Contini, M.

Protocolo de Coloração PAS (Periodic Acid Schiff)

1. Xilol 1 - 8 minutos
Desparafinização
2. Xilol 2 - 8 minutos
3. Etanol 100% - 5 minutos
4. Etanol 95% - 3 minutos
Hidratação
5. Etanol 70% - 3 minutos
6. H2O d - 5 minutos
7. Ácido periódico 0.5% - 8 minutos

8. H2Od + Água corrente – 40 minutos (cuidar com o fluxo da água pra não desgrudar os cortes! Quando
retirar da água, escorrer bem pois o Reativo de Schiff não pode entrar em contato com água)

9. Reativo de Schiff – 15 minutos NO ESCURO

10. Solução de Metabissulfito de Sódio 0,5% – 3 banhos de 5 min (Fazer na hora que for usar, e a mais,
pois deve-se jogar fora entre cada banho)

11. H2O d + corrente – 10 min (para revelar a reação – cuidar com fluxo de água pra não desgrudar os
cortes)

12. Hematoxilina – 1 min e 30 seg. (*)

13. H2O d + corrente até parar de soltar corante, e deixar na corrente por 5 min

14. Etanol 95% - 1 minuto

Desidratação
15. Etanol 100% - 1 minuto

16. Xilol 3 – 1 minuto

17. Xilol 4 – 1 minuto – as lâminas ficam nesta cubeta até a montagem

* O tempo na Hematoxilina é variável. Se ela for nova, 1 min e 30 s basta. Se não for, deve-se fazer uma
bateria de teste antes de rodar mais lâminas, e ver quanto tempo será necessário.
Solução de ácido periódico a 0.5%

Para 100 ml:

0,5 g - ác. Periódico

H2O d - q.s.p. 100 ml

Solução de metabissulfito de sódio 0,5%:

Para 150 ml:

0,75 g - Metabissulfito de sódio

H2O d - q.s.p 150 ml

Reativo de Schiff:

1 g – Fucsina básica

100 ml – H2O d

4 g – Metabissulfito de sódio

2 ml – Ácido Clorídrico (HCl)

± 2 a 3 colheres de sopa de carvão ativado

(Para fazer mais quantidade (300 ml, 400 ml, etc) dobrar a receita conforme necessário ou usar regra de 3)

Como fazer o Reativo de Schiff:

1. Aquecer a água destilada até ebulição

2. Tirar a água do aquecimento e adicionar a fucsina básica, deixar homogeneizar bem

3. Deixar a solução esfriar até mais ou menos 60 ºC

4. Filtrar ela e adicionar o Metabissulfito e o HCl, homogeneizar

5. Tampar a solução e deixar ela em repouso, no escuro por 24 h (pode cobrir ela com papel alumínio)

6. Após as 24 horas, adicionar o carvão ativado, homogeneizar bem. Quando a solução ficar incolor ou
cor de palha (amarelo bem clarinho) filtrar novamente. Esta é a solução final. Se não ficar incolor ou um
amarelinho bem clarinho, é porquê ficou ruim. Se ficar rosa, deu errado também.

7. Conservar em frasco escuro, coberto com papel alumínio, na geladeira.