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Hemograma
Avalia os elementos celulares do sangue
Quantitativamente
Qualitativamente
Fatores Pr-analticos
Local da puno
Padronizao
Fatores Pr-analticos
Anticoagulantes
Em geral, interferem no mecanismo de coagulao in
vitro, inibindo a formao da protrombina ou da
trombina.
Fatores Pr-analticos
EDTA K2
EDTA
EDTA
Mantm as caractersticas histo-morfolgicas
das clulas
No altera o percentual de Ht
No altera concentrao de Hb
Possibilita a contagem das clulas em at 24
horas aps coleta, se refrigerada de 2C a 8C
Anticoagulante de escolha para contagem de
plaquetas
Fatores pr-analticos
Garroteamento: aproximadamente 1 minuto
Hemoconcentrao
Variaes do hematcrito (2 a 4%)
Pseudoneutrofilia
Homogenizao da amostra
Condies do paciente: jejum, estresse
Posio do paciente
Fatores pr-analticos
Armazenamento
Glbulos brancos
At 3 hrs: alteraes mnimas
12 a 18 hrs: alteraes aparentes
Fatores pr-analticos
Armazenamento
Glbulos vermelhos
At 6 hrs: alteraes mnimas
Aps 8 hrs: hemcias crenadas e esfercitos
Fatores fisiolgicos
Gestao
Altitude
Exerccios
Fumantes
Hemograma
Eritrograma
Leucograma
Extenso sangunea
Plaquetograma
Eritrograma
a parte do hemograma que avalia a massa
eritride circulante
Ht
Hb
GV
ndices hematimtricos
Hematcrito
: 40 a 50
:35 a 45
Crianas at um ano: 34 a 40 %
Recm-nascidos : 50 a 60 %
Microhematcrito
Realizado em tubo capilar.
Utilizao de microcentrfuga onde o tubo
colocado 10.000rpm por 5 minutos
Nesta tcnica todo material ser descartado
aps uso.
Microcentrfuga
Microhematcrito
Dosagem de hemoglobina
Principal componente eritrocitrio.
Dosagem realizada por mtodos colorimtricos
(hemoglobinometria) aps converso da
hemoglobina em cianometamoglobina expressa em
g/dl.
Dosagem de hemoglobina
Drabkin-> ferricianeto de potssio converte o ferro
ferroso da hemoglobina ferro frrico formando
metahemoglobina.
A metahemoglobina combina com o cianeto de
potssio para formar um composto estvel ->
cianometahemoglobina.
Dosagem de hemoglobina
Realizao do exame:
0,02 mL de sangue
5 mL de Drabkin
Colocar a amostra de sangue em tubo de ensaio e aguardar 10
minutos
Analisar a DO em espectrofotometria em comprimento de onda
de 540nm
Avaliar a DO do padro para clculo do fator
Portanto: F = [ P ] / [ DO ]
P= 5,10 ou 15 mg/dL
Para clculo da amostra: [ Hb amostra] = do amostra x F
Dosagem de hemoglobina
Tubo A
Amostra
Padro
0,02 mL
ou
20 L
_______
5,0 mL
Reagente Drabkin
Tubo B
______
0,202 mL
ou
20 L
5,0 mL
Dosagem de hemoglobina
Valores de referncia:
Valores normais:
- 14 a 18
: 12 a 16 g/dL
Crianas de at um ano: 11 a 12 g/dl
Dosagem de hemoglobina
A dosagem de Hb est diretamente relacionada
com o contedo e colorao do eritrcito, de
grande valia no diagnstico das anemias.
Causas de erro:
pipetagem
lipemia
alta contagem de leuccitos
sujeira na parede de leitura
presena de carboxihemoglobinas (fumantes)
Leuc..
GV
Leuc.
Leuc.
He
He
He
He
He
= 0,02 mm3
Cmara de Neubauer
Ou
N. Cls x 10.000
Glbulos vermelhos
Valores de referncia:
Interpretao
Valores aumentados em policitemias
Valores diminudos processos anmicos de
diversas etiologias
Contagem em cmara de Neubauer oferece
grande variabilidade de erro e dispndio de
tempo automao
ndices hematimtricos
Rouleaux
Conservao prolongada in vitro VCM
Excesso EDTA- desidrata a clula-VCM
Valores normais: 82 a 92 fL
ndices hematimtricos
Atravs do VCM classifica-se as anemias
como:
Macrocticas
Microcticas
Normocticas
Alterao no VCM
Microcitose
Hemcias abaixo de 80 fL (adulto).
Est associada deficincia de ferro e talassemias.
Macrocitose
Hemcias acima de 100 fL (adulto).
Est associada deficincia de vitamina B12, quimioterapia,
doena heptica, hipotireoidismo e mieloma
ndices hematimtricos
HCM hemoglobina corpuscular mdia
HCM= Hb x 10/GV (pg)
Valores normais 27 a 32 pg
RDW
RDW (Red blood cell Distribution Width)
expresso numrica da anisocitose
Variao do volume das hemcias contadores
automatizados
Valores normais: 11-14,5
Anisocitose - Variao no tamanho das hemcias
Histograma
a curva de frequncia da distribuio e tamanho dos
eritrcitos, com o volume na abscissa e a frequncia na
ordenada
Quando a curva situa-se esquerda, denota-se
microcitose e direita, macrocitose
Histograma
normal
Histograma
Anemia microctica
Histograma
Anemia macroctica
Leucograma
Contagem de glbulos brancos (WBC)
Contagem diferencial
Extenso sangunea
GB
rea = 1 mm2
Altura = 0,1 mm2
Volume = 0,3 mm3
Leuccitos / mm3 sangue = N. de cls x 20
-----------------Volume
GB
GB
Ou
N. Clulas x 50
Valores de referncia:
e - 5,0 a 10.000/mm3
Crianas at 7 anos 5,0 a 15.000/mm3
Recm nascidos 10,0 a 25.000/mm3
Extenso sangunea
Qual a necessidade da extenso sangunea?
Verificao da morfologia celular
Verificao dos tipos celulares
Contagem e diferenciao de glbulos brancos,
plaquetas e reticulcitos.
Colorao de glbulos vermelhos
Presena de Incluses
Maturidade celular
Extenso sangunea
Preparar duas lminas limpas
Em uma das lminas, colocar uma gota de sangue total
Com a outra lmina, realizar deslizamento para obteno de
esfregao delgado
Extenso sangunea
Fixao e colorao da lmina depois de seca:
Derivados de Romanowsky:
Giemsa (azul-eosina)
Leishman e Wright
Pantico (soluo 1 , 2 e 3)
Extenso sangunea
Devido ao tamanho variado dos diferentes
glbulos brancos, sua distribuio no
esfregao nem sempre ser uniforme, assim:
Nas bordas e na cauda h maior quantidade de
Ne, Eo, Mo, Ba
Linfcitos restritos regio central do esfregao
Leitura feita do corpo para cauda em zig-zag.
Extenso sangunea
Contagem diferencial de Leuccitos:
Contagem de 100 clulas
Relativo %
Absoluto
Bastonete
0 a 5%
0-350
Neutrfilos
40 a 75%
2800-5250
Linfcitos
20 a 40%
1400-2800
Eosinfilo
1a4%
70-280
Basfilo
0 a 1%
0-70
Moncito
2 a 8%
140-560
Extenso sangunea
Como calcular o valor absoluto?
Fcil!!!! Muito fcil!!!!
50 neutrfilos ---- 100 clulas
X neutrfilos ------ 8.000 GB (ex de gb totais)
Distribuio Homognea
.
Normocromia
.
VHS
Valores aumentados:
Crianas
Perodo menstrual
A partir do 4 ms de gestao
Temperaturas elevadas
Anemias
Neoplasias
Aumento do fibrinognio plasmtico
Processos infecciosos e agudos
VHS
Diminuio :
Policitemia vera
Caqueixa
Insuficincia cardio congestiva
< fibrinognio plasmtico
Anticoagulantes em excesso
VR:
140.000 400.000 mm3
Contagem de plaquetas
PLQ
Contagem de plaquetas
Causas de erro:
Agregao plaquetria EDTA, atraso na coleta,
conservao in vitro
Satelitismo plaquetario- mediado por um fator
plasmtico (IgG ou IgM). As plaquetas aderem in
vitro aos neutrfilos, envolvendo-os como uma
coroa)
Alteraes Quantitativas
Trombocitose o aumento na contagem de
plaquetas
Trombocitopenia - a diminuio na
contagem de plaquetas
Plaquetas normais
.
Macroplaquetas
.
Reticulcitos
Hemcia jovem aps a perda do ncleo
Reticulcitos
Colorao :
Azul de metileno ou azul de cresil brilhante.
Valores normais :
0,5 - 2,0%
25.000 - 50.000/l
Reticulcitos
Procedimento:
Pipetar em tubo de ensaio 100 L de sangue
total para 50 L de azul cresil brilhante
Incubar a 37oC por 15 a 30 minutos
Realizar extenso sangunea
Contar 10 campos com 2.000 hemcias ou 5
campos com 1.000 hemcias
Contagem de reticulcitos
1000 hemcias ------ 10 reticulcitos (ex)
4.500.oooo hemcias ------- X reticulcitos
X = 45.000
4.500.000 100%
45.000 - X %
X=1%
Correo de reticulcitos
ndice de reticulcitos
Maturao de reticulcitos:
Em pacientes com hematcritos entre 30 e 40%: 1,5 dia
Em pacientes com hematcritos entre 20 e 30% : 2 dias
Em pacientes com hematcrito menor que 20% : 2,5 dias
IR
Valores:
Quando o IR for menor que 2: resposta reduzida a
solicitao pelo quadro anmico.
Quando o IR = 2: resposta considerada adequada.
Quando o IR for maior que 2: sugestivo de grande
perda de hemcias com aumento na hematopoese.
Utilizao dos ndices hematimtricos para verificao
de anemia hipo ou normocrmica, macroctica ou
microctica
Reticulcitos
Paciente do sexo masculino foi ao laboratrio para
realizao de um hemograma. Entre os resultados, foi
verificado um aumento no ndice de reticulcitos.
Rt = 10%
Ht= 20
Reticulcitos
Paciente do sexo masculino foi ao laboratrio para
realizao de um hemograma.
Rt = 2%
Ht= 30
VCM = 76 fL
Rtcorrigido= 2 x 30 = 60 = 1,27
47
47
IR = 1,27 = 0,85 possvel diagnstico de anemia
1.5
carencial
Hemograma automatizado
Tcnica mais utilizada em todos os laboratrios clnicos do
mundo.
Mais rpida, reprodutvel e confivel do que a tcnica manual.
Amostra de sangue aspirada pelo equipamento.
Aps tratamento com solues especficas, ela passa por
eletrodos que medem o tamanho da clula e sua complexidade.
Desta maneira possvel distinguir entre os diversos tipos
celulares do sangue.
Sysmex- XE-2100
Sysmex- XE -2100
Anlise individual em tubo fechado
Princpios de medio:
Impedncia eltrica (corrente direta): RBC, PLT, HCT
(medido) e diferencial de clulas imaturas
Citometria de fluxo fluorescente: WBC, contagem de
reticulcitos, eritroblastos, plaquetas imaturas e
contagem optica de plaqueta
Radiofrequencia: diferencial de cls imaturas
Fotometria: HGB. Reao livre de cianeto
Sysmex- XE -2100
Parmetros analisados:
34 parmetros:
WBC, RBC, HGB, HCT, MCV, MCH, MCHC, RDW-SD,
RDW-CV, PLT, MPV, NEUT%, NEUT#, LYMPH%,
LYMPH#, MONO%, MONO#, EOS%, EOS#, BASO%,
BASO#, IG%, IG#, RET%, RET#, LFR%, MFR%,
HFR%, IRF, RETHe, PLT-O, IPF%, NRBC%, NRBC#
Sysmex- XE -2100
WBC: leuccitos
RBC: eritrcitos
HGB: hemoglobina
HCT : hematcrito
MCV: VCM
MCH: HCM
MCHC: CHCM RDW-SD
RDW-CV
PLT: plaquetas MPV: volume mdio plaquetro
NEUT : neutrfilos
LYMPH: linfocitos MONO:moncitos
EOS: eosinfilos
BASO: basfilos
IG : granulcitos
imaturos
RET:reticulticos
LFR , MFR e HFR: anlise da maturao de reticulcitos pela intensidade de
fluorescncia em baixa, alta e mdia fluorescncia
IRF: porcentagem de reticulcitos imaturos
RETHe: contedo de hemoglobina dos reticulcitos
PLT-O: contagem optica de plaquetas
IPF: plaquetas imaturas
NRBC: eritroblastos
Sysmex- XE-2100
Presena de canais diferenciados para anlise
celular:
Canal de hemoglobina
Canal de eritrcitos/plaquetas, que mede e conta
por impedncia em um fluxo com foco
hidrodinmico
Canal de diferencial para neutrfilos, eosinfilos,
linfcitos e moncitos aps interao com corante
fluorescente
Sysmex- XE-2100
Canal de leuccitos/basfilos, que lisa todas as
clulas menos os basfilos, sendo diferenciados
por disperso de luz frontal e lateral
Canal de eritroblastos, sendo identificados por
intensidade de fluorescncia e disperso frontal
da luz
Canal de granulcitos imaturos distintos por
impedncia e corrente de radiofrequncia.
Sysmex- XE-2100
Capacidade de processamento
Mdulo manual: 60 amostras por hora
Mdulo automtico - 150 amostras por hora
Impedncia eltrica
As diferentes clulas sanguneas so contadas
e medidas a partir dos impulsos eltricos que
geram quando imersas em um meio condutor
(soluo eletroltica).
As clulas tambm so orientadas em um
fluxo laminar e interceptadas uma a uma por
uma corrente eltrica.
Analisa RBC, PLT e HCT
Impedncia
Citometria de fluxo
uma tcnica de medio das propriedades de clulas em
suspenso, orientadas em um fluxo laminar e interceptadas
uma a uma por um feixe de luz (LASER).
COMPONENTES:
Cmara de fluxo
Conjunto ptico luminoso (LASER);
Amplificador e processador dos sinais luminosos (SENSORES);
Sistema computacional integrado para processar as informaes
oriundas dos sensores.
O feixe de laser incidir sobre cada clula (de forma individual)
A radiao incidente sofrer desvios que sero reconhecidos
pelos fotosensores