ESCOLA TÉCNICA ESTADUAL MONTEIRO LOBATO

CURSO TÉCNICO EM QUÍMICA (72-A)

PAOLA WOMMER DA SILVA

TÉCNICAS DE OBSERVAÇÃO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO

TAQUARA – RS
2022
EXAME A FRESCO
O exame a fresco ou observação vital tem como objetivo principal,
observar microrganismos vivos em material biológico. O exame a fresco
fundamenta-se na observação de microrganismos vivos (bactérias, protozoários,
fungos e leveduras) em suspensão do material biológico entre lâminas e
lamínulas, onde se pode observar as formas e os movimentos dos mesmos.

Observa-se as bactérias em formas de bacilos, cocos ou espirilos, com

ou sem movimento. Os fungos podem ser observados em hifas filamentosas
com ou sem septos. As leveduras são esferas maiores com ou sem
brotamento. Os protozoários são observados em forma de cistos ou trofozoítos,
com ou sem movimento. Dependendo do material, pode-se observar algumas
células (células epiteliais, leucócitos, hemácias, etc.), fibras, cristais, ovos de
helmintos, etc.

O Exame a fresco é um método de observação que preserva a forma

natural dos microrganismos e reduzem as distorções que somente ocorrem
quando as preparações são secas e fixadas. Em vista da semitransparência das
células, estas preparações não são satisfatoriamente visualizadas a microscópio
ótico de campo luminoso. Assim, se examinados pequenos organismos, como
bactérias, vivas e suspensas em fluidos, veremos que a observação é precária,
e quase impossível discernir claramente sobre qualquer de suas estruturas
internas. É como se estivéssemos vendo um fragmento de vidro claro imerso em
água cristalina.

As preparações a fresco exigem um manuseio completo do microscópio

de campo luminoso. Assim é necessário que se façam ajustes na intensidade da
luz que ilumina os objetos a serem observados, bem como uma regulagem
adequada do condensador. Se possível, é conveniente o emprego de filtros, de
modo a melhorar a qualidade da imagem, em fase da iluminação deste sistema
ótico. Pode-se lançar mão de outros instrumentos. Uma das alternativas é a
microscopia de contraste de fase. A outra forma é o emprego da microscopia de
campo escuro.
 Material: Material biológico em suspensão, lâminas, lamínulas,

microscópio, pipeta Pasteur (ou conta-gotas).

Método: Coletar uma gota do material biológico, colocar no centro da

lâmina e sobrepor cuidadosamente (sem formar bolhas) uma lamínula. Levar ao
microscópio e observar em objetiva de 40 vezes. Após a observação, desprezar
a lâmina e lamínula em um frasco contendo detergente.

Interpretação: Anotar o tipo de microrganismo (bactérias, protozoários,

fungos ou leveduras), as formas e a motilidade.

• Fixação: A fixação evita a autólise celular e impede a proliferação de

microrganismos, preservando a morfologia do tecido e fornecendo maior
resistência para as etapas seguintes. Dessa forma,
a fixação utiliza processos físicos ou químicos para imobilizar as
substâncias constituintes das células e dos tecidos.

• Coloração: é uma técnica bioquímica de adicionar um corante específico

a uma classe (DNA, proteínas, lipídios, carboidratos) a um substrato para
qualificar ou quantificar a presença de um composto específico.

Passo a passo da técnica do exame a fresco

ESFREGAÇO

O esfregaço de sangue permite avaliar leucócitos, hemácias e plaquetas.

Essas populações de células são produzidas na medula óssea e liberadas na
corrente sanguínea quando necessário. A função principal dos leucócitos é
combater infecções. A das hemácias é transportar oxigênio para as células. As
plaquetas são pequenos fragmentos de células que, ao serem ativadas, formam
um tampão como parte dos primeiros passos da coagulação do sangue. O
número de cada tipo de célula varia mas, em geral, é mantido dentro de limites
específicos. Os números podem ser alterados com doença, estresse, exercícios
intensos ou fumo.

O esfregaço de sangue permite observar as células do sangue no

momento da colheita. Para preparar um esfregaço, é espalhada uma gota de
sangue em uma camada fina sobre uma lâmina de vidro e corada com corantes
especiais. Depois de seca, a lâmina é examinada por um especialista usando
um microscópio.

A gota de sangue na lâmina contém milhões de hemácias, milhares de

leucócitos e centenas de milhares de plaquetas. Sob o microscópio, os leucócitos
corados podem ser vistos com facilidade e contados para avaliar a proporção de
cada um de seus tipos. Além disso, permite avaliar se o tamanho, forma e
aspecto das células correspondem ao que é considerado normal. É possível
distinguir cinco tipos diferentes de leucócitos e determinar a proporção de cada
um contando pelo menos 100 leucócitos sucessivos. Durante esse exame, são
avaliados também o tamanho, forma e cor (indicativa do conteúdo de
hemoglobina) das hemácias e o número de plaquetas presentes.

O exame deve ser feito quando os resultados do hemograma estão

anormais, é examinado o esfregaço de sangue e feita uma contagem diferencial
de leucócitos para determinar a presença de células anormais ou imaturas.
Quando o médico suspeita de uma deficiência, doença ou distúrbio que possa
afetar a produção de células do sangue. Quando o paciente é tratado com
medicamentos que podem afetar a produção de células do sangue.
Técnica do esfregaço

Alguns dos principais erros do esfregaço

ESMAGAMENTO

O método de esmagamento é usado nos casos em que existe uma

aderência fraca entre as células do tecido a observar. Para visualizar as células,
basta colocar um pequeno fragmento do tecido entre a lâmina preparada e a
lamínula e fazer uma pequena pressão com o polegar. Utilizamos este método
de forma a obter uma melhor visualização das células, pois o esmagamento faz
com que haja uma separação das células acompanhada pela formação de uma
fina camada que é facilmente atravessada pela luz.

(Ex.: Polpa de Tomate, Raíz de Cebola)

Consiste em cortar o material biológico em finas camadas, susceptíveis

de serem atravessadas por raios luminosos.
 Referencias

http://microbiologia.comunidades.net/exame-a-fresco
https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fslideplayer.com.br%2F
slide%2F5611361%2F&psig=AOvVaw1yr8ZHDTfMbqSfFVOq3gY6&ust=16496
82520138000&source=images&cd=vfe&ved=0CAcQjRxqFwoTCND9wbrIifcCF
QAAAAAdAAAAABAJ
https://labtestsonline.org.br/tests/esfregaco-de-sangue
https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fm.facebook.com%2Fbi
omedicina.ciencia%2Fphotos%2Fpcb.2853062061605260%2F2853061984938
601%2F%3Ftype%3D3%26source%3D49&psig=AOvVaw31esa53hVBASoIJl07
fm6g&ust=1649685363708000&source=images&cd=vfe&ved=0CAcQjRxqFwoT
CIiw14_TifcCFQAAAAAdAAAAABAJ
https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fdocplayer.com.br%2F
6303357-Citologia-e-envoltorios-celulares.html&psig=AOvVaw32iGt-
SO36j05pWBItzLKg&ust=1649686119775000&source=images&cd=vfe&ved=0
CAcQjRxqFwoTCPDUrfXVifcCFQAAAAAdAAAAABAY
http://www.vidrariadelaboratorio.com.br/tecnica-de-esmagamento/