônias penugentas;
4. Colônias arenosas;
5. Colônias veludosas;
6. Colônias glabrosas
7. Colônias membranosas
8. Colônias Cremosas
Aspectos das colônias fúngicas quanto ao Relevo:

Relacionada à topografia da colônia

1. Colônias cerebriformes
2. Colônias rugosas
3. Colônias apiculadas
4. Colônias crateriformes
Aspectos das colônias fúngicas quanto à pigmentação:

Quando se fala em pigmentação de uma colônia fúngica deve-se levar

em consideração alguns aspectos primário

A- se o pigmento é encontrado
na superfície da colônia ou no
reverso,
B- se o pigmento é encontrado
tanto na superfície quanto no
reverso da colônia,
C- se o pigmento é ou não
difusível no meio de cultura,
Análise Microscópica:

• Principal forma de diagnóstico da maioria

dos fungos filamentosos
• Baseado nas diferenças morfológicas das
estruturas reprodutivas e na ontogenia dos
esporos
• Os isolados primários e subcultivo devem
ser submetidos a avaliação com microscopia
 PREPARAÇÕES MICROSCÓPICAS PARA IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS

• Colorir esporos e outras estruturas do

patógeno e/ou células e estruturas do
tecido do hospedeiro. Permitindo
melhor clareza na visualização ao
microscópio.

• Fixar a peça ou estrutura a ser

observada.

• Impedir o dessecamento da
preparação e preservar sua
integridade estrutural, por tempo
mais ou menos longo.
Lactofenol de Amann

É o mais usado em laboratórios de micologia.

Excelente para coloração de esporos e micélios de
fungos hialinos. Apresenta índice de refração de
1,45.
Usualmente adiciona-se ao Lactofenol de Amann,
azul de algodão(corante) na proporção de 0,1 a
0,5%.

Composição:
Ácido lático p.a. -----------------10ml
Água destilada -------------------10ml
Fenol crist. ----------------------- 10ml
Análise Microscópica:
EXAME DIRETO
ISOLAMENTO DE FUNGOS DE ALIMENTOS

• CORTE DA ÁREA ATINGIDA

• RASPAGEM DA ÁREA AFETADA
• TÉCNICA POR FITA ADESIVA
 ISOLAMENTO DE
FUNGOS
FITOPATOGÊNICOS
Análise Microscópica:
FITA ADESIVA
1. Colocar uma lâmina de vidro sobre uma
superfície clara e pingar sobre a lâmina uma gota
de corante (lactoglicerol + azul algodão);
2. Cortar uma tira de fita adesiva do tamanho
maior da lâmina de vidro;
3. Pressionar o centro da fita sobre os sinais do
patógeno;
4. Fixar a fita na lâmina com as estruturas
patogênicas sobre o corante; dispensa o uso de
lamínulas;
5. Observar nos aumentos de 100 e 400 x.
Análise Microscópica:
MICROCULTIVO

Material é previamente
depositados sobre lâmina
e/ou lâminula
ATIVIDADE