Anlise de protenas

Rogrio Minini 1

Os princpios bsicos incluem:
Rogrio Minini 2
Determinao de nitrognio orgnico
(Kjeldahl)
Presena de ligaes peptdicas (Biureto)
Absoro no UV (devido a Trp e Tyr)
Presena de grupos amino livres (Ninhidrina
Arg e Lys)
Capacidade de ligao de corantes (Bradford)
Presena de AAs aromticos (Fluorescncia -
Phe e Trp)
Mtodo de Kjeldahl
Rogrio Minini 3
Desenvolveu em 1883 o processo bsico para
determinao de nitrognio orgnico total. Os
passos incluem:
Digesto: H2 SO4 (conc.) a 350-400 C + catalisador
Neutralizao e Destilao
Titulao
Converso do teor de N total para teor de
protena
Johann Kjeldahl
(1849-1900)
Mtodo de Kjeldahl
Rogrio Minini 4
Protena
H
2
SO
4
(conc.) + K
2
SO
4
+ catalisador
(NH
4
)
2
SO
4
H
2
SO
4
: Aumenta o Ponto de Ebulio do H
2
SO
4
(de 337 para mais de 400C)
Digesto mais eficiente
CuSO
4
: Catalisador. Acelera o processo de oxidao da matria orgnica
Mtodo de Kjeldahl
Rogrio Minini 5
Neutralizao e Destilao
(NH
4
)
2
SO
4
+ 2NaOH 2NH
3
+ Na
2
SO
4
+ 2H
2
O
NH
3
+ H
3
BO
3
NH
4
H
2
BO
3
Borato de
amnio
Mtodo de Kjeldahl
Rogrio Minini 6
Titulao
NH
4
H
2
BO
3
+ HCl

H
3
BO
3
+ NH
4
Cl
Mtodo de Kjeldahl
Rogrio Minini 7
At que ponto o cido adicionado amostra?
At o PONTO DE VIRAGEM
Volumetria
Rogrio Minini 8
1 passo: Despejar lentamente o
contedo da bureta sobre a amostra
agitando esta ltima
constantemente.
2 passo: Quando ocorrer a
mudana de incolor para rosa claro,
a titulao ter atingido o ponto de
equivalncia entre a base e o cido
3 passo: Anotar o volume de
Titulante gasto e calcular a
concentrao do Titulado.
N
titulante
x V
titulante
= N
titulado
x V
titulado

0,1 x 10 ml = N
titulado
x 20 ml
N
titulado
= 0,05 N
Volumetria
Rogrio Minini 9
1 Eq HCl _____________ 1 Eq Nitrognio
1N (1Eq/1000 mL) _____ 14 g Nitrognio
1N (1mL) ____________ 0,014g Nitrognio
0,1N (1mL) ___________ 0,0014g Nitrognio

Logo:
1mL (0,1N) __________ 0,0014g Nitrognio
Vol. de HCl __________ Xg Nitrognio
Volumetria
Rogrio Minini 10
A maioria dos alimentos (*) possui em mdia 16% de
nitrognio,

portanto:
16g N _______ 100g protenas
1g N ________ Xg

Xg = 100/16 = 6,25

O teor de protena bruta de um alimento obtido pela
multiplicao do teor de N - total pelo fator de
converso (6,25).
Mtodo de Kjeldahl
Rogrio Minini 11
O contedo de protena para alimentos
especficos pode utilizar fatores especficos:
Mtodo de Kjeldahl
Rogrio Minini 12
Vantagens
Aplicvel a todos os tipos de alimentos
Relativamente simples
No caro
Preciso. Trata-se de um mtodo oficial para a
determinao de protenas
Vem sendo modificado para anlise de microgramas de
protena (micro Kjeldhal)

Desvantagens
Mede Nitrognio orgnico total, no apenas nitrognio de
protenas
Demorado
menos preciso que o mtodo do biureto
Utiliza reagentes corrosivos.
Mtodo de Kjeldahl
Rogrio Minini 13
Outras possveis fontes de N na amostra:
Amino cidos livres
Pequenos peptdeos
cidos nuclicos
Amino acares
Porfirinas
Algumas Vitaminas
Alcalides
Uria
ons Amnio
Rogrio Minini 14
CLOROFILA
CIANOCOBALAMINA