1.

Definição

A proteína bruta é determinada pelo teor de nitrogênio liberado na forma de amônia.

Portanto, a proteína bruta não representa somente o nitrogênio proveniente de
aminoácidos do alimento, mas também de outros compostos nitrogenados. Isso não
significa que todo o nitrogênio é quantificado na análise, pois o nitrogênio de nitratos
e nitritos, pelo método descrito aqui, não é transformado em amônia. A amostra é
pesada em balança analítica, depois digerida com ácido sulfúrico concentrado em
presença de catalisador formando sulfato de amônio. Em seguida é tratada com
solução de hidróxido de sódio em excesso, liberando o hidróxido de amônio que é
coletado em um erlenmeyer contendo solução de ácido bórico como solução
indicadora. O borato ácido de amônio formado é titulado com ácido sulfúrico.

2. Material e Reagentes

- Balança analítica

- Suporte de pesagem

- Bloco digestor

- Tubos para digestão

- Lavador de gases (Scrubber)

- Destilador de nitrogênio

- Vidrarias

- Ácido sulfúrico concentrado

- Solução de ácido sulfúrico 0,1143N

- Mistura catalítica composta por 835g de sulfato de sódio, 0,005g sulfato de cobre e
3g de dióxido de titânio

- Hidróxido de sódio 50%

- Solução de ácido bórico 2% com indicador

3. Procedimento
- Pesar aproximadamente 0,5000g da amostra no suporte de pesagem e anotar o peso
real

- Transferir para o tubo de digestão

- Adicionar aproximadamente 9g de catalisador e 15 mL de ácido sulfúrico concentrado

escorrendo pelas paredes do tubo para arrastar os resíduos, no caso do farelo

- Misturar brandamente e colocar para digerir

- Ligar o controlador de temperatura e o lavador de gases (Scrubber)

- Colocar os tubos no equipamento até a temperatura máxima de 150 º C, por motivo

de segurança e garantia de que não ocorrerá perda da amostra

- Aguardar até que a temperatura atinja 420º C

- Marcar o tempo de 90 minutos para a completa digestão

- Aguardar por alguns minutos para a retirada dos tubos do equipamento e assim que
a temperatura estiver mais baixa transferir para o suporte para total resfriamento

- Retirar os condensadores e acrescentar 90 mL de água destilada, tomando o cuidado

de escorrer pelas paredes do tubo

- Agitar para evitar a cristalização e como a reação é exotérmica será necessário

aguardar novamente o resfriamento

- Ligar o destilador de nitrogênio na chave geral e a caldeira

- Assim que o LED indicativo de volume acender, desligar a chave da caldeira

- Adicionar exatamente 40 mL de solução de ácido bórico 2% em um erlenmeyer de

300 mL

- Colocar no destilador de nitrogênio com o tubo de saída imerso na solução de ácido

bórico

- Conectar o tubo no destilador de nitrogênio, vedando completamente e utilizando a

rosca

- Adicionar lentamente através do compartimento de vidro 50 mL de uma solução de

hidróxido de sódio 50%, fechando a válvula sempre que houver muita turbulência, pois
a reação é muito violenta

-Somente após todo o volume da solução de hidróxido de sódio ser adicionado, ligar o
aquecimento

- Destilar até que o volume de 200 mL seja atingido no erlenmeyer

- Lavar com água destilada o tubo que estava imerso na solução com o auxílio de uma
pisseta para o recolhimento de toda a solução

- Desligar o aquecimento e desconectar o tubo

- Desligar o equipamento na chave geral e fazer a limpeza passando água destilada por
todo o sistema (compartimento da solução de hidróxido de sódio e condensação)

- Titular a solução recolhida no erlenmeyer com ácido sulfúrico 0,1143 N até a

mudança para coloração púrpura (pH =4,7)

- Uma determinação em branco deve ser realizada semanalmente com água destilada
e descontar o volume gasto na titulação no branco do volume gasto na titulação da
amostra

- A performance do método deve ser checada uma vez por semana com padrão de L-
cistina e o resultado deve ficar entre 11,54 e 11,66%

4. Cálculo

% de Proteína Bruta = (V1 – V2) x N x Fc1 x Fc2 x 0,014 x 100/ m

V1 = volume gasto na titulação da amostra

V2 = volume gasto na titulação do branco

N = Normalidade da solução de ácido sulfúrico = 0,1143 N

Fc1 = fator de correção da solução de ácido sulfúrico

Fc2 = fator de correção do nitrogênio = 6,25

m = massa da amostra

O fator de correção do nitrogênio (Fc1) é de 6,25, pois se considera que uma molécula de
proteína contem em média 16% de nitrogênio.

100g de proteína _______16g de nitrogênio

X g de proteína ________ 1 g de nitrogênio

X = 6,25

Simplificando o cálculo, devido as constantes temos:

% de Proteína Bruta = (V1 – V2) x Fc1 x 1,002 / m

Performance do método: realizar a análise utilizando cerca de 0,2 g de L-cistina

Cálculo = m x 6,25 / (V1 – V2) x Fc1

5. Valor Padrão

O valor padrão de proteína bruta adotado pela empresa é:

soja em grãos: de 34 a 36%

farelo de soja: 45,5 a 46,5%

6. Método de Referência: AOCS Ba 4d-90