Funcionamento de Scaffolds para controle de células-tronco

destinadas a polpa dentária.

Resumo

A emergente compreensão sobre as interações entre as células-tronco, scaffolds e fatores

morfogênicos acelerou a investigação de alteração no campo da engenharia de tecidos
da polpa dental. As células-tronco da polpa dentária constituem uma subpopulação de
células dotadas de auto renovação e multipotencialidade. Células-tronco da polpa dental
semeadas em scaffolds biodegradáveis e expostas a derivados da dentina morfogênica
são fatores que dão origem a um tecido similar ao da polpa capaz de gerar nova dentina.
Notadamente, proteínas derivadas da dentina são suficientes para induzir a
diferenciação de células-tronco de polpa dentária em odontoblastos. Trabalhos em curso
são focados no desenvolvimento de maneiras de se mobilizar proteínas derivadas da
dentina e desinfetar o do canal radicular de dentes necróticos sem comprometer o
potencial de sinalização morfogênico destas moléculas. Por outro lado, dentina por si só
não parece ser capaz de induzir a diferenciação endotelial de células-tronco da polpa
dental apesar da presença conhecida de fatores angiogênicos na dentina. Isto é
particularmente relevante no contexto da engenharia de tecidos da polpa dental em
canais radiculares completos no acesso ao sangue que é limitado ao forame apical. Para
responder a este desafio, cientistas estão procurando maneiras de utilizar o scaffold
como um dispositivo de liberação controlada por fatores angiogênicos. O objetivo deste
artigo foi apresentar e discutir estratégias atuais para funcionalizar scaffolds injetáveis e
personalizá-los para a engenharia de tecidos da polpa dental. O objetivo em longo prazo
deste trabalho é desenvolver terapias baseadas em células-tronco que permitem que a
engenharia de polpas dentais funcionais seja capaz de gerar nova dentina tubular em
seres humanos.

Palavras-chave

Angiogênese, células-tronco da polpa dental, a dentina, sinais morfogênicos,

biologia da polpa, endodontia regenerativa, engenharia de tecidos.

O fato decisivo da Ciência da Saúde no século XXI foi desenvolver estratégias

clinicamente relevantes para regeneração de tecidos. O raciocínio para essa meta é que a
substituição de um órgão/tecido perdido devido a doença ou trauma é um órgão/tecido
real. Em linhas gerais, isto pode ser conseguido através de transplante ou regeneração.
Estratégias baseadas em transplantes têm sido utilizadas com sucesso por décadas. No
entanto, a rejeição de órgão/tecido é uma grande ameaça que foi resolvida com o uso
prolongado de drogas imunossupressoras, que apresentam riscos intrínsecos para o
paciente. Por outro lado, regeneração tecidual ocorrida pela ativação de células-tronco
adotivas ou a entrega de células-tronco autólogas permite resultados semelhantes como
as estratégias baseadas em transplante sem a necessidade de terapias imunossupressoras
crônicas. No entanto, regeneração de tecidos não é desprovido de desafios
significativos. Estes desafios incluem o desenvolvimento de estratégias de recrutamento
ou isolamento de células-tronco apropriadas, a geração de um microambiente adequado
que permite que as células-tronco se diferenciem, proliferem e dêem origem a um
órgão/tecido totalmente funcional no tamanho e forma correta. Embora estes sejam
desafios bastante substanciais, torna-se cada vez mais evidente que o desenvolvimento
bem sucedido de estratégias de regeneração do tecido usando células autólogas pode ter
benefícios duradouros que superam os riscos potenciais. Esta revisão foca um aspecto
de regeneração de tecidos (ou seja, o desenvolvimento de scaffolds funcionalizados que
fornecem um microambiente propício para a diferenciação controlada de células-tronco
e a geração de uma nova polpa dental para o tratamento de dentes permanentes imaturos
necróticos).

Engenharia de tecidos

Engenharia de tecidos é uma ciência multidisciplinar que visa o

desenvolvimento de estratégias clinicamente relevantes para a regeneração de um tecido
ou órgão Isso envolve a identificação de células progenitoras capazes da regeneração do
tecido quando colocados em scaffolds biodegradáveis e expostos aos sinais
morfogênicos. Scaffolds devem ser desenvolvidos com exclusividade para a regeneração
de cada órgão ou tecido específico. No entanto, eles compartilham características
comuns, como a permissão para a fixação da célula, difusão de nutrientes e oxigênio,
sendo biodegradáveis, e ter propriedades físicas alinhadas com as do órgão/tecido que
será regenerado. Além disso, os scaffolds podem ser reforçados para melhorar as
condições para a ligação de célula e a sobrevivência da mesma, além de fornecer sinais
morfogênicos que complementam aqueles que vêm da célula progenitora e permitem
orientação diferenciada das células-tronco.
 Em termos gerais, os scaffolds podem ser divididos em (1) fundido (ou seja,
bastante rígida e feitos sob medida para fins específicos) e (2) injetável (ou seja, gel de
baixa viscosidade que pode ser entregue e ' moldado ' no local que necessita de
regeneração do tecido). Ambos os tipos de scaffolds podem ser melhorados com sinais
morfogênicos. Notadamente, esses sinais são normalmente proteínas com uma meia-
vida curta. Portanto, o desenvolvimento de uma estratégia para liberação controlada
destas proteínas é fundamental para maximizar seus efeitos por períodos de tempo pré-
determinados. Proteínas morfogenéticas podem ser incorporadas tanto em scaffolds
fundidos usando copolímeros como poli (ácido lático-co-glicólico) e preenchimento de
gás-espuma. Eles também podem ser misturados com moldes injetáveis tal como
colágeno ou automontagem com hidrogel Puramatrix (BD Bioscience, Franklin Lakes,
NJ), mas neste caso é muito difícil minimizar a taxa de degradação das proteínas. Para
resolver esse problema, tem sido sugerido que os polímeros naturais derivados de algas
marrons (por exemplo, alginatos), que são biocompatíveis e possuem baixa
imunogenicidade, podem ser usados em combinação com scaffolds injetáveis para servir
como um dispositivo de liberação lenta para os sinais morfogênicos. Nomeadamente, o
processo de gelificação na presença de íons divalentes em níveis fisiológicos é uma
maneira muito simples de incorporar, proteger e liberar fatores morfogênicos de micro
esferas de alginato numa taxa controlável.
O padrão biológico para a liberação controlada de fatores morfogênicos em
engenharia de tecidos dentários é observado no microambiente durante o
desenvolvimento do dente. Os investigadores têm tentado entender esse ambiente como
um meio para criar as condições ideais para orientar o destino de células-tronco para
regeneração de tecidos dentários. O trabalho de muitos pesquisadores em todo o mundo
tem identificado sinais morfogênicos que desempenham papéis importantes durante o
desenvolvimento do dente e que potencialmente pode ser utilizada terapeuticamente na
regeneração do dente. Com efeito, genes conhecidos como dentin sialophosphoprotein
(DSPP), proteína de matriz de dentina 1 (DMP1), Msx família homeobox e amelogenina
revelaram defeitos no desenvolvimento de dente grande, indicando que estes sinais
morphogênicos estão criticamente envolvidas nesses processos. Tais descobertas
sugerem elementos alternativos com sinais de morfologia que podem ser utilizados no
ambiente circundante ou no local para o uso de scaffolds, alojando as células-tronco e
melhorando a regeneração dos tecidos da polpa.
 Além da necessidade de direcionamento de células-tronco em odontoblastos, há
também uma necessidade importante para sua diferenciação em células (por exemplo,
vascular em células endoteliais e células neurais) de apoio. Inervação do tecido é
fundamental para a regulação funcional das células envolvidas na regeneração da polpa.
Além do efeito protetor da inervação da polpa, também desempenha papel importante
na reparação de inflamação do tecido. A indução rápida de uma resposta pró
angiogênica é crucial não apenas como um meio para fornecer o necessário influxo de
oxigênio e nutrientes exigidos pela alta demanda metabólica das células novas na
regeneração de tecidos, mas também permitir respostas imunológicas necessárias para
proteger os tecidos emergentes normalmente com contaminação bacteriana associada
com o tratamento clínico dos dentes necróticos. Células do sistema imunológico tais
como macrófagos infiltrados nos tecidos exigem a presença de uma rede vascular
funcional para acessar o tecido da polpa regenerada e protegê-lo contra bactérias que
possivelmente poderiam permanecer vivas após o tratamento de dentes necróticos. Na
verdade, é plausível especular que acesso de células do sistema imunológico para a
polpa dentária tem papel decisivo no resultado bem-sucedido do tratamento de dentes
necróticos através da endodontia regenerativa – com base em abordagens.
Além disso, é através dos vasos sanguíneos que os substratos necessários para a
mineralização da dentina (por exemplo, o cálcio e o fosfato) são disponibilizados para
os odontoblastos, que talvez explique a presença freqüente de vasos sanguíneos em
estreita proximidade com a camada de odontoblastos, particularmente na polpa
ativamente envolvido em processos regenerativos. Além disso, a vascularização é um
determinante chave da heterogeneidade de células mesenquimais em engenharia de
tecidos dentários, presumivelmente, permitindo o recrutamento de células para o dente
em desenvolvimento em circulação. Depois desta revisão, discutimos propostas
potenciais estratégias para a rápida vascularização da engenharia de polpas dentais.

Células-tronco relacionadas com o dente

As células que definem o tecido pulpar são os odontoblastos, células

terminalmente diferenciadas, que não proliferam e que são dotados da capacidade de
gerar nova dentina tubular. Odontoblastos perdidos podem ser substituídos em polpas
normais por células-tronco residentes encontradas em dentes permanentes ou dentes
decíduos. Podemos ter além dos odontoblastos outras linhagens de células como os
osteoblastos, condrócitos e células progenitoras neuronal. Células-tronco também foram
identificadas em outros tecidos orais, tais como a papila apical, o folículo mesenquimal,
ligamento periodontal e gengiva. Especula-se que as células-tronco de cada tecido são
um pouco 'preparadas ' para regenerar esse mesmo tecido, e, portanto, é provável que as
células-tronco melhores para engenharia de tecidos da polpa dental são as células-tronco
da polpa. No entanto, não está bastante claro neste momento o que é o potencial relativo
de cada uma dessas células estaminais oral para engenharia de tecidos da polpa dental.
As células-tronco da polpa dentária são obtidas facilmente esfoliando-se dentes
decíduos ou dentes permanentes extraídos por motivos ortodônticos. Considerado uma
fonte relativamente rica de células-tronco mesenquimais, o interesse no isolamento de
células-tronco de polpa dentária aumentou substancialmente nos últimos anos. Muito
importante é a esfoliação de dentes decíduos e dentes permanentes extraídos para
sobreposição de razões ortodônticas temporárias com dentes imaturos permanentes de
adolescentes que são relativamente propensos a necrose induzida por trauma de polpa.
Portanto, sugere-se que esses dentes sejam uma fonte ideal de células-tronco para
engenharia de tecidos da polpa dental de necróticos dentes imaturos de permanentes.
Nestes casos, o objetivo é regenerar uma polpa dental funcional capaz de completar a
formação de raiz vertical e horizontal (Fig. 1).
Nos experimentos usando o modelo de scaffold/fatia do dente permanente,
observamos que as células-tronco de dentes decíduos esfoliados diferenciaram-se em
odontoblastos funcionais e vasculares em células endoteliais. Notadamente, linhas
fluorescentes criadas por tetraciclina produziram manchas na dentina tubular recém-
formada confirmando que as células-tronco de dentes decíduos esfoliados
transformaram-se em odontoblastos maduros. Estas experiências sugeriram a
possibilidade de isolar células-tronco do esfoliamento de dentes decíduos e transplantá-
los no mesmo paciente (transplante autólogo) em cenários clínicos envolvendo necrose
da polpa de um dente permanente imaturo durante a fase de dentição mista.
Um desafio crítico do cenário clínico descrito anteriormente é a necessidade de
rápida vascularização do tecido projetado para permitir a manutenção da viabilidade das
células transplantadas. Com efeito, a anatomia da raiz dental é um grande fator limitante
sobre acesso a vascularização, considerando que todos os vasos sanguíneos têm que vir
através de um sistema de estreitos forames localizados exclusivamente no final do
dente. Em dentes jovens, imaturos, a abertura apical da raiz é relativamente grande. No
entanto, em pessoas com 21 anos ou mais, as dimensões do forame apical são muito
estreitas e tendem a diminuir progressivamente ao longo do tempo. Parece que dentes
imaturos necróticos com ápices abertos são os principais candidatos para engenharia de
tecidos da polpa dental nesta fase do desenvolvimento da técnica. Mesmo nesses casos,
acreditamos que a taxa de sucesso de tal terapia se beneficiariam com a entrega de um
estímulo pró- angiogênico.
A recente descoberta de que células-tronco da polpa dental se diferenciam em
células endoteliais vasculares, além de se diferenciar em odontoblastos funcionais
sugere que essas células podem servir como uma fonte única de células para engenharia
de tecidos da polpa dental. No entanto, uma observação chave destes estudos é que
apesar de derivado de sinais morfogênicos da dentina ser suficientes para induzir a
diferenciação de odontoblasticos, eles não são suficientes para induzir a diferenciação
endotelial in vivo. Isto é, apesar da conhecida presença de fatores pro-angiogênicos na
dentina. Por conseguinte, parece imperativo que as estratégias destinadas a engenharia
dos tecidos da polpa dental incorporarem sinais pré-angiogênicos, provavelmente
entregues localmente com transportadoras de liberação sustentada.

Aplicador de
Hidrojel injetável Material adesivo
restaurador
Células-tronco da Material Protetor
Polpa dentária (MTA)
Microesferas de Polpa dentária
alginato com fatores projetada
de crescimento
Nova formação
auto montagem de de dentina
scaffold peptídeo
Fechamento
(ex. Puramatrix)
Apical

Figura 1. Uma representação esquemática de uma estratégia para a engenharia de

tecidos da polpa dental que se baseia na utilização de um scaffold injetável
funcionalizado e transplante de células-tronco de polpa dentária.

Fatores morfogênicos na regeneração da polpa

A observação que a dentina é um reservatório de sinais morfogênicos bioativos

que podem ser recrutados por demanda constitui uma grande descoberta de habilitação
no campo da regeneração de tecidos da polpa dental. De fato, esta descoberta representa
uma verdadeira mudança de paradigma no campo porque ele elevou a dentina ao status
de uma fonte de morfogênico que permite e orienta processos regenerativos de reparo
do tecido, ao invés de ser simplesmente um tecido inerte e passivo. Várias linhas de
investigação têm mostrado que as proteínas derivadas de dentina são suficientes para a
diferenciação odontoblástica. Notavelmente, a degradação intencional de proteínas
derivadas da dentina como o hipoclorito de sódio eliminou seu potencial indutivo. Esta
constatação associada a observações anteriores do papel crítico do derivado da dentina
com sinais morfogênicos de diferenciação odontoblástico e levantou a possibilidade que
o hipoclorito de sódio pode não ser a solução ideal para a irrigação do canal radicular
em endodontia regenerativa. Em busca de uma explicação mecanicista para esses
achados, nós e os outros observamos que a proteína morfogenética óssea 2 é um
mediador chave da dentina-induzida odontoblástica para diferenciação de células-tronco
de polpa dentária.
Outro importante sinal morfogênico derivado de dentina está transformando o
fator de crescimento beta 1 (TGF-b1). TGF-b1 está presente na dentina e pode ser
liberada pela atividade ácida da bactéria cariogênica, ou quando o EDTA é aplicado
sobre a dentina. O lançamento do TGF-b1 também foi identificado após a aplicação de
hidróxido de cálcio – contendo como materiais, mineral trióxido agregado, cimento de
silicato – baseado tricálcico e também adesivos autocondicionantes dentais. TGF-b1 é
uma molécula muito complexa, com vários efeitos. Suas implicações na biologia da
polpa e regeneração da polpa estão ainda sendo determinadas. Além da dentina, existem
várias outras fontes de sinais morfogênicos que incluem, mas não estão limitados a,
células de polpa residentes (por exemplo, fibroblastos, células neurais e células
endoteliais), células de circulação (por exemplo, circulação de células progenitoras e
células inflamatórias) e a matriz extracelular de polpa em si.
A compreensão do papel destes sinais morfogênicos na manutenção da
homeostase da polpa dental e nos processos que levam à regeneração da polpa está
emergindo. Uma discussão aprofundada da função de cada um destes fatores
morfogênicos está além do escopo desta revisão. No entanto, a tabela 1 resume algumas
das funções dos sinais chaves da morfogenia que podem desempenhar um papel na
regeneração da polpa.
Funcionalidade do hidrogel injetável em engenharia de tecidos da polpa dental

A descoberta de que as proteínas derivadas de dentina são suficientes para

induzir a diferenciação completa de células-tronco da polpa dentária em odontoblastos
tem uma implicação importante para a engenharia de tecidos da polpa. Isso indica que
não é preciso fornecer sinais de morfogenia adicionais para alcançar odontoblasticos
com a diferenciação de células-tronco transplantadas ou recrutadas para o tratamento de
canal. O foco pode ser simplesmente proteger esses fatores derivados da dentina da
degradação (por exemplo, evitar a exposição de hipoclorito de sódio) e melhorar a sua
mobilização por talvez tratar a superfície de dentina com ácidos orgânicos suaves (por
exemplo, EDTA), como mostramos. No entanto, as seguintes questões complexas
devem ser abordadas:
1. É necessário fornecer a fixação adequada e prevenir anoikis de células-tronco
transplantadas ou recrutadas para a câmara pulpar.
2. Uma precisa e rápida vascularização da polpa regeneradora para habilitar o fluxo
de oxigênio e nutrientes também possibilitando a da circulação de células
progenitoras que complementarão a heterogeneidade celular da polpa projetada
como mostrado por Keller et al.
Os investigadores têm tentado endereço estas duas questões para
funcionalização dos scaffods usados na engenharia do tecido da polpa dental com partes
que permitem melhorar a fixação de células (por exemplo, arginina-glicina-aspartato
[RGD]) e incorporando fatores angiogênicos (por exemplo, fator vascular de
crescimento endotelial [VEGF]).
Está se tornando cada vez mais evidente que o scaffold ideal para engenharia de
tecidos da polpa dental será injetável, não fundido. Isto é, devido aos espaços estreitos
dentro do canal radicular e a complexidade de sua anatomia, especialmente na região
apical. Além disso, existem preocupações relacionadas com a utilização de solventes
(por exemplo, clorofórmio, diclorometano e acetona) que são normalmente usados para
solubilizar scaffold fundido. Por exemplo, solvente poli (ácido lático co-glicólico)
requer mais de 2 dias para volatilização significativa, e os níveis residuais de solventes
podem ser tóxicos para as células. Por outro lado, hidrogel pode ser injetável e,
portanto, penetra em todo o sistema de canais radiculares. Além disso, normalmente
passa por uma reação de configuração em um pH fisiológico.
Tabela 1 Fatores morfogênicos e sua função no desenvolvimento da engenharia de tecidos e
regeneração dentária.
Classe de proteínas
Proteína morfogenética óssea 2, 4, 7
(fator de crescimento)
Sialoproteína óssea (proteína irmã)
Fator de nucleação e ligação alfa 1
(fator de transcrição)
Proteína da matriz dentina 1 (proteína
irmã)
Dentina sialofosfoproteina:
sialoproteina de dentina,
fosfoproteina dentina (proteína irmã)
Fibroblastos de crescimento
fator-2 (fator de crescimento)
Papel da proteína na Papel da proteína na
Símbolo odontogênese e engenharia da polpa dental
regeneração de tecido
BMP-7 Coordena interações BMP-2 induz a
epitelial-mesenquimal diferenciação de localização
durante a fase de iniciação de células da polpa dentária
da odontogênese e e formação de tecido
BMP 2,-4,-7 morfogênese; mineralizado usando DPSC
BMP-2 e BMP-4 induzem a in vivo; BMP-7 induz a
regeneração da dentina in mineralização e regulação
vivo de células-tronco na polpa
dental in vivo
BSP estimula a
diferenciação das células da
BSP polpa dental em células Idem
odontoblásticas e induz a
regeneração da dentina in
vivo
Regula as interações
epiteliais-mesenquimais
durante a morfogênese e a
histodifereniação do órgão
Cbfa1 epitelial do esmalte, mas Idem
desempenha um papel de
estágio específico na
diferenciação terminal e
determinação linhagem dos
odontoblastos
DMP-1 é expressa em Induz uma formação
odontoblastos maduros, organizada na matriz similar
desempenhando um papel do tecido pulpar,
DMP-1 essencial na mineralização susceptíveis de conduzir à
da dentina e tendo uma formação de tecido duro in
função reguladora no vivo
núcleo; além disso, ele ativa
a síntese de IL-6 e IL-8 de
fibroblastos de polpa
DSPP é expresso pelos
odontoblastos e é clivada
em 2 polipeptídeos menores
com características físico-
químicas únicas (DSP e
DPP); DSPP é ativador pela
escassez de DMP-1 durante
DSPP: a dentinogênese; DSP está
DSP envolvido em interações
DPP epitelial-mesenquimal que Idem
são cruciais para fases
posteriores do
desenvolvimento do dente;
promove crescimento,
migração e diferenciação
odontoblastico de HDPC in
vitro DPP vincula-se ao
colagénio e inicia a
formação de cristais de
apatita em dentina
Induz a diferenciação de Induz a celularização e
FGF2 HDPC em tecido revascularização de dentes
mineralizado regula humanos implantados no
quimiocinas in vitro dorso de ratos e regulam a
mineralização de tecidos
dentários
 Parece mediar a jusante Parece inibir a diferenciação
Canonical via Wnt Wnt/- eventos de TGF-1 durante de DPSC em células
(a transdução de sinal) catenina a regeneração da polpa odontoblásticas
Induz-se a regulação da Induz a odontoblastia
matriz dentária por celular diferenciada in vitro
Fator de crescimento transformante odontoblastos ; TGF- é um e DPSC mediante
beta 1 (factor de crescimento) TGF-1 regulador fisiológico de mineralização
osteoblastos diferenciados
Parece estar envolvido na Requerido em eventos
Proteína relacionada com torção Desenvolvimento do terminais que impulsionam
1 (fator de transcrição) TWIST1 supranumerário dos dentes a diferenciação de DPSC em
odontoblastia de células in
vitro
Endotelial vascular Induz a sobrevivência e Induz a diferenciação de
(fator de crescimento) células endoteliais SHED em células
VEGF diferenciadas dos vasos endoteliais
sanguíneos novos podendo
ser usado terapeuticamente
para induzir novas
vascularizações do tecido

Alginatos são polímeros naturais versáteis que foram usados extensivamente

como transportadores de drogas e fator de crescimento. A retenção de água pela
capilaridade de hidrogel define a cinética de liberação de alginatos que pode ser afetado
pelo pH, temperatura, nível de ligação cruzada, viscosidade e estabilidade.
Alginatos agem como barreiras mecânicas, diminuindo a difusividade de
compostos químicos de baixo peso molecular ou proteínas aprisionadas após sua
gelificação. Substâncias tais como fosfato tamponado, soro fisiológico que são usados
como portadores de fatores de crescimento podem ser encapsulados em alginatos de
grau clínico de alta viscosidade. Por outro lado, devido à sua natureza hidrofílica,
alginatos apresentam baixa absorção de proteínas de soro e, conseqüentemente, baixos
níveis de adesão e interação celular. Por conseguinte, não há proliferação celular
normalmente é observada quando o alginato é usado como uma matriz extracelular
sintética. Esta observação levou à possibilidade do uso de microesferas de alginato
(como dispositivos de liberação lenta para sinais morfológicos) combinadas com um
scaffold injetável que é mais propício à proliferação e sobrevivência de células-tronco.
A associação entre hidrogel de alginato e outros materiais tais como nanofibras
ou a modificação da estrutura do alginato (por exemplo, por funcionalização peptídica)
têm sido investigados para melhorar a fixação das células. Para resolver esse problema,
Galler et. al. mostrou recentemente o desenvolvimento de um hidrogel de peptídeo de
automontagem personalizado projetado especificamente para a engenharia de tecidos da
polpa dental. A vantagem deste sistema inovador é a possibilidade da incorporação de
moléculas de sinalização e a sequência de aminoácidos RGD para adesão celular à
estrutura do scaffold. Além disso, a estratégia de incorporação envolvendo adsorção de
fatores de crescimento em microesferas porosas com encapsulamento posterior com
alginato tem sido investigada.
Uma automontagem de hidrogel injetável comercialmente disponível (ou seja,
Puramatrix) apresenta viscosidade favorável para utilização como um scaffold
injetável. Sua mistura com um baseado em solução de sacarose e/ou célula desencadeia
no meio de cultura uma rápida automontagem, levando a sua gelificação e a geração de
um ambiente tridimensional que proporciona aderência celular e permite a proliferação
celular. Recentemente mostramos que o Puramatrix permitido para diferenciação de
odontoblastos diferenciando células-tronco da polpa dental in vitro. O trabalho em
andamento no nosso laboratório está tentando combinar o ambiente celular fornecido
pelo Puramatrix, com a liberação controlada de fatores morfogênicos fornecidos por
microesferas de alginato no contexto da engenharia de tecidos da polpa dental (Fig. 2).

Desafios na regeneração de tecidos de polpa dentária

A melhoria da cinética de liberação dos fatores morfogênicos para utilização em
endodontia regenerativa é um grande desafio. A adsorção de proteínas tem sido
amplamente utilizada para o fornecimento de fatores de crescimento em engenharia de
tecidos, mas há problemas associados com esta abordagem. Este método baseia-se na
retenção física e liberação através da porosidade natural do material biodegradável. A
ligação química com dissulfeto ou heparina também tem sido utilizada. Notavelmente, a
heparina tem afinidade natural com fatores de crescimento como o VEGF.
Recentemente observamos uma liberação sustentada de microesferas de alginato e
microesferas de VEGF (< 275 mm de diâmetro) por 21 dias (Fig. 2). No entanto, apesar
de níveis adequados de VEGF mediam a indução da angiogênese, o VEGF excessivo
pode promover vazamento vascular, levando a edema e aumento da pressão intersticial.
Este é um desafio crítico na engenharia de tecidos da polpa dental porque a polpa é
encapsulada dentro de paredes de dentina não expandida. Neste caso, a excessiva
pressão intersticial pode resultar em morte celular, como foi mostrado no contexto do
cérebro após um acidente vascular cerebral.
A determinação do quanto o fator de morfogenia é ideal anda de mãos dadas
com a definição de como rapidamente ele deve ser liberado e por quanto tempo. Há
muitas maneiras de controlar a cinética de liberação de fatores de crescimento. Eles
incluem modificações estruturais de alginato pela adição de dextran em redes semi-
interpenetradas, heparina, quitosana, sulfatado e ligações cruzadas de alginato. Sistemas
de iniciador de luz ultravioleta foram usados para promover a fotopolimerização de
alginato, mantendo sua biocompatibilidade. Estes são exemplos das complexidades
envolvidas com a entrega local de fatores morfogênicos e mostram que se trata de uma
área que exigirá muita atenção de como a endodontia regenerativa se move em direção a
aplicação clínica.
É possível que múltiplos fatores morfogênicos combinados com outros agentes
(por exemplo, antibióticos) terão de ser usados para a regeneração ideal da polpa dental.
A estratificação das abordagens têm sido propostas para a liberação controlada de
múltiplos fatores de crescimento, inibidores da inflamação e/ou antibióticos de
microesferas. A combinação do fator de crescimento e a entrega da droga têm atraído à
atenção por causa dos benefícios potenciais dos compostos antibacterianos no
tratamento de canais radiculares necróticos. Além disso, será importante encontrar o
material ideal para ser usado na selagem do tecido pulpar recém-regenerado. Este
material deve ser biocompatível para manter a viabilidade celular da polpa regenerada.
Ao mesmo tempo, ele deve fornecer uma boa vedação interfacial que minimiza a micro
infiltração e forneça aderência adequada para a sobreposição do material restaurador.

Figura 2. Caracterização de VEGF, contendo microesferas de alginato. (A)

Micro esferas de alginato carregadas com VEGF. (B e C) Gráficos retratando a cinética
de liberação de microesferas de alginato no VEGF(500 ou 1000 ng/mL VEGF)
dispersos em no hidrogel automontado (Puramatrix) e PBS. Material disperso foi
coletado, e a concentração de VEGF165 foi determinada pelo ensaio de ligações de
enzimas imuno absorvidas é mostrado em (B) indicando períodos de tempo ou (C)
duração acumulativa ao longo do experimento.
 Torna-se aparente que a revascularização sozinha sem transplante de células em
dentes necróticos é acompanhada pela resolução da lesão periapical e fechamento apical
parcial, mas não permite a geração de um tecido da polpa dental totalmente funcional ao
longo de toda a extensão do canal radicular. Por outro lado, o transplante de células-
tronco humanas gera uma polpa dental ao longo de todo o comprimento de pré-molares
humanos transplantados no espaço subcutâneo de camundongos imuno deficientes. No
entanto, a tradução de regeneração de tecidos de polpa dentária com células-tronco com
base em uso clínico rotineiro enfrenta desafios significativos. Por exemplo, é ainda não
está claro qual é a fonte ideal de células tronco para a regeneração da polpa. Não
sabemos se as células-tronco polpa dental são necessariamente melhores que células
estaminais da gengiva ou células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea na
endodontia regenerativa. Um desafio adicional é que será necessário estabelecer
protocolos de manipulação de célula que seguem as boas práticas de fabrico padrões,
definidos pela Foodand Drug Administration (Administração da Utilização de Drogas)
como a manipulação das células vivas de grau clínico que são seguras e eficazes
terapeuticamente para o paciente, em consultórios odontológicos e laboratórios de
apoio.
Está se tornando cada vez mais evidente que, embora existam muitos aspectos
que podem ser aprendidos da ampla literatura sobre a regeneração do tecido, há
questões que são exclusivas para o campo da endodontia regenerativa. Eles incluem,
mas não estão limitados ao desenvolvimento de estratégias para mobilizar e ao mesmo
tempo proteger os sinais morfogênicos dos derivados da dentina, o desenvolvimento
indesejável da funcionalidade dos scaffolds que permitem a fixação/sobrevivência da
pilha e possa ser usado dentro de canais radiculares como um dispositivo de liberação
lenta para fatores angiogênicos, o desenvolvimento de estratégias que eliminam a
contaminação bacteriana no dente necrosado e a definição das fontes de células-tronco
multipotentes que pode regenerar totalmente a funcionalidade do tecido da polpa dental.
É inquestionável que a maneira mais eficaz de lidar com tais desafios é através do
trabalho integrado das equipes de pesquisa multidisciplinar que reúnem especialistas em
células e biologia molecular, os clínicos odontológicos e os cientistas materiais.