Relatório

ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS:
determinação de ácido ascórbico em
efervescente comercial

Disciplina: Química Analítica III.

Professor: Rafael Ribeiro.

Dhion Meyg da Silva Fernandes,

Acadêmico do Curso de Licenciatura em Química do Instituto Federal de Educação,

Ciência e Tecnologia do Ceará – IFCE campus Quixadá,

Quixadá, Outubro de 2014.

DETERMINAÇÃO DE ÁCIDO ASCÓRBICO EM AMOSTRA DE EFERVESCENTE
COMERCIAL

1 INTRODUÇÃO

A natureza é composta de matéria e energia, a partir das diferentes

combinações de átomos tem-se as diferentes formas materiais. É comum o pensamento

de que os materiais (objetos, substâncias laboratoriais, materiais diversos) tenham

apenas qualidades ligadas à matéria que os formam, mas, na verdade, a energia está

atrelada à matéria na construção de tudo o que existe, além disto, os materiais

apresentação uma característica de interação com dada energia específica.

A matéria é formada por átomos que se agrupam de modo a apresentar-se em

moléculas com conformações de forma a alcançar o máximo de estabilidade possível. A

energia – entidade para de capacidade de realização trabalho e/ou transformações – interage

com a matéria a partir de peculiaridades que estão relacionadas ao âmago de sua

estrutura quântica, por exemplo, os orbitais eletrônicos e moleculares, bem como, as

conformações moleculares que tendem a interagir de modo ressonante com diferentes

tipos de energia.

A forma da energia que mais interage com as moléculas é a radiação

eletromagnética, também chamada de energia radiante, essa energia permeia-se por

uma onda eletromagnética que é uma propagação no espaço e no tempo infinito sem

necessidade de um meio para suporte, ou seja, ela passa facilmente pelo vácuo, esta

onda ocorre como um movimento de energia, onde ocorre a formação de um capo

elétrico e outro magnético de modo perpendicular, sendo ambos oscilantes, para

melhor visualização.

O modelo físico ondulatório é falho para a explicação das ondas

eletromagnéticas, assim, a energia radiante é tratada como pacotes de discretos de

energia, os chamados fótons ou quantas, quantidades exatas de energia que estão

relacionadas às propriedades das ondas.

 As propriedades das ondas eletromagnéticas estão relacionadas diretamente à

energia que está a ser propagada. A oscilação dos campos permite a existência de um

pico – parte mais alta da onda – e um vale – parte mais baixa da onda -, a distância entre

dois picos ou dois vales é denominado o comprimento de onda, representado pela letra

grega λ (lâmbda). A energia de onda eletromagnética é inversamente proporcional a seu

comprimento. A Figura 1 retrata a oscilação dos campos elétrico e magnético

perpendicularmente com vetores indicando a amplitude da onda; a Figura 2 mostra

Figura 1 - Onda eletromagnética. Fonte: adaptada de Skoog et al. (2009).

conceitos inerentes às ondas eletromagnéticas importantes para o entendimento da

energia que estas propagam.

-A

Figura 2 - Conceitos sobre ondas eletromagnéticas. Fonte: o autor.

 Outros conceitos que estão diretamente ligados à energia de uma onda

magnética são frequência de onda (v) – número de oscilações de uma onda por unidade

de tempo, em relação a um ponto no espaço, e geralmente medida em ciclos por

segundos ou Hertz (BORGES, 2009) -. À medida que aumenta a frequência de onda,

aumenta-se a energia radiante, posto que o comprimento de onda é menor e as

oscilações passam a ocorrer de modo mais rápido sendo uma quantidade de energia

propagada em menor período de tempo.

Conceitos como amplitude (A) – a altura da onda (positiva ou negativa) -,

período (p) - o tempo necessário para a passagem de dois picos ou dois vales por dado

ponto fixo no espaço –, número de onda (v) – número de ondas de ondas por centímetro,

sendo assim,igual a 1/λ - também são estudados em relações de propriedades

ondulatórias e a respectiva energia propagada.

A velocidade da luz é máximo de velocidade que pode atingir uma onda

eletromagnética (PAULA, 2014). A frequência e o comprimento, e portanto a energia,

de onda definem a coloração a ser percebida pela onda. Considerando a energia

radiante como fótons de luz, pode quantificar sua energia de acordo com a Equação 1,

a seguir.

Equação 1.

Onde E é a energia, h é a constante de Planck (6,63x10-34 J.s), v é a freqüência

de onda, c é a velocidade da luz (3x108 m/s) e v é o número de onda.

Visto que existe uma variedade de energia entre as ondas eletromagnéticas,

existe uma classificação para a energia radiante, esta é feita pela freqüência e

comprimento de onda e estão organizadas linearmente no espectro eletromagnético – é

intervalo completo que compreende as ondas eletromagnéticas que inicia nas baixas

freqüência de radio (ELF), passando a frequências ultra baixas (vlf), ondas de rádio,

microondas, infravermelho, luz visível, ultravioleta, raios X e raios gama (SANTOS,

2014); (SKOOG et al., 2009).

 Ramo da ciência que estuda o fenômeno da interação matéria-energia

eletromagnética é a espectroscopia, o estudo puro das interações da radiação com os

corpos físicos. A aplicação da espectroscopia, isto é, o estudo aplicado deste fenômeno

é a espectrometria, a qual possui diversas ramificações, como a espectrometria de

absorção e emissão atômica e molecular, espectrofotometria, espectrometria de massa,

dentre outras.

Neste trabalho, destacar-se-á o método da espectroscopia na região do

espectro ultravioleta e visível, a chamada espectroscopia UV-VIS, também chamada de

espectrofotometria no UV-VIS.

Consiste em um processo que utiliza radiação eletromagnética com

comprimentos de onda entre 200 nm e 780 nm. Quando a radiação entra em contato

com a matéria ocorrem transições eletrônicas ou excitação molecular, de acordo com as

específicas quantidades de radiação absorvidas ou emitidas após a absorção pode-se

relacionar a Absorbância com a concentração de dada substância que interagiu com a

radiação e proporcionou a realização deste fenômeno. Logo, é um processo útil para

quantificar e qualificar analitos, mesmo em pequenas concentrações (PEREIRA, 2009).

Para a realização do processo é utilizado um espectrofotômetro que é capaz de

emitir radiação em comprimentos de onda específicos e quantificar o grau de interação

da matéria com a energia radiante emitida, bem como os comprimentos específicos da

energia que de fato foi absorvida pelo analito.

A aplicação da espectrofotometria é vasto, na farmácia, na indústria de

alimentos, em produtos agrícolas, na pesquisa científica pura, na análise de condições

de potabilidade de águas e alimentos etc.

Neste trabalho a análise fora na área farmacêutica, atentando para a

determinação de ácido ascórbico em efervescente comercial.

O ácido ascórbico é uma vitamina, a chamada vitamina, é um composto rico

em sítios dotados de potenciais hidrogênios ionizáveis; é um composto hidrosolúvel,

sua importância bioquímica está no fato de ser participante de várias reações celulares
que necessitam de hidroxilação, como pode ser visto na Figura 3, uma molécula de

ácido ascórbico possui 4 grupos hidroxilas.

Figura 3 – Molécula de ácido ascórbico. Fonte: o autor.

Sua importância nos organismos são as mais significativas, dentre várias, além

da supracitada, tem-se a participação na manutenção de ossos e dentes, fortalecimento

do sistema imunológico, atuante na correta utilização histológica do ferro e

contribuinte para a atuação dos leucócitos.

De acordo com Meldau (2009), essa substância pode ser encontrada em

alimentos como frutas cítricas, morango, tomate, pimentão-doce, brócolis, couve-flor,

batatas, batata-doce, manga, kiwi, alho, alface, rúcula etc.

O ácido ascórbico é vendido em comprimidos efervescentes, geralmente com

sabor e aroma de alguma fruta cítrica, o qual geralmente é em função da presença

adicional de um éster. Mas a quantidade é geralmente controlada para padronizações e

precauções contra mau uso.

2 OBJETIVOS

 Preparar e analisar, utilizando a técnica de espectroscopia no UV-Vis,

amostra de vitamina C utilizando o ácido ascórbico em efervescente

comercial;

 Construir uma curva de calibração para determinação de vitamina C

utilizando o ácido ascórbico padrão;

 Fazer as medidas utilizando o espectrofotômetro;

 Obter as bandas de absorção do ácido ascórbico;

 Calcular a quantidade de vitamina C o efervescente.

3 METODOLOGIA

3.1 Materiais Utilizados 3.2 Equipamentos

 Becker;  Espectrofotômetro.

 Balão volumétrico; 3.3 Reagentes

 Bastão de vidro;  Ácido Ascórbico (C6H8O6);

 Cubeta de quartzo;  Amostra de ácido ascórbico (C6H8O6).

 Pipetador automático.

3.4 Procedimentos

 Calibração do Espectrofotômetro UV-Vis

Anteriormente à realização do experimento, calibrou-se o

espectrofotômetro com auxílio do software Vision Pro. Nesta atividade

definiu-se parâmetros para o funcionamento do equipamento de acordo

com as especificidades que se estipulava mais plausíveis à prática. Fora

ajustada a quantidade de cubetas a serem utilizadas, parâmetros do

diâmetro do feixe a ser emitido e energia radiante, velocidade da leitura e

tempo de intervalo sua realização. Ajustou-se ainda o espectrômetro para

que fosse possível a geração de gráficos de absorbância e, pelo fato de ser

desconhecido o comprimento de onda no qual absorve a molécula do ácido

ascórbico, fez-se o ajuste para a leitura no intervalo de 190 a 800 nm,

assim verificar-se-ia qual o comprimento de maior absorbância.

 Preparo da Curva de Calibração

Preparou-se uma solução-mãe de ácido ascórbico de concentração 20

ppm; posteriormente, diluiu-se a solução-mãe em cinco soluções analitos,

as quais continham, 100, 200, 300, 400 e 500 μL de ácido ascórbico 20

ppm em 1 mL de água destilada, essas foram as amostras colocadas nas

cubetas de quartzo e analisadas no espectrofotômetro (após terem sido

homogeneizadas); as concentrações das soluções dispostas nas cubetas

foram (anteriormente à análise no espectrofotômetro) quantificadas

seguindo a equação de número de equivalência (sabido que número de

 mols é igual a molaridade multiplicada pelo volume) – M1.V1 = M2.V2. As

concentrações são as referidas a seguir.

 Solução 1 (100 L de AA + 1 mL de água destilada) = 1,82 ppm;

 Solução 2 (200 L de AA + 1 mL de água destilada) = 3, 33 ppm;

 Solução 3 (300 L de AA + 1 mL de água destilada) = 4, 62 ppm;

 Solução 4 (400 L de AA + 1 mL de água destilada) = 5, 71 ppm;

 Solução 5 (500 L de AA + 1 mL de água destilada) = 6,66 ppm;

Preparou-se o ensaio em branco com 2 mL de água destilada; finalmente,

realizou-se a leitura no espectrofotômetro na ordem específica a seguir.

Branco  soluções 1  2  3  4  5

É válido salientar que o resultado referente à leitura da solução 5 fora

excluído da análise posto que a cubeta fora colocada de modo inadequado

no espectrofotômetro, isto prejudicou consideravelmente a penetração da

energia radiante na cubeta e a interação desta energia com o ácido

ascórbico fora potencialmente prejudicada.

 Leitura da Amostra de Ácidos Ascórbico

Mediu-se uma amostra de ácido ascórbico com concentração desconhecida

e fora medida sua absorbância.

É válido relatar que não fora medida uma amostra de ácido ascórbico

proveniente de efervescente comercial pelo fato de ser desconhecido o

comprimento de onda no qual a energia radiante é absorvida pelos

corantes presentes nos efervescentes, isto poderia causaria erros graves na

análise do analito.

4 RESULTADOS E DISCUSSÕES

Para a exibição d curva de calibração fora necessário identificar o pico máximo

que expressa o comprimento de onda mais absorvido pelo ácido ascórbico, de acordo

com o Gráfico 1, supõe-se que o comprimento no pico de absorção é aproximadamente

264 nm.
 0,2
0,18 5, 71 ppm

0,16
1, 82 ppm
0,14
Absorbância

0,12
3, 33 ppm
0,1
0,08 4, 62 ppm
0,06
0,04
0,02
0
180 220 260 300 340 380 420 460 500 540 580 620 660 700 740 780

Comprimento de onda (nm)

Gráfico 1 – Bandas típicas de absorção no UV-Vis do ácido ascórbico. Fonte: o autor.

Conhecido o comprimento de onda em que o ácido ascórbico mais absorve,

fez-se a curva de calibração em função das concentrações (excetuando a amostra 5, pelo

motivo salientado), o Gráfico 2 mostra a curva de calibração com absorção no

comprimento de onda de 264 nm em função da concentração do analito. A partir do

gráfico tem-se os seguintes resultados: curva padrão da concentração de ácido

ascórbico em função da absorbância no comprimento de onda de maior grau de

absorção, equação da reta e a regressão linear da reta, R², a qual informa quanto à

incerteza da curva de calibração.

0,07

0,06

0,05
Absorbância

0,04

0,03
y = 0,0129x - 0,0055
0,02 R² = 0,9775

0,01
1,7 2,7 3,7 4,7 5,7 6,7
Concentrações de ácido ascórbico (ppm)

Gráfico 2 – Curva de calibração de absorbância no UV-Vis do ácido ascórbico em função da

concentração em ppm. Fonte: o autor.

 O Gráfico 3 mostra a análise da absorbância em função do comprimento de

onda, no pico de 264 nm, a absorbância fora de 0,053, este dado possibilita a realização

da determinação da concentração de ácido ascórbico no analito, ao utilizar a equação

da reta obtida com os valores de a e b no Gráfico 2.

Gráfico 3 – Absorbância no comprimento de onda pico (264 nm) do ácido ascórbico.

Fonte: o autor.

Utilizando a equação da reta com a e b conhecidos (expostos no Gráfico 2) e

com a absorbância conhecida, 0,053, (exposta no Gráfico 3), pode-se determinar a

concentração de ácido ascórbico em análise como feito a segui.

5 CONCLUSÃO

Os objetivos foram alcançados, pois fora possível construir a curva de

calibração para a determinação da vitamina C utilizando o ácido ascórbico padrão;

utilizar o espectrofotômetro; obter bandas de absorção do analito e, mesmo não sendo

referente à amostra de efervescente comercial, fora possível determinar ácido ascórbico

em amostra de concentração desconhecida.

 Os erros ocorridos, como salientados, revelam a necessidade de um alto grau

de cuidado, habilidade e concentração na realização dos experimentos, posto que o

simples fato de colocar uma cubeta em uma orientação errada causa um erro grave nos

resultados, sendo necessário até mesmo excluir o dado referente a tal atividade.

6 REFERÊNCIAS

 BORGES, P. D. Apostila de Física. UFSM, 2009.

 MELDAU, D. C. Vitamina C. InfoEscola. Disponível em:
<http://www.infoescola.com/ bioquimica/vitamina-c/>. Acesso em 16 out.
2014.
 PAULA, R. N. F.Ondas Eletromagnéticas. InfoEscola. Disponível:
<http://www.infoe scola. com/fisica/ondas-eletromagneticas/>. Acesso em 14
out. 2014.
 PEREIRA, D. K. S. ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO
MOLECULAR UV-VIS: Determinação de Fe(II) usando 1,10-fenantrolina
como reagente complexante. 2009. Ebah. Disponível em: <
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAboUAI/relatorio-
espectrofotometria-absorcao-molecular-uv-vis >. Acesso em 16 out. 2014.
 SANTOS, M. A. S. Espectro Eletromagnético. Mundo Educação. Disponível
em: < http://www.mundoeducacao.com/fisica/espectro-
eletromagnetico.htm>. Acesso em 15 out. 2014.
 SKOOG, D.A.; WEST, D.M.; HOLLER, F. J.;STANLEY, R.C. Fundamentos da
Química Analítica.Tradução da 8ª ed. Norte-Americana.São Paulo:Cengage
Learning, 2009.