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Sequenciamento de

polipeptdios e protenas
Universidade Federal de Gois
Disciplina: Bioqumica
Docente: Geraldo
Discentes:
Kelly Marinho Vieira 123810
Patrcia Fernandes de Souza 123816

Protenas
Protenas: informao gentica.
20 aminocidos.
A partir das combinaes pode gerar produtos diversos.

Polipeptdeos
Variam de tamanho: dois ou trs a milhares de resduos de
aminocidos ligados.
Ligao peptdica.

Peptdeo
So cadeias de aminocidos.
O resduo de aminocido na extremidade com um grupo aamino livre chamado de resduo aminoterminal(N-terminal).
O resduo da outra extremidade com um grupo carboxil livre
chamado carboxiterminal(C-terminal).

Estrutura das protenas

Sequenciamento de
Polipeptdeos
So utilizados vrios procedimentos na analise da estrutura
primaria das protenas.
Tcnicas para marcar e identificar aminocidos amino terminal
Sanger-reagente 1-fluor-2,4 dinitrobenzeno(FDNB).
O polipeptdio e hidrolisado em seus aminocidos
constituintes.
O aminocido aminoterminal e marcado.
Auxilia na determinao do numero de polipeptdios nas
protenas.

Peptdeo

Sequenciamento de
Polipeptdeos
Mtodo da degradao de Edman: para sequenciar um
polipeptdio inteiro, marca e remove apenas o resduo Nterminal de um peptdeo.
O peptdeo reage com fenilsotiocianato convertendo o
aminocido terminal no aduto feniltiocarbamoila(PTC) .
Ligao peptdica contigua as aduto PTC rompida.
O aminocido derivado extrado de solventes orgnicos
convertido em feniltiodantonna.
O novo resduo amino terminal exposto pode ser marcado,
removido e identificado.
O tamanho do polipeptdeo depende da eficincia das etapas
qumicas.

Imagem de um sequenciador de protenas PPSQ-23.

Sequenciamento de protenas
Polipeptdios elevados em protenas precisam ser quebradas
para um sequenciamento eficiente.
A protena clivada(mtodos qumicos e enzimticos).
Cada segmento purificado e sequenciado pelo procedimento
de Edman.
A ordem que os fragmentos aparecem na protena original
determinada.
As ligaes dissulfeto precisam ser rompidas.
Quebra das cadeias polipeptdica-enzimas proteases.
Cada fragmento de peptdeo resultante da ao da tripsina
sequenciado.
Ordenao dos fragmentos de peptdeo-outra amostra de
polipeptdios intactos quebrada em fragmentos.

Sequenciamento de protenas
As sequencias de aminocidos de cada fragmento obtido
pelos dois procedimentos de quebra so examinadas.
O aminocido terminal for identificado antes da fragmentao
inicial.
Localizao das ligaes dissulfeto: aps o sequenciamento
completo.
Determinao da sequencia de polipeptdios atravs da
sequencia de nucleotdeos do gene que o codifica.

Importncia

Referncia:
COX, Michael M. NELSON, David I. Princpios de Bioqumica de
Lehninger. 5 Edio. Editora Sarvier.