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(2 VÍDEOCONFERÊNCIA) Eletroforese
(2 VÍDEOCONFERÊNCIA) Eletroforese
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Eletroforese
É um processo que consiste na separação dos componentes de um sistema através da aplicação de
um campo elétrico.
É usado para separar e analisar biomoléculas.
Princípio:
Substâncias em solução que possuem carga elétrica livre, deslocam-se quando submetidas a um campo
Para que uma partícula se mova é necessário que possua carga elétrica livre, isto é, excesso ou
diferença de elétrons.
Portanto:
de corrente elétrica
1-Identificação de substâncias
As moléculas são separadas umas das outras conforme o tamanho, a carga elétrica e a forma.
Tipos de eletroforese
- Livre
- Anticonvectante
- Carga da partícula
- Peso da partícula
- pH (solução tampão)
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Moléculas grandes migram lentamente, enquanto moléculas pequenas movem-se
rapidamente.
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N E i i
Ni
E i
E i Pi E i
N N
Eletroforese
i i
Suportes:
- Acetato de celulose
- Gel de agarose
- Gel de poliacrilamida
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A técnica é tão sensível, que pode ser usada eficientemente para separar
moléculas que diferem apenas muito sutilmente em suas cargas e/ou
massas.
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N i Ei c2 2 m 2
PV Ni A mu 2 N A mN i N A c 2 N A average kinetic energy / molecule
E 3 E i 3 Pi 2E i 3
N i N i
Eletroforese
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Eletroforese: a concentração do gel
A concentração do gel
definirá o tamanho dos
poros a serem
atravessados pelas
moléculas em migração.
Geis muito
concentrados oferecerão
maior resistência à
migração das moléculas.
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N i Ei c2 2 m 2
PV Ni A mu 2 N A mN i N A c 2 N A average kinetic energy / molecule
E 3 E i 3 Pi 2E i 3
N i N i
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Eletroforese em suporte
esta eletroforese.
Seqüenciamento Automático
de DNA
longo da seqüência.
• Tipos de gel de eletroforese
• Gel de agarose
das amostras.
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Diferentes sistemas de revelação dos géis: a) brometo de etídio; b) nitrato de
da mãe e do filho;
2- na identificação de criminosos.
de diagnóstico);
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Pólo -
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O Sequenciamento
de moléculas de DNA
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi
>gi|33869444|gb|BC008730.2| Homo sapiens hexokinase 1, mRNA (cDNA clone MGC:1724 IMAGE:3163058), complete cds
GGCTGCGGAGGACCGACCGTCCCCACGCCTGCCGCCCCGCGACCCCGACCGCCAGCATGATCGCCGCGCA GCTCCTGGCCTATTACTTCACGGAGCTGAAGGATGACCAGGTCAAAAAGATTGACAAGTATCTGTATGCC
ATGCGGCTCTCCGATGAAACTCTCATAGATATCATGACTCGCTTCAGGAAGGAGATGAAGAATGGCCTCT CCCGGGATTTTAATCCAACAGCCACAGTCAAGATGTTGCCAACATTCGTAAGGTCCATTCCTGATGGCTC
TGAAAAGGGAGATTTCATTGCCCTGGATCTTGGTGGGTCTTCCTTTCGAATTCTGCGGGTGCAAGTGAAT CATGAGAAAAACCAGAATGTTCACATGGAGTCCGAGGTTTATGACACCCCAGAGAACATCGTGCACGGCA
GTGGAAGCCAGCTTTTTGATCATGTTGCTGAGTGCCTGGGAGATTTCATGGAGAAAAGGAAGATCAAGGA CAAGAAGTTACCTGTGGGATTCACGTTTTCTTTTCCTTGCCAACAATCCAAAATAGATGAGGCCATCCTG
ATCACCTGGACAAAGCGATTTAAAGCGAGCGGAGTGGAAGGAGCAGATGTGGTCAAACTGCTTAACAAAG(...)
TGACAGGCCTTCTGGGCCTCCAAAGCCCATCCTTGGGGTTCCCCCTCCCTGTGTGAAATGTATTATCACC
AGCAGACACTGCCGGGCCTCCCTCCCGGGGGCACTGCCTGAAGGCGAGTGTGGGCATAGCATTAGCTGCT TCCTCCCCTCCTGGCACCCACTGTGGCCTGGCATCGCATCGTGGTGTGTCAATGCCACAAAATCGTGTGT
CCGTGGAACCAGTCCTAGCCGCGTGTGACAGTCTTGCATTCTGTTTGTCTCGTGGGGGGAGGTGGACAGT CCTGCGGAAATGTGTCTTGTCTCCATTTGGATAAAAGGAACCAACCAACAAACAATGCCATCACTGGAAT
TTCCCACCGCTTTGTGAGCCGTGTCGTATGACCTAGTAAACTTTGTACCAATTCAAAAAAAAAAAAAAAAAA
PCR
a reação em cadeia da polimerase
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi
http://dotsub.com/view/538a719f-927b-4192-8e95-18a92a
9e95a5
Coloração das moléculas
• Brometo de etídio
– Agente intercalante do DNA
• Cancerígeno!
– Composto fluorescente à luz UV
– Gel de agarose
• Prata
– Gel SDS-PAGE
• PoliAcrilamide Gel Electrophoresis
– Melhor resolução
• Coomassie blue, etc
Figura Exclusão - Observe que um dos alelos (banda) do
Figura Inclusão - Observe que um dos alelos (banda)
filho é proveniente da mãe. O outro alelo, no entanto, difere
do filho é proveniente da mãe e o outro alelo dos alelos do suposto pai. Neste caso, ocorreu uma
exclusão de paternidade.
proveniente do suposto pai. Neste caso, a
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Indicações para realizar eletroforese
Lesões osteolíticas
Fraturas espontâneas
Insf. Renal
Hipercalcemia
As imunoglobulinas são moléculas multifuncionais,
lambda.
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Nos mamíferos são encontradas 5 classes principais de
epsilon.
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Eletroforese de Proteínas Séricas e Imunofixação
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N E i i
Ni
E i
E i Pi E i
N N
Eletroforese
i i
- Mobilidade
- Diâmetro
- Peso molecular
- Força iônica
- Viscosidade
- Endosmose
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N i Ei c2 2 m 2
PV Ni A mu 2 N A mN i N A c 2 N A average kinetic energy / molecule
E 3 E i 3 Pi 2E i 3
N i N i
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Eletroforese
Proteínas séricas:
- Albumina
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Eletroforese
- Ultracentrifugação
- Quilomicrons
- Lipoproteína Beta
- Lipoproteína Pré-beta
- Lipoproteína Alfa
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Eletroforese
Hemoglobina
- Hemoglobina anormais
- Carga elétrica
- Ponto isoelétrico
- Hemoglobina S
- Hemoglobina C
- Talassemia Beta
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Eletroforese
Hemoglobina S
- Hemoglobinopatia estrutural
( anemia falciforme)
- Traço siclêmico
- Geralmente assintomáticos
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Eletroforese
Hemoglobina C
- Hemoglobinopatia estrutural
- Anemia
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Eletroforese
Talassemia Beta
- Indivíduos homozigotos
- Indivíduos heterozigotos
Eluição
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Eletroforese: métodos de leitura
Densitometria
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A eletroforese de proteínas (EFP) no soro pode ser
infecção crônica
doença autoimune
fraqueza e fadiga
perda de peso
fraturas ósseas
infecções recorrentes
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OBRIGADA!!!
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