Actividade 1

Introdução

A electroforese é uma das técnicas básicas da Biologia Molecular e é uma das

mais utilizadas pelos cientistas no seu trabalho diário. Esta técnica permite a separação
de moléculas de diferentes tamanhos. Em 1970, Daniel Nathans utilizou a electroforese
em gel de poliacrilamida como uma técnica simples e rápida para separar fragmentos de
DNA. A partir daí esta técnica disseminou-se de tal modo que, actualmente, ela é
utilizada em virtualmente todos os laboratórios de biologia molecular.
Electroforese significa literalmente “transportar através de electricidade”.
A electroforese em gel de agarose permite separar moléculas com base na sua
carga, tamanho e forma, que se encontrem em suspensão numa solução electrolítica
(solução que possui iões livres) e sujeitas à aplicação de uma corrente eléctrica. No final
do processo, as moléculas estão mais ou menos próximas de cada um dos eléctrodos
consoante a sua carga, forma e tamanho.

Actividade laboratorial

Electroforese em Gel de Agarose de Corantes Alimentares

Separação de moléculas presentes em diferentes corantes alimentares.

Material e Equipamento

Para cada grupo (quatro alunos) Para a turma

• Micropipetas e respectivas pontas. • Tina de electroforese e fonte de
• Amostras de corantes alimentares em alimentação.
microtubos etiquetados. • Agarose a 0,8% em solução-
1. Verde (G) tampão TAE a 1X (fundida)
2. Azul (B) • TAE 1X para tina de
3. Vermelho (R) electroforese
4. Amarelo (Y) • Banho-maria.

Preparação do gel de agarose

Equipamento Reagentes
• Micro-ondas • Pó de agarose
• Frasco de 250ml • Solução-tampão
• Parafilme
• Balança
• Papel de pesagem
• Banho-maria
 1. Pesar 1g de agarose num papel de pesagem previamente dobrado.
2. Colocar num frasco de 250ml.
3. Adicionar 125ml de solução-tampão à agarose.
4. (Nota: o frasco só deve ser cheio até metade da sua capacidade para prevenir que
durante a ebulição a solução extravase)

5. Se usar um frasco a tampa deve permitir a libertação do ar durante a ebulição. Se

usar um recipiente deve tapar com parafilme e fazer um furo.

6. Agitar a solução (verificar se não permanecem grumos ou fibras não

dissolvidas).
7. Colocar a solução no micro-ondas a temperatura elevada até à completa
dissolução.

Carregar as amostras

1. Registe no caderno o poço onde vai carregar as amostras de corantes (R, Y, G,

B).
2. Carregue as amostras de corantes numeradas nos poços no meio do gel.
3. Ligue a tina de electroforese à fonte de alimentação (vermelho com vermelho e
preto com preto).
4. Aplique uma diferença de potencial de 100V. Os corantes deslocar-se-ão em
direcção aos pólos positivo e negativo.
5. Realize a electroforese durante 10 minutos, no final desligue a fonte de
alimentação.

Correr o gel

1. Colocar um eléctrodo em cada uma das extremidades do tanque,. Ligar os

eléctrodos à bateria usando fios com pinças em crocodilo. Baterias suficientes
(em série) devem ser usadas de forma a gerar não mais que 36 volts no total.
Certifique-se de que o pólo positivo da bateria está ligado ao eléctrodo mais
afastado dos poços.
2. Verifique que há contacto entre a solução tampão e os eléctrodos (adicione um
pouco mais de TBE tampão se necessário). Bolhas devem ser vistas, vindas de
ambos os eléctrodos se a corrente fluir.
3. Deixe o gel correr, sem mexer, por várias horas. Numa sala quente pode ser
necessário colocar o gel num saco plástico, de modo a evitar a desidratação.
 4. Desligue a bateria assim que o corante termine de correr. Se deixar as baterias
ligadas o DNA vai passar para lá do fim do gel.
5. Enxagúe as pinças em crocodilo e seque-as de forma a prevenir a corrosão.

Análise do gel

• Remova o gel da tina de electroforese com muito cuidado.

• Registe o padrão de bandas no V de Gowin.

Conclusão
• Complete o V de Gowin.
• Apresente e discuta os resultados no grupo-turma.

Teoria: Biotecnologia. É possível Conclusões:

separar os
Princípios: corantes por
• Os corantes alimentares electroforese?
possuem moléculas com
diferente carga eléctrica.

• A passagem de corrente e
por uma solução
electrolítica permite a
migração das moléculas
que estão em suspensão
nessa solução. Resultados:

• As moléculas com carga

positiva migram para o
pólo negativo durante uma
electroforese.

• As moléculas com carga

negativa migram para o
pólo positivo durante uma
electroforese.
Procedimento:
Conceitos: Corantes, agarose,
electroforese, solução
electrolítica, electricidade.