Peptdeos e Protenas

Composio de peptdeos e protenas

aminocidos

Relao entre funo da protena e sua composio de AAs altamente dependente

Protenas de diferentes funes apresentam em sua composio AAs diferentes

Doenas genticas podem ser atribudas a produo de protenas defeituosas:

- anemia falciforme: mudana de um resduo de AA
- Distrofia muscular de Duchenne: deleo de grande parte da cadeia polipeptdica

A ligao peptdica

Formao de uma ligao peptdica por condensao

Leu

Ala

Ser

Gly

Oligopeptdeo

Polipeptde at 10.000 Da
Protena

Tyr

Importante: como representar numericamente os resduos de aminocidos de uma

cadeia polipeptdica

Algumas caractersticas dos peptdeos

Peptdeo: s apresenta um grupo -carboxil livre e um -amino livre nas extremidades

opostas

+H

3N-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-..............-AAn-COO

Grupos R

O comportamento cido-base de um peptdeo pode ser predito tanto pelos grupos -carboxil
e -amino livres quanto a partir da natureza e do nmero de seus grupos R ionizveis.

Como os aminocidos livres, os peptdeos tambm possuem curvas de titulao caractersticas

e um pH isoeltrico caracterstico (pI)

Caractersticas importantes utilizadas nas tcnicas de separao de peptdeos e protenas

Obs: No confundam.......
O pKa de grupos ionizveis de um aminocido isolado pode variar quando o mesmo
encontra-se como um resduo em um peptdeo. A perda da carga dos grupos -carboxil
e -amino envolvidos na ligao peptdica, as interaes com outros grupos R e outros
fatores ambientais, podem afetar o pKa.

Os peptdeos diferem no tamanho e na composio

de aminocidos

Grande diversidade funcional de molculas dessa natureza

Exemplos de pequenos peptdeos de ocorrncia

natural

 Ocitocina : 9 resduos - estimula a contrao uterina e

produo de leite
Bradicinina: 9 resduos - inibe a reao inflamatria nos
tecidos
TRH: 3 resduos - fator liberador da tireotrofina formado
no hipotlamo e capaz de estimular a liberao de
outro hormnio (tirotropina), da glndula hipfise.
Encefalinas : induzem analgesia
Amanitina: venenos de cogumelo (altamente txicos),
porm so antibiticos poderosos

Trabalhando com peptdeos e protenas

Sntese de peptdeos
- Qumica

- Enzimtica

- DNA\RNA

- Clssica ou Soluo

- Fase slida

Nobel 1984

Como podemos separar peptdeos e/ou protenas misturadas em um mesmo meio ???

O que poderamos utilizar como ponto de partida ???

Tamanho
Carga
Afinidade
Solubilidade

As protenas podem ser separadas e purificadas

Precipitao (sulfato de amnio)

Dilise
Permeao em gel
Troca inica
Eletroforese
Afinidade
HPLC ou CLAE

Extrao

Dilise: pr-purificao

Purificao?

Fundamental para determinar suas propriedades, sua composio

e seqncia dos AA

As protenas podem ser separadas com base em suas propriedades,

tais como:
Carga
Tamanho

Afinidade
Solubilidade

Carga: troca inica

Cromatografia em coluna

Tamanho: permeao em gel

Afinidade

Cromatografia de Troca inica

Mtodo de separao por carga

-Catinica
-Aninica

Denominaes da tcnica: CUIDADO PARA NO CONFUNDIR

Permeao em gel
Separao por tamanho

Afinidade
Separao por interaes intermoleculares: ligaes fracas

IMOBILIZAO DO LIGANTE (L)

ADSORO DA SUBSTNCIA DE INTERESSE (S)

impurezas

DESLIGAMENTO DA SUBSTNCIA DE INTERESSE (S)

FIGURA 5. Princpio da Cromatografia de Afinidade.

soluo
salina
com
ligante
livre

Eletroforese
Tcnica de separao e caracterizao de peptdeos e protenas

Gel de poliacrilamida: peneira molecular

Liga-se maioria das protenas em quantidades

aproximadamente proporcionais: 1 SDS para
cada 2 resduos de AA
Gera uma carga global protena
extremamente negativa

Vamos ver se entenderam !!!!!!