PESQUISA

LEOS ESSENCIAIS
Potencial anti-inflamatrio
Fotos cedidas pelos autores

Antnio Carlos Siani Andr Luiz Franco Sampaio

siani@gene.dbbm.fiocruz.br sampaio@gene.dbbm.fiocruz

Mariana Conceio de Sousa Maria das Graas Mller Oliveira Henriques

mcsouza@far.fiocruz.br henrique@gene.dbbm.fiocruz.br Laboratrio de Qumica de Produtos Naturais e Farmacologia Aplicada de Far-Manguinhos, Fundao Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro

Mnica Freiman de Sousa Ramos

mfreiman@pharma.ufrj.br Departamento de Medicamentos, Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro

constitudos de substncias terpnicas e eventualmente de fenilpropanides, acrescidos de molculas menores, como lcoois, steres, aldedos e cetonas de cadeia curta. O perfil terpnico apresenta normalmente substncias constitudas de molculas de dez e de quinze carbonos (monoterpenos e sesquiterpenos), mas, dependendo do mtodo de extrao e da composio da planta, terpenos menos volteis podem aparecer na composio do leo essenciUTILIZAO TERAPUTICA DOS LEOS ESSENCIAIS al (assim como podem se perder os elementos mais leves). O uso dos leos essenciais como agentes medicinais conhecido desde a remota De acordo com a famlia a antigidade. H registros pictricos de seis mil anos atrs, entre os egpcios, de prticas que pertencem, as diversas esreligiosas associadas cura de males, s unes da realeza, e busca de bem estar pcies de plantas acumulam fsico, atravs dos aromas obtidos de partes especficas de certos vegetais, como resinas, esses elementos volteis em rfolhas, flores, sementes, etc. As substncias aromticas tambm j eram populares nas gos anatmicos especficos. Do antigas China e ndia, centenas de anos antes da era crist, quando eram incorporaponto de vista de explorao da dos em incenso, poes e vrios tipos de acessrios, usados diretamente sobre o corpo. biodiversidade vegetal, quando No entanto, foi apenas a partir da Idade Mdia, atravs do processo de destilao, esse rgo representa um subsintroduzido pelos cientistas muulmanos, que se iniciou a real comercializao de trato renovvel (ex: resina, fomateriais aromticos (Tyrrel, 1990). lha, flor, fruto, semente), posA primeira obra contendo referncias para o uso mdico de ervas e leos de sementes svel extrair-se a essncia sem aromticas, o Kraterburch, foi publicada em 1551, pelo alemo Alan Lonicir. O eliminar a planta. Isso a torna uma fonte de leo essencial termo Aromaterapia foi cunhado pelo qumico francs M. Gatefoss, a partir da ecologicamente correta. No enexperincia em acelerar sua prpria convalescena das queimaduras sofridas aps um tanto, a grande parte dos leos grave acidente em seu laboratrio, atravs do uso da essncia de lavanda. essenciais mundialmente comerH cerca de duas dcadas, vem se consolidando nos meios cientficos o termo cializados so atualmente oriunAromacologia, que trata do estmulo, por intermdio do olfato, ao sistema lmbico dos de cultivos racionalizados cerebral e ao hipotlamo, respectivamente o responsvel pelo controle do comportae, sempre que possvel, estabilimento emocional e impulsos motivacionais do ser humano, e o controlador da maioria zados genetica e climaticamendas funes vegetativas e endcrinas do corpo (Corazza, 2000). te, o que garante a reprodutibiA Aromacologia lida com os efeitos resultantes de estmulos alcanados atravs das lidade do perfil qumico do provias olfativas at o crebro. No trata dos efeitos alcanados por intermdio da duto.

s leos essenciais constituem os elementos volteis contidos em vrios rgos das plantas e assim so denominados devido composio lipoflica que apresentam, quimicamente diferentes da composio glicerdica dos verdadeiros leos e gorduras. Esto associados a vrias

funes necessrias sobrevivncia do vegetal em seu ecossistema, exercendo papel fundamental na defesa contra microorganismos e predadores, e tambm na atrao de insetos e outros agentes fecundadores. Na prtica mdica popular, os leos essenciais possuem uma larga tradio de uso. Quimicamente, em sua maioria, so

introduo de agentes ativos na corrente sangnea, ou atravs da ingesto ou da absoro transdrmica, resultante da aplicao por massagem (Jelinek, 1994). Os experimentos com o sistema olfativo e inalaes so principalmente efetuados no Japo, Estados Unidos e Europa.. Fora a indstria de cosmticos, poucos trabalhos foram desenvolvidos sobre a aplicao tpica dos leos, e so concentrados em seus efeitos teraputicos, associados s prticas de massagens em pacientes hospitalizados. A maior parte da pesquisa realizada com leos essenciais ingeridos executada pelas indstrias de alimentos e bebidas, e no visam exatamente seus aspectos farmacolgicos (Buckle, 1993).
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A FAMLIA MYRTACEAE Dentre as famlias que concentram seus elementos volteis nas folhas destaca-se a famlia Myrtaceae, que contm uma centena de gneros e cerca de 3.500 espcies distribudas por

Tabela 1: Principais constituintes dos leos essenciais de folhas de rvore de jambolo (EJ), goiabeira (PG) e araazeiro (PW) Abundncia relativa2 IR3 Constituinte1 a-pineno Limoneno 1,8-cineol cis-b-ocimeno trans-b-ocimeno a-terpineol b-cariofileno a-humulene a-selineno d-Eudesmol cedr-8 (15)- en-9-a -ol b-eudesmol a-eudesmol 5-epi-neo-intermedeol
1

EJ 22 7.3 10 5.9 7.0 9.5 5.5 -

PG 1.6 0.21 12 15 10 7.6 5.6

PW 14 3.7 8.4 1.3 21 3.7 8.5 6.8 8.2 934 1024 1028 1036 1045 1188 1415 1446 1493 1625 1633 1644 1648 1653

Componentes que apresentaram rea acima de 5% em ao menos uma das espcies. 2 Calculada a partir das reas dos sinais nos cromatogramas (injees: 1ml de soluo de 6 mg de leo em 100ml de CH2Cl2). As anlises foram realizadas em um equipamento Hewlett Packard 6890, sob as seguintes condies: coluna capilar HP5 MS (30m x 0.32 mm x 0.25 mm espessura do filme); gs carreador He, fluxo 0,5 ml/min; Tinjetor 250 oC; Tinicial 70 oC; Tfinal 280 oC; taxa de aquecimento 3o/min, razo de split 1/20. 3 IR: ndice de Reteno (Adams, 1995).
alto poder germicida e chegaram a ser extensivamente aplicados nas prticas odontolgicas (Guenter, 1976). Muitas espcies dessa famlia so

todo o mundo, preferencialmente nas zonas tropicais e subtropicais da Amrica e Austrlia (Joly, 1979). Largamente espalhadas nas florestas brasileiras, muitas de suas espcies so cultivadas por conta de seus frutos comestveis, com Figura 1 finalidade ornamental, como fonte de madeira e lenha, ou precisamente como fonte de essncias de valor comercial. Quatro gneros so os mais importantes na famlia: Eucalyptus, Melaleuca, Eugenia e Psidium; fazendo parte dos dois ltimos a goiabeira (Psidium guajava), um dos tipos de araazeiro (Psidium widgrenianum) e a rvore de jambolo, jamelo ou azeitona (Eugenia jambolana , reclassificado como Syzygium cumini ). O leo essencial de muitas espcies do gnero Eucalyptus encontra inmeras aplicaes na indstria de materiais de limpeza, como desinfetantes sanitrios e outros. O gnero Melaleuca, de origem australiana, rene as espcies denominadas mundialmente de tea tree. Possuem

Mais recentemente foram comprovadas, em camundongos e cobaias, as atividades antiinflamatria, antipirtica e depressora do sistema nervoso central, pelo extrato alcolico das folhas de goiaba (Olajide et al., 1999), pelo seu leo essencial e de duas outras espcies de ara (Meckes et al., 1996; Santos et al., 1996a). O leo essencial das folhas de Psidium guyanensis e P. pohlianum (araazeiros que ocorrem no Nordeste do Brasil) apresentam aes anticonvulsivante e analgsica e antiinflamatria em animais (Santos et al. 1996b; Santos et al., 1998; Teixeira et al., 1994). Os decoctos de Eugenia jambos (jambo) e de Eugenia uniflora (pitanga) demonstraram atividade antiinflamatria e diminuio do trnsito intestinal, alm de aumentarem o tempo de sono induzido por pentobarbital (Olajide et al., 1999). Mais recentemente, testes farmacolgicos em animais com o extrato dessa planta demonstraram confirmar seu uso folclrico em determinadas regies como agente anti-hipertensivo (Consolini et al., 1999). O extrato de folha de Eugenia uniflora ainda recomendado popularmente contra a gota (Schmeda-Hirchmann et al., 1987) e possui efeito como antioxidante (Theodoluz et al., 1998). As folhas de Eugenia brasiliensis (grumixama) so reportadas como anti-reumticas (Corra, 1984). Apesar de um largo espectro de atividades biolgicas j ter sido descrito para os leos essenciais, (principalmente a atividade antimicrobiana), existem pouqussimos estudos sobre a atividade antiinflamatria desses compostos (Gil et al., 1989; Siani et al., 1999); e essa explorao farmacolgica foi o objeto do presente trabalho, utilizando-se, para isso, os leos essenciais de trs espcies da famlia Myrtaceae. A REAO INFLAMATRIA

A reao inflamatria um fenmeno estereotipado, cujos sinais cardinais foram primeiro descritos por Celsus (178 AC), A. L. F. Sampaio como sendo rubor, tumor, calor e dolor. A estes, Galen adiusadas na medicina popular. Por exemcionou a perda de funo (Rocha e plo, as folhas de Psidium guajava (goiSilva, 1978; Sedgwick & Willoughby, aba) so usadas como agente estimu- 1985). Hoje em dia, j est bem estabelante, antiinflamatrio, antibacteriano; lecido o fato de que estes sinais so e para tratar hemorragias, diabetes, diconsequncia da liberao de substnarria e infestaes de vermes intesticias qumicas no local da injria (por nais (Gupta, 1995). exemplo, histamina, bradicinina, PAF,
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Tabela 2: Composio terpnica geral dos leos essenciais de folhas de rvore de jambolo (EJ), goiabeira (PG) e araazeiro (PW) Composio Terpnica* Monoterpenos hidrocarbonetos Monoterpenos oxigenados Monoterpenos totais Sesquiterpenos hidrocarbonetos Sesquiterpenos oxigenados Sesquiterpenos totais % EJ 57 12 69 19 12 31 % PG 0.37 0.55 62 33 95 % PW 20 15 34 33 32 66

*Baseada nas reas relativas dos sinais dos cromatogramas

mo, especialmente por suas aes de fagocitose e destruio de agentes patognicos, como, por exemplo, bactrias que atingem o tecido. No entanto, nos casos em que o processo inflamatrio persistente, o acmulo de clulas pode ser lesivo ao tecido. o que ocorre na asma, com intenso acmulo de eosinfilos, e na artrite reumatide, com o acmulo de leuccitos mononucleares. Nos dois casos, a presena constante de clulas ativadas no foco inflamatrio PROPRIEDADES BIOLGICAS DOS LEOS ESSENCIAIS conduz liberao de enzimas lisossomais e de mediaSem dvida, os leos essenciais encontram sua maior aplicao biolgica como agentes dores endgenos, que cauantimicrobianos. Esta capacidade, presente na grande maioria destes compostos, de certa sam intenso dano tecidual, maneira representa uma extenso do prprio papel que exercem nas plantas, defendendoconduzindo cronificao da as de bactrias e fungos fitopatognicos. A maior parte dos trabalhos sobre atividades reao. biolgicas atribudas aos leos essenciais, que so descritos na literatura especializada, Diversos modelos experiversam sobre este aspecto (Janssen et al., 1987). mentais tm sido utilizados no Em experimentos in vitro, realizados na ndia, o leo essencial das folhas de jambolo estudo da reao inflamatria. foi efetivo em inibir o crescimento do vibrio da clera ( Vibrio cholerae) at a diluio de Dentre estes, destaca-se a pleu1:500, com moderado efeito quando 1:1000. Um efeito ainda maior foi conseguido com o risia (Spector, 1956), um moleo de Eugenia bracteata.. Ambos ainda exibiram uma eficcia contra Salmonella typhi delo clssico muito utilizado no estudo do processo infla(Rao et al., 1970). matrio agudo e no screening Recentemente, os leos essenciais de dezessete espcies de mirtceas foram testados de drogas, que permite a avacontra seis microorganismos, entre bactrias e fungos. Os melhores resultados revelaram as liao de diversos parmetros, boas inibies do crescimento de Staphilococcus aureus e S. epidermidis, sendo que a espcie como: extravasamento de proMarlierea eugeniopsoides foi a mais efetiva, estendendo o poder inibitrio a vrios outros tenas, migrao de leuccitos microorganismos (Limberger et al., 1998). Por outro lado, os leos essenciais de trs espcies e envolvimento de mediadode Psidium foram ativos contra Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa (Santos res qumicos; no s qualitatiet al., 1997b). O leo de Melaleuca alternifolia demonstrou um poder germicida superior ao vamente, mas tambm quantifenol, quando testado frente ao Bacilus typhosus (Guenter, 1976). tativamente (Mikami & MiyaAlguns leos essenciais foram ativos em testes in vitro contra o Plasmodium falciparum, saka, 1983). Este modelo, utio agente infectante da malria.. Este efeito atribudo provavelmente a um sinergismo entre lizado em ratos, foi adaptado as substncias terpenides neles presentes (Milhau et al., 1997). Tambm h registros da para camundongos e tem sido efetividade in vitro de leos essenciais sobre Entamoeba histolytica (De Blasi et al., 1990) e utilizado no estudo de reasobre a cercria do Schistosoma mansoni (Frischkorn et al., 1978). es inflamatrias induzidas Entre muitas outras atividades farmacolgicas especficas descritas para os leos por diversos agentes, como: essenciais, ainda so dignas de meno as atividades inibidoras do crescimento de clulas carragenina (Henriques et al., 1990), zimosan (parede do funneoplsicas (Siani et al., 1999; Saens et al. 1996) e de alguns tipos de vrus, incluindo herpes go Saccharomyces cereviseae), simplex tipo 1 (Siddiqui et al., 1996), influenza e HIV (Hayashi et al., 1995). endotoxina de Escherichia coli Seguindo um paradigma anlogo ao papel dos terpenides nas plantas, a (LPS), alergeno (Bozza et al., pesquisa dos leos essenciais como agentes repelentes de insetos vem revelando o potencial 1994; Siani et al., 1999), e Mycodestes compostos nesta rea (Don-Pedro, 1996). Recentemente, vm sendo realizados com bacterium bovis BCG (Menesucesso alguns testes biolgicos de repelncia aos insetos vetores de doenas como os zes-de-Lima Jr. et al., 1997), mosquitos do gnero Aedes, transmissores da dengue (Matsuda, 1996) e o transmissor da entre outros. Neste modelo,
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prostaglandinas e leucotrienos), originando os dois componentes bsicos da inflamao: as alteraes vasculares e o acmulo de clulas. As alteraes vasculares iniciam-se imediatamente e desenvolvem-se durante as primeiras horas aps o estmulo inflamatrio e; consistem em vasodilatao, aumento do fluxo sanguneo segui-

do por estase, aumento de permeabilidade vascular e exsudao de plasma. Estes eventos tm como principal funo facilitar o acesso ao stio inflamatrio pelos mediadores plasmticos e clulas sanguneas. A mobilizao adequada dos leuccitos circulantes para o local da injria fundamental para a defesa do organis-

doena de Chagas (Fournet, 1996).

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Figura 2

A. L. F. Sampaio

os leos so administrados por via oral (100 mg/Kg), na forma de lipossomas, num volume final de 500 L, 1 hora antes da injeo do estmulo (Figura 2). O nosso grupo de trabalho tem como uma das linhas de pesquisa, verificar,

na Lamk. (EJ), Psidium guajava L. (PG) e Psidium widgrenianum Berg (PW), atravs do modelo de pleurisia induzida por estmulos de origem fngica (zimosan), bacteriana (LPS ou BCG) e de origem alrgica.

A. L. F. Sampaio & M. C. Souza

Figura 3: Inibio do acmulo de neutrfilos e eosinfilos na inflama-

o induzida por LPS, aps o tratamento com o leo essencial PG

entre outras potencialidades, a atividade antiinflamatria apresentada pelos componentes volteis das plantas. Estes so normalmente provenientes de partes renovveis dos vegetais, como folhas, frutos, sementes e resinas, o que contribui para o aproveitamento medicinal sustentado das espcies. Neste mbito, este estudo relata a anlise qumica e a avaliao farmacolgica de leos essenciais das folhas de trs espcies de mirtceas: Eugenia jambola-

Os leos essenciais foram obtidos de folhas frescas por hidrodestilao, utilizando-se o aparato de Clevenger. A caracterizao qumica e a identificao dos componentes presentes nos leos essenciais foi realizada por cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas e clculos de ndice de Reteno (Adams, 1995). A composio dos leos das trs espcies pode ser observada na Tabela 1. As folhas do jambolo (EJ) apresen-

tam o maior contedo de monoterpenos totais (69%), seguidas pelas folhas do araazeiro (PW; 34%), enquanto as de goiabeira (PG) so constitudas quase totalmente por sesquiterpenos (Tabela2). Entre estes ltimos, destacam-se o bcariofileno, o a -humuleno (em EJ e PG) e o a-selineno (em PG). Das trs espcies, o PW apresenta um alto contedo (24%) de lcoois do tipo eudesmano, j descritos em espcies congneres e relatadas como responsveis pela atividade anticonvulsivante (Andrade-Neto et al., 1994; Santos et al., 1997a). Os monoterpenos mais abundantes no araazeiro so o a pineno e o 1,8-cineol. Em EJ este ltimo d lugar principalmente aos b-ocimeno e limoneno, aparecendo o a-terpineol como espcie monoterpnica oxigenada relevante. Na avaliao da atividade antiinflamatria no modelo de edema induzido na pata de ratos pela injeo carragenina, o uso dos leos essenciais diminuiu a formao do edema e, no caso especfico do leo de Psidium guyanensis, tambm observa-se uma atividade analgsica (Martin et al., 1993; Santos et al., 1996b). Entretanto, no modelo de pleurisia em camundongos induzido pela injeo de zimosan, o tratamento dos animais por via oral com os leos essenciais das trs espcies de mirtceas, no alterou a formao do edema pleural induzido pela injeo do zimosan. Isto aparentemente, se deve ausncia de efeitos dos leos sobre a migrao de neutrfilos (Figura 3), pois, neste modelo inflamatrio, a formao do edema depende do acmulo destes leuccitos. Estes dados sugerem que os leos essenciais parecem atuar como antiinflamatrios em alguns tipos de reaes inflamatrias agudas. As reaes inflamatrias induzidas por bactrias, micobactrias ou seus polissacardeos, caracterizam-se por um acmulo mais tardio de leuccitos mononucleares (moncitos e linfcitos), neutrfilos e eosinfilos (Bozza et al., 1994; Penido et al., 1997; Menezes-de-Lima Jr. et al., 1997). Uma das caractersticas mais marcantes de doenas de origem alrgica, parasitria, e nas inflamaes pulmonares de

Figura 4
A. L. F. Sampaio Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 41

Cortes transversais das folhas das espcies (a) Eugenia jambolana (base da nervura mediana, aumento 200x), (b) Psidium widgrenianum (mesfilo, aumento 100x), (c) Psidium gajava (base da nervura mediana, aumento 100x); destacando-se a presena das bolsas secretoras de origem esquizognica, onde se acumula o leo essencial. - Fotos obtidas em microscpio tico acoplado a sistema de microfotografia, corantes verde-iodo e vermelho do Congo. Cortes histolgicos e fotos por Jos Lus Pinto Ferreira, LQPN, Far-Manguinhos, FIOCRUZ
origem bacteriana, a presena de eosinfilos no foco inflamatrio. O acmulo deste leuccito tem sido considerado como uma das principais causas de dano ao tecido pulmonar, que uma caracterstica marcante destas patogenias. Na reao inflamatria induzida pelo LPS, tanto o acmulo de leuccitos mononucleares quanto o de eosinfilos so inibidos pelo tratamento com o leo EJ, enquanto o leo PW inibe o acmulo de clulas mononucleares, neutrfilos e eosinfilos, sugerindo uma atividade destes leos sobre o acmulo de leuccitos em reaes pouco mais tardias (Figuras 3 e 4). A reao inflamatria induzida pela injeo intratorcica do Mycobacterium bovis (BCG) apresenta um perfil bifsico quanto ao fluxo de leuccitos para a cavidade pleural de camundongos. A primeira fase tem incio em 4 horas, quando se observa uma migrao seletiva dos neutrfilos. Aps 24 horas, o acmulo celular mais intenso, observando-se o influxo de clulas mononucleares, neutrfilos e eosinfilos, que mantido at 48 horas, sendo que o acmulo de eosinfilos depende de outros mediadores inflamatrios envolvidos no processo. A segunda fase observada aps 15 dias e caracteriza-se pelo acmulo predominante de leuccitos mononucleares e de neutrfilos (Menezes-deLima Jr. et al., 1997). O tratamento dos animais com o leo essencial PW inibe de forma significativa a migrao de eosinfilos induzida pela injeo intratorcica do BCG em 24h, sem, no entanto, interferir com a migrao de neutrfilos. Por outro lado, o tratamento com EJ potencializa a reao inflamatria induzida pelo BCG, induzindo um aumento do acmulo de leuccitos mononucleares e eosinfilos. Apesar deste efeito pr-inflamatrio de EJ no
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modelo de pleurisia induzida por BCG, este leo suprime completamente a produo de citocinas e de xido ntrico in vitro. A inibio destes mediadores, que desempenham um papel importante na defesa do organismo contra infeco por micobactrias, poderia acarretar um aumento do acmulo de leuccitos para tentar conter a infeco. J na reao inflamatria alrgica, que caracterizada por um intenso acmulo de eosinfilos, EJ e PW no foram eficazes, apesar do efeito inibitrio do ltimo sobre o acmulo deste tipo celular induzido por LPS ou BCG. Portanto, entre os leos essenciais avaliados, EJ e PW apresentaram a atividade antiinflamatria mais eficiente, principalmente em reaes inflamatrias de origem bacteriana. A relao entre a capacidade antiinflamatria e a presena de alguns dos principais componentes dos leos, o apineno e o b-cariofileno, foi ento investigada atravs da avaliao da atividade destes terpenos frente pleurisia induzida por LPS. O tratamento com o monoterpeno a -pineno no foi capaz de inibir a migrao de eosinfilos, enquanto que o sequisterpeno b-cariofileno inibiu de forma significativa a migrao de eosinfilos induzida por LPS. H descries do efeito inibitrio, por estes terpenos, do edema de pata induzido pela carragenina em ratos (Ocete et al., 1989; Martin et al., 1993). Como concluso geral, os leos essenciais apresentaram atividade inibitria sobre a formao de edema, apesar de no serem eficazes na reao inflamatria aguda com envolvimento de componentes celulares, ou na reao de origem alrgica. Os leos de E. jambolana e de P. widgrenianum so eficazes no controle da reao tardia de origem bacteriana, sugerindo que alguns leos

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