Bases Macromoleculares da Constituio Celular

A estrutura e o funcionamento das clulas dependem de macromolculas formadas pela polimerizao de monmeros. A molcula da gua um dipolo com caractersticas especiais que a tornam indispensvel vida. As protenas so polmeros de 20 aminocidos diferentes. A estrutura das molculas das protenas apresenta 4 nveis de organizao: primrio, secundrio, tercirio e quaternrio. O metabolismo celular deve-se atividade das enzimas. Pela ao do frio, pode-se baixar ou parar, temporariamente, a ao das enzimas. Agrupadas em seqncia, muitas vezes presas a membranas, as enzimas atuam de modo mais eficiente. Isoenzimas so molculas ligeiramente diferentes que atuam sobre o mesmo substrato, porm com velocidades diferentes. Os cidos nuclicos (DNA e RNA) so polmeros de nucleotdeos. H trs tipos de RNA, com funes diferentes: RNA de transferncia, RNA mensageiro e RNA ribossomal. O RNA pode ter ao enzimtica. A hibridizao molecular permite caracterizar bem as molculas de RNA e de DNA. Os lipdios so componentes importantes das membranas celulares e formam reservas nutritivas. Os polissacardeos constituem reserva energtica sob a forma de glicognio e amido, e desempenham papel estrutural como parte das molculas de glicoprotenas e proteoglicanas. As molculas que constituem as clulas so formadas pelos mesmos tomos encontrados nos seres inanimados. Todavia, na origem e evoluo das clulas, alguns tipos de tomos foram selecionados para a constituio das biomolculas. Noventa e nove por cento da massa das clulas so formados de hidrognio, carbono, oxignio e nitrognio, enquanto, nos seres inanimados da crosta terrestre, os quatro elementos mais abundantes so oxignio, silcio, alumnio e sdio. Excluindo-se a gua, existe nas clulas predominncia absoluta dos

compostos de carbono, extremamente raros na crosta da Terra. Portanto, a primeira clula e as que dela evoluram selecionaram os compostos de carbono (compostos orgnicos), cujas propriedades qumicas so mais adequadas vida. As clulas so constitudas de macromolculas polimricas caracterstica da matria viva a presena de molculas de alto peso, ou macromolculas, que so polmeros constitudos pela repetio de unidades menores, chamadas monmeros. Os polmeros formados por monmeros semelhantes so chamados de homopolmeros. o caso do glicognio, que constitudo exclusivamente por molculas de glicose. Os heteropolmeros so constitudos por monmeros diferentes. Os cidos nuclicos, por exemplo, so heteropolmeros. As macromolculas existem nas clulas com grande diversidade no s quanto ao seu tamanho, mas, principalmente, quanto variedade dos seus monmeros constituintes. Os polmeros encontrados nos seres vivos (biopolmeros) sero aqui estudados quanto sua constituio e quanto importncia biolgica dos processos de interao dessas macromolculas. Os biopolmeros de maior importncia so as protenas, constitudas por aminocidos; os polissacardeos, que so polmeros de monossacardeos; e os cidos nuclicos (DNA e RNA), formados por nucleotdeos. Alm dos polmeros, molculas menores como lipdios, gua, sais minerais e vitaminas tm relevante papel na constituio e funcionamento das clulas. A diversidade estrutural e funcional de um polmero depende da variedade de seus monmeros. Na constituio das protenas participam 20 aminocidos diferentes, enquanto os cidos nuclicos so formados por apenas cinco tipos de nucleotdeos (monmeros). Por isso, as protenas tm maior polimorfismo e, conseqentemente, maior diversidade funcional do que os cidos nuclicos. Freqentemente, macromolculas de diferentes tipos se associam para formar complexos como as lipoprotenas, glicoprotenas e proteoglicanas (protenas combinadas com polissacardeos) e as nucleoprotenas (cidos nuclicos mais protenas). A molcula da gua assimtrica Conforme foi visto no Cap. 1, as primeiras clulas surgiram na massa lquida que cobria a maior parte da superfcie terrestre h bilhes de anos. Provavelmente ao acaso e a partir de molculas orgnicas originadas antes da existncia de qualquer ser vivo (origem pr-bitica), formaram-se micelas que evoluram pelo aparecimento de uma membrana, originando-se assim as primeiras clulas. De tal modo a origem das clulas est associada gua que esta a molcula mais abundante em todas as clulas, sem qualquer exceo. As molculas de

protenas, lipdios e polissacardeos variam de uma clula para outra, mas todas as clulas contm gua. Esse composto no uma molcula inerte, com a nica funo de preencher espaos; ao contrrio, a gua e seus ons influem poderosamente na configurao e propriedades biolgicas das macromolculas. A molcula de gua morfolgica e eletricamente assimtrica. Os dois tomos de hidrognio formam com o de oxignio um ngulo que, em mdia, estimado em 104,9. Portanto, apesar de ser representada pela frmula H-O-H, a molcula de gua no um basto reto. Por outro lado, devido forte atrao exercida pelo ncleo do oxignio sobre os eltrons, essa molcula relativamente positiva, no lado dos dois hidrognios, e negativa no lado do oxignio, isto , a molcula de gua um dipolo. No espao, devido forma das rbitas do hidrognio e oxignio, as cargas eltricas esto distribudas de tal forma que o oxignio ocupa o centro e os hidrognios (relativamente positivos) ocupam os dois extremos de um tetraedro, conforme mostra. esquerda, esquema do dipolo da direita, a forma tridimensional de sua molcula. Por sua natureza dipolar, a gua um dos melhores solventes conhecidos. Ela dissolve muitas substncias cristalinas e outros compostos inicos porque sua tendncia a se combinar com ons negativos ou positivos , freqentemente, maior que a tendncia de os ons se combinarem entre si. Por exemplo, os cristais de NaCl dissolvem-se com facilidade em gua porque, apesar da atrao eletrosttica'entre o Cl" e o Na+ do cristal, cada um desses ons atrado ainda mais fortemente pelo dipolo da gua. Assim, o cristal se rompe, formando-se os ons hidratados de CP e Na+, altamente estveis. O grau de afinidade pela gua tem relevante papel nas propriedades biolgicas das macromolculas Os polmeros celulares contm em sua estrutura grupamentos qumicos que apresentam afinidade pela gua (grupamentos polares) ou que no apresentam afinidade pela gua (grupamentos apolares), repelindo-a. Os grupamentos polares principais so carboxila, hidroxila, aldedo, sulfato e fosfato. Molculas com alto teor de grupamentos polares so francamente solveis na gua e so chamadas de hidroflicas (hidro, gua, e filos, amigo). A maioria dos hidratos de carbono, os cidos nuclicos e muitas protenas so hidroflicas. Em contraposio existem molculas sem ou com poucos grupamentos polares e que, conseqentemente, so insolveis na gua. So as molculas hidrofbicas (hidro, gua, efobos, averso). Como exemplo, podem ser citados os lipdios, a parafina e os leos. Essas molculas so repelidas pela gua.

Existem tambm macromolculas, geralmente alongadas, que apresentam uma regio hidroflica e outra hidrofbica. So as molculas chamadas antipticas, dotadas da.capacidade de associar-se simultaneamente a gua e a compostos hidrfilos por uma de suas extremidades, e a compostos hidrofbicos pela outra extremidade. As molculas antipticas exercem importantes funes biolgicas, e esto presentes em todas as membranas celulares. A anlise das foras responsveis pela coeso dos monmeros nos biopolmeros demonstrou que existem dois tipos gerais de foras que podem ser agrupadas de acordo com a sua intensidade. Essa intensidade, por sua vez, pode ser avaliada pela energia necessria para se realizarem ou se desfazerem essas unies (Tabela 3.1). De um lado esto as ligaes fortes, chamadas covalentes. (Tabela 31 Energia despendida para romper algumas ligaes moleculares de interesse biolgico) So resultantes da superposio das rbitas externas das molculas e so unies fortes e estveis que consomem altas quantidades de energia para sua realizao. o tipo de unio que se observa nas ligaes peptdicas entre os aminocidos e que s podem ser desfeitas por procedimentos drsticos como a hidrlise em cido forte a alta temperatura. Essas ligaes necessitam ao redor de 100 kcal por mol para se formarem. Do outro lado, esto as ligaes fracas, de natureza variada, que se formam com pequeno gasto energtico e podem ser desfeitas por procedimentos suaves como aquecimento moderado e alterao da concentrao inica do meio. As principais ligaes fracas so: as pontes de hidrognio, as ligaes eletrostticas e as interaes hidrofbicas. As pontes de hidrognio ocorrem devido ao uso em comum de um tomo de hidrognio por radicais diferentes. No caso das protenas, isso tem lugar entre o nitrognio e a carbonila de ligaes peptdicas diferentes (Fig. 3.6). As pontes de hidrognio so tambm importantes na ligao entre as duas cadeias do DNA, ligao essa que ocorre devido a pontes que se estabelecem entre duas bases (Fig. 3.19). As ligaes eletrostticas so ligaes que se formam quando um grupo cido se prende a um bsico. So exemplos a ligao entre aminocidos bsicos e cidos, entre corantes cidos (geralmente com grupos sul-fnicos: SO3) e protenas bsicas dos tecidos ou, ento, entre as glicosaminoglicanas (que contm grupamentos sulfato: SO4-) e protenas bsicas. As interaes hidrofbicas ocorrem entre molculas apolares que so comprimidas umas contra as outras devido repulso que sofrem da gua que as envolve. No , portanto, propriamente uma ligao, como ocorre nas pontes de hidrognio ou ligao eletrosttica, sendo mais adequadamente definida como uma interao. O exemplo mais importante de interao hidrofbica em biologia tem lugar nas membranas da

clula (Cap. 5), onde as duas camadas de lipdios associam-se principalmente devido a esse tipo de interao. A importncia biolgica dessas interaes e ligaes de baixa energia reside no fato de que elas permitem clula alterar, montar e desmontar estruturas supramoleculares, como, por exemplo, os microtbulos e micro filamentos, aumentando assim enorme-mente a sua versatilidade e eficincia funcional, sem grande gasto energtico. Se as interaes das macromolculas fossem realizadas apenas com ligaes fortes, a estrutura celular seria estvel, e as modificaes dessa estrutura implicariam um gasto de energia to alto que a atividade celular seria impossvel. Protenas so polmeros de aminocidos As protenas so macromolculas contendo um nmero varivel de L-aminocidos, unidos por ligaes peptdicas. So, portanto, polmeros de aminocidos. As cadeias assim constitudas chamam-se cadeias polipeptdicas e, ao atingirem certa dimenso, recebem o nome de protena. comum considerar protenas os polipeptdeos com peso molecular a partir de 6.000 dltons. Frmula geral dos alfa-aminocidos. Formao da ligao peptdica, indicada em sombreado, pela unio de dois aminocidos e formao de uma molcula de gua. Embora existam mais de 150 aminocidos, s 20 so encontrados nas protenas. Esses 20 aminocidos celulares so todos de estrutura L, o que refora a hiptese, apresentada no Cap. 1, segundo a qual todas as clulas hoje existentes derivam de uma clula ancestral nica. A clula ancestral teria aproveitado os L aminocidos, sendo a capacidade de utiliz-los transmitida a todas as clulas descendentes. Os aminocidos encontrados nas protenas possuem em comum a presena de um grupo NH2 (amino) e um grupo COOH. Molculas dos 20 aminocidos encontrados nas protenas. As cadeias laterais, responsveis por certas propriedades qumicas dos aminocidos, esto indicadas pelo sombreado. (carboxila) ligados ao carbono alfa da molcula. Fazem exceo a prolina e a hidroxiprolina, que contm o grupo NH (imino) em substituio ao grupo NH2. Na realidade, a prolina e a hidroxiprolina so iminocidos, mas se incluem entre os aminocidos por apresentarem propriedades semelhantes a estes.

As protenas podem ser classificadas em duas categorias. As protenas simples, cujas molculas so formadas exclusivamente por aminocidos, e as protenas conjugadas, que se caracterizam pela presena, em suas molculas, de uma parte no-protica denominada grupo prosttico. Entre as protenas conjugadas podem ser mencionados os seguintes exemplos: nucleoprotenas, com grupo prosttico constitudo por cidos nuclicos; glicoprotenas, que contm polissacardeos; lipoprotenas, que contm lipdios; fosfoprotenas, cujo grupo prosttico contm fsforo; hemeprotenas (catalases, peroxidases e citocromos) contendo o grupo heme, que uma ferroporfirina; flavoprotenas contendo riboflavina no grupo prosttico; e, finalmente, metaloprotenas, nas quais o grupo prosttico ou um metal (insulina e anidrase carbnica, que contm zinco), ou um composto inorgnico contendo metal, como, por exemplo, a ferritina, cujo grupo prosttico o Fe(OH)3. Os grupamentos NH2e COOH so ionizveis, o que confere carga eltrica s protenas e condiciona a sua migrao em um campo eltrico. Conforme haja predominncia de grupos NH2 ou COOH, as protenas so bsicas ou cidas, respectivamente. Por exemplo, as histonas, ricas em lisina e arginina (aminocidos com dois grupos NH2 por molcula), so eletricamente positivas em pH 7, portanto, bsicas e, por isso, combinam-se com os grupos fosfato do cido desoxirribonuclico (DNA) para formar nucleoprotenas. Em cima, esquerda, aparece uma molcula protica globosa, em sua configurao nativa. No centro, a mesma molcula, porm desnaturada. Como a desnaturao freqentemente reversvel, a molcula pode voltar sua forma inicial, como mostra a figura embaixo, direita. As pequenas faixas negras representam os radicais que se unem para estabelecer a configurao nativa da protena. A seqncia de aminocidos influi na forma tridimensional e no papel biolgico das molculas proticas A forma tridimensional da molcula de uma protena est relacionada com a seqncia de aminocidos e com o nmero de cadeias polipeptdicas que constituem sua molcula. H protenas cuja molcula tem apenas uma cadeia polipeptdica, enquanto outras possuem mltiplas cadeias, em geral umas diferentes das outras. Por exemplo, a hemoglobina constituda por duas cadeias alfa (iguais entre si) e duas cadeias beta (tambm iguais entre si). Do ponto de vista biolgico, o conhecimento da forma tridimensional das molculas proticas em estado nativo (configurao nativa) muito importante, pois assim que, dentro da clula, as molculas mostram atividade e interagem umas com as outras. Chama-se configurao nativa a forma tridimensional que uma molcula apresenta nas condies de pH e

temperatura existentes nos organismos vivos (Fig. 3.5). A estrutura das molculas proticas mantida pelas seguintes foras de estabilizao: - ligao peptdica, j explicada, que resultante de ligao covalente; - interao hidrofbica; - pontes de hidrognio; - ligaes dissulfeto ou S-S, que so ligaes covalentes entre molculas do aminocido cistena. O nmero e a seqncia dos resduos aminocidos em uma cadeia polipeptdica determinam a estrutura primria da protena. A estrutura primria mantida por ligaes peptdicas, mas, se estas fossem as nicas ligaes existentes, as molculas das protenas seriam dobradas ao acaso, irregularmente. Entretanto, o estudo das propriedades das molculas proticas em estado nativo revela que elas so constitudas por cadeias polipeptdicas dobradas de forma bastante regular e constante para cada tipo de protena. As cadeias se dobram e se enrolam de modo complexo, para constiturem um arranjo espacial definido e tpico da protena conhecido como sua estrutura secundria. Uma estrutura secundria muito freqente entre as protenas globulares que formam a maioria das protenas da clula a alfa-hlice (Fig. 3.6). Essa configurao se deve formao de pontes de hidrognio entre aminocidos de uma mesma cadeia, a qual adquire a forma de saca-rolha ou hlice. A cadeia contendo a estrutura secundria dobra-se novamente sobre si mesma, formando estruturas globosas ou alongadas, adquirindo assim uma estrutura terciria. Muitas protenas tm molculas constitudas por vrias cadeias peptdicas, que podem ser iguais ou diferentes. Essas cadeias chamam-se subunidades ou monmeros. O modo especfico de as subunidades se juntarem para formar a molcula protica tem o nome de estrutura quaternria da protena. Essa estrutura mantida graas cooperao de numerosas ligaes qumicas fracas, como as pontes de hidrognio. Atravs da organizao protica quaternria, formam-se diversas estruturas de grande importncia biolgica, como os microtbulos, microfilamentos, capsmeros dos vrus e os complexos enzimticos que sero descritos adiante, neste mesmo captulo. Tambm as fibrilas colgenas encontradas no espao extracelular do tecido conjuntivo so constitudas pela agregao de cadeias polipeptdicas de tropocolgeno.

Diz-se que uma protena globular quando a sua molcula tem uma relao comprimento-largura menor do que 10:1. A grande maioria das protenas das clulas globular, como a hemoglobina, a mioglobina, a hemocianina, as protenas com atividade enzimtica e as protenas das membranas celulares. Quando a relao comprimento-largura maior que 10:1, a protena dita fbrosa. Dentre as protenas fibrosas intracelulares, a qu era ti na a mais bem estudada. A protena mais abundante no corpo dos mamferos o colgeno, protena fibrosa extracelular que constitui as fibrilas colgenas j mencionadas. Estrutura secundria (alfa-hlice) de uma protena. As pontes de hidrognio entre os aminocidos esto representadas por traos paralelos. Molculas chaperones auxiliam a formao das complexas molculas proticas e a destruio das protenas defeituosas. Nos diversos locais do ambiente intracelular, muitas protenas esto se formando simultaneamente, o que dificulta a estruturao dos complexos proticos. Essa dificuldade, devida ao aglomerado de molculas nascentes no ambiente intracelular, contornada pelas molculas chaperones, que so protenas cuja funo principal se unirem s cadeias polipeptdicas nascentes, at que elas se liguem a outras cadeias polipeptdicas, para formar corretamente as complexas molculas finais. Sem o trabalho das chaperones, formar-se-iam muitos agregados proticos sem atividade funcional, pela unio, ao acaso, das numerosas cadeias polipeptdicas que so continuamente sintetizadas na clula. As molculas chaperones no s minimizam a agregao errada das cadeias polipeptdicas, como desfazem as agregaes defeituosas e promovem a eliminao, por hidrlise, das molculas proticas incorretamente formadas. Muitas tarefas das molculas chaperones so realizadas com gasto de energia fornecida por ATP. As chaperones desempenham ainda outras funes, como impedir o enovelamento das molculas proticas sintetizadas no citossol, porm destinadas s mitocndrias. Os mecanismos de transferncia de protenas para dentro das mitocndrias s funcionam para transportar molculas distendidas e nunca molculas j dobradas em sua configurao final. Depois da penetrao da protena mitocondrial distendida pela chaperone respectiva, as duas se separam e a protena mitocondrial assume sua forma retorcida final, ativa. Em outros locais, as chaperones desempenham ainda outras funes. Nas cisternas do retculo endoplasmtico existe uma chaperone que auxilia a orientao do dobra-mento de molculas proticas para que elas

assumam a conformao tridimensional correta. As principais chaperones so denominadas hsp60 e hsp70. A abreviatura provem de heat shockprotein, porque elas aumentam de quantidade quando as clulas so colocadas em temperatura mais elevada, e o nmero indica o peso molecular expresso em quilodltons. Desenho esquematizando as estruturas primria, secundria e terciria de uma protena. Na fita negra esto representados os resduos aminocidos (estrutura primria) e a hlice formada por eles (estrutura secundria). As dobras da molcula, demonstradas por seu contorno externo, em pontilhado fino, constituem a estrutura terciria. Atravs das enzimas, os genes controlam o metabolismo celular. As enzimas so molculas proticas dotadas da propriedade de acelerar intensamente determinadas reaes qumicas, tanto. Estas eletromicrografias mostram um exemplo da estrutura quaternria de uma protena, a hemocianina, presente no sangue de Limulus polyphenus. Em cima, corte da clula produtora de hemocianina, cujas molculas se agrupam formando cristalides (43-000 X). Embaixo, direita, com maior aumento (80.000 X), as molculas componentes dos cristalides (hemocianina) so visveis. esquerda, com aumento ainda maior (210.000 X), observa-se claramente que a molcula de hemocianina um tetrmero que aparece com aspectos diferentes conforme a posio em que observado (aeb). Sua subunidade ou monmero est indicada em c. Observar ainda dmeros (d) e os tetrmeros com seus quatro monmeros globulares bem visveis (e ef). (Micrografias de W.H. Fahrenbach, Journal of Cell Biology, 44:445, 1970. Reproduo autorizada. Eletromicrografia do tecido conjuntivo da pele humana. As estruturas alongadas so fibrilas colgenas constitudas pela agregao de molculas de tropocolgeno (protena fibrosa). As fibrilas so estruturas proticas quaternrias cujo monmero o tropocolgeno. esquerda, cortes oblquos dessas fibrilas. Aumento: 33000 X. Eletromicrografia de clula epidrmica de peixe. As setas indicam o limite entre duas clulas. Observar os numerosos filamentos de queratina (protena fibrosa); M, mitocndria; Ml, mitocndria em dobra (invaginao) do envoltrio nuclear. Aumento: 10.000 X. A micrografia menor, esquerda, mostra os filamentos de queratina aumentados 200.000 X

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no sentido da sntese como no da degradao de molculas. So elas as principais responsveis pela eficincia da maquinaria qumica intracelular. Graas s enzimas, as clulas executam, em milsimos de segundo, a sntese de molculas que, in vitro, sem enzimas, necessitariam de semanas de trabalho para serem sintetizadas. Alm da rapidez, as snteses enzimticas apresentam alto rendimento, isto , no final da reao gera-se apenas o produto desejado ou alguns produtos, mas todos teis s clulas. Ao contrrio, nas snteses de laboratrio, noenzimticas, formam-se, alm das molculas desejadas, numerosos subprodutos, originando-se assim uma mistura da qual a molcula desejada deve ser separada. Se isso acontecesse no meio intracelular, haveria uma concentrao de produtos indesejveis que perturbaria o metabolismo. Sendo catalisadores to eficientes, as enzimas tm sido usadas para sntese in vitro, tanto no laboratrio experimental como na produo industrial. As enzimas so protenas e, como tais, produzidas sob 0 controle do DNA. Elas so os efetores da informao gentica contida no DNA, e atravs delas que o DNA comanda todo o metabolismo celular. Embora praticamente todas as molculas enzimticas sejam protenas, h alguns RNAs denominados ribo-zirnas, que possuem atividade enzimtica, constituindo uma.exceo regra geral. Ao enzimtica. O composto que sofre a ao de uma enzima chama-se substrato. A molcula da enzima possui um ou mais centros ativos, aos quais o substrato se combina para que seja exercida a ao enzimtica. A forma tridimensional da enzima importante para a sua atividade, pois os centros ativos so regies cuja conformao tridimensional complementar da molcula do substrato. Essa estereocomplementaridade essencial para que se verifique o encaixe tridimensional preciso entre a enzima e seus substratos; atravs desse encaixe que a enzima reconhece e se prende com maior ou menor intensidade (afinidade) a seus substratos. A especificidade das enzimas muito varivel. Algumas atuam exclusivamente sobre um tipo de molcula, no atacando sequer seu estereoismero. Por exemplo, a desidrogenase lctica especfica para o L-lactato, e a D-aminocido-oxidase s ataca os D aminocidos. Por outro lado, h enzimas que atuam sobre vrios compostos com alguma caracterstica estrutural comum. E o caso, por exemplo, das fosfatases, que hidrolisam diversos steres do cido fosfrico. Para exercerem sua atividade, muitas enzimas necessitam de co-fatores, que podem ser um on metlico ou uma molcula. Quando o co-fator uma molcula, recebe o nome de coenzima. Ao contrrio da prpria enzima, que, sendo protena, desnaturada e inativada por temperaturas muito elevadas, em geral as coenzimas so termoestveis. Alguns co-fatores esto ligados de modo permanente e ntimo molcula da

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enzima, enquanto outros a ela se unem temporariamente, durante a ao enzimtica complexo formado pela enzima com o co-fator, independentemente do grau de unio qumica entre eles, chama-se holoenzima/Removendo-se o co-fator, resta a parte protica da enzima, que ento inativa e se chama apoenzima. Quando o co-fator est fortemente ligado molcula da apoenzima, ele constitui um grupo prosttico e a enzima deve ser considerada uma protena conjugada. A parte ativa de muitas coenzimas contm vitaminas do grupo B, como riboflavina, tiamina, cido pantotnico e nicotina-mida. Combinao reversvel entre os substratos e o centro ativo da enzima. Demonstra-se tambm a ao enzimtica (ATP + glicose > ADP + glicose-6-fosfato). Esta figura ilustra a importncia da estrutura tridimensional de uma protena (enzima) para sua atividade biolgica. necessrio que o substrato se encaixe na molcula enzimtica para que a enzima atue. Nomenclatura. Muitas enzimas so designadas pelo nome do substrato sobre o qual atuam mais o sufixo -ase. Por exemplo, o cido ribonuclico (substrato) hidrolisado por uma enzima que recebeu o nome de ribonuclease. Outras enzimas, porm inclusive algumas dentre as mais bem-estudadas , so conhecidas por nomes que no seguem essa regra. So exemplos a pepsina e a tripsina, que hidrolisam protenas. A Comisso de Enzima da Unio Internacional de Bioqumica adotou uma classificao das enzimas em seis categorias principais, cada uma com subdivises, e estabeleceu normas para a designao mais precisa e informativa de cada enzima. Por exemplo, pela nomenclatura da Comisso, a enzima em geral chamada hexoquinase e que catalisa a reao ATP + glicose Glicose-6-fosfato + ADP deve ser chamada ATP: hexose-fosfotransferase. Esta ltima denominao indica mais precisamente a ao da enzima, que transferir um grupo fosfato do ATP para uma hexose. Todavia, a nomenclatura internacional pouco usada na prtica, porque as enzimas recebem designaes muito longas, em comparao com seus nomes corriqueiros. A atividade enzimtica muito sensvel ao de diversos fatores A atividade das enzimas, muito sensvel a diversos agentes qumicos e fsicos, capaz de ser inibida de vrias maneiras. A inibio pode ser competitiva ou no-competitiva. Entre os fatores que afetam a atividade enzimtica, chamam a ateno a temperatura, concentrao do substrato e presena de ativadores ou inibidores que alteram a velocidade de atuao das enzimas.

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O efeito da temperatura tem grande importncia prtica, uma vez que o frio deprime a atividade enzimtica, retardando os processos de lise celular e a deteriorao de amostras de tecidos, sangue, urina etc. utilizadas em exames de laboratrio. No transplante de rgos, comum o uso de temperaturas baixas para melhor preservao dos tecidos a serem transplantados. Temperaturas muito baixas obtidas geralmente com o uso de nitrognio lquido (ponto de ebulio 195,8C) so utilizadas de rotina na preservao de culturas de tecidos, amostras de tecidos para posterior anlise bioqumica, sementes de plantas, espermatozides para inseminao artificial e embries para transplante. Inibio competitiva. Quando uma substncia resistente ao enzimtica, porm de molcula muito parecida com a do substrato da enzima, se fixa nos centros ativos da molcula enzimtica, diz-se que a inibio competitiva. Nesse caso, o inibidor compete com o substrato para se localizar no centro ativo, e o grau de inibio influenciado pela concentrao do substrato. Quanto maior a concentrao do substrato, menor ser a probabilidade de o inibidor chocar-se com as molculas da enzima e ocupar seus centros ativos. 2. Inibio no-competitiva. Esse tipo de inibio no afetado pela concentrao do substrato, dependendo exclusivamente da concentrao do inibidor. O caso mais freqente de inibio no-competitiva representado pela combinao reversvel de metais pesados com os grupos SH da molcula enzimtica. Isso altera a forma tridimensional da molcula da enzima e impede sua atividade. Ocorre tambm inibio no-competitiva quando a enzima precisa de certos ons e estes so removidos da soluo. Por exemplo, as enzimas que necessitam de Mg2+ so inibidas pelo EDTA (etilenodiaminotetracetato de sdio), pois esse composto forma um complexo com ctions divalentes e, desse modo, remove o Mg2+ da soluo. A inibio reversvel pela adio de ctions Mg2+. Para aumentar sua eficincia, as enzimas se agrupam em complexos ou se prendem a membranas. Na clula viva, a maioria das enzimas funciona em seqncia, de modo que o produto resultante da ao de uma enzima o substrato para a enzima seguinte. Esse conjunto de enzimas trabalhando em cooperao denominado cadeia enzimtica. Um sistema muito eficiente e freqente nas clulas o representado pelos complexos de molculas enzimticas. Aqui, todas as enzimas da cadeia se associam para formar um conjunto de molculas que se mantm unidas por foras qumicas fracas (estrutura protica quaternria). Na clula da levedura, por exemplo, as enzimas que sintetizam cidos graxos a partir de pequenas molculas formam uma cadeia que consiste em sete enzimas que se associam

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para formar um complexo multienzimtico. As reaes processam-se em seqncia e as molculas intermedirias mantm-se presas ao complexo at a formao da molcula do cido graxo. Isso torna o sistema mais rpido, pois os substratos no precisam deslocar-se muito de uma enzima para outra. Outro complexo enzimtico bem estudado o da desidrogenase do piruvato. No microscpio eletrnico, o complexo enzimtico da desidrogenase do piruvato mostra aspecto polidrico, e foi sugerido um modelo segundo o qual suas enzimas devem estar organizadas . As cadeias enzimticas mais bem organizadas e, portanto, mais eficientes so as que esto ligadas a membranas, como, por exemplo, a cadeia das enzimas respiratrias (transportadoras de eltrons) que esto presas membrana interna das mitocndrias. Nesses casos no h separao entre molcula enzimtica e molcula estrutural, pois as diferentes protenas so, ao mesmo tempo, parte da membrana e tambm dotadas de atividade enzimtica. As cadeias enzimticas funcionam sob regulao. A maioria das enzimas no apresentam constncia em suas atividades, podendo facilmente ser moduladas. Isso representa uma importante propriedade biolgica porque possibilita s clulas modificar seletivamente a atividade de determinadas enzimas, para adequ-las s necessidades momentneas que vo surgindo durante a vida da clula. Muitas cadeias enzimticas so moduladas por auto-regulao, sobretudo pelo efeito do produto final da cadeia sobre a primeira enzima da seqncia. Por exemplo, a Ltreonina transformada em L-isoleucina atravs de uma cadeia de cinco enzimas. A primeira enzima dessa cadeia (EI) a L - treonina-desaminase, cuja atividade diminuda ou suprimida pela L-isoleucina. Desse modo, a falta de L-isoleucina provoca o funcionamento da cadeia em toda a sua intensidade, enquanto o excesso de L-isoleucina faz a cadeia diminuir de ritmo, ou mesmo parar a produo de mais L-isoleucina. Assim sendo, a concentrao desse aminocido na clula permanece dentro dos limites normais. No caso, tratase de uma regulao alostrica. A enzima sensvel a esse tipo de controle no exemplo dado, a L-treonina-desaminase chama-se enzima reguladora, e a substncia inibidora no caso a Lisoleucina conhecida como efetor ou modulador. Na regulao alostrica, que um tipo muito freqente de regulao enzimtica, o efetor combina-se com a enzima em um local diferente do centro ativo e denominado centro alostrico. Em conseqncia, ocorre uma modificao na conformao tridimensional da molcula enzimtica, com alterao do centro ativo da enzima, cuja atividade cataltica inibida.

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Regulao (inibio) alostrica. A L-treonina transformada em L-isoleucina atravs de uma cadeia de cinco enzimas. Mas a primeira enzima dessa cadeia uma protena alostrica que inibida pela L-isoleucina. Assim, o excesso de L-isoleucina bloqueia e sua falta estimula a sntese desse aminocido. Esquema didtico de regulao alostrica. A fixao do modulador no centro alostrico da protena (enzima) modifica o centro ativo, impede a fixao do substrato e inibe a ao enzimtica. Outras vezes, a atividade da enzima modulada pela interao com outras protenas ou ento pela adio covalente de radicais fosfato aos aminocidos serina, treonina ou tirosina presentes na molcula enzimtica. A fosforilao de protenas desempenha importante papel regulador no apenas em reaes metablicas, mas tambm em muitos outros processos celulares como crescimento, diferenciao celular, desmontagem do envoltrio nuclear na prfase e sua reorganizao na telfase. Enzimas utilizada pelas clulas para modular os efeitos dessas enzimas, de acordo com suas necessidades. Um exemplo bem estudado a isoenzima desidrogenase do cido lctico. No rato, a molcula constituda por quatro cadeias polipeptdicas (monmeros), de dois tipos diferentes, chamados M e H. Conforme a proporo desses dois monmeros existem cinco desidrogenases do cido lctico, cujas molculas podem ser assim representadas: Isoenzimas so molculas ligeiramente diferentes da mesma enzima. Certas enzimas existem sob formas moleculares ligeiramente distintas nos diversos tecidos, ou na mesma clula de determinada espcie animal. Nesses casos, a molcula da enzima constituda por cadeias polipeptdicas (monmeros) diferentes, agrupadas em propores variveis. As diferenas de atividade entre as enzimas so onseqncia das diversas propores dos monmeros em suas molculas. As enzimas de uma mesma espcie animal que atacam o mesmo substrato mas que exibem diferenas na atividade, no pH timo de ao, na mobilidade eletrofortica ou outras, so chamadas isoenzimas. Essas cinco desidrogenases lcticas foram isoladas em forma pura. Todas atacam o mesmo substrato (cido lctico), porm o fazem em velocidades diferentes. Portanto, do ponto de vista biolgico, a principal distino entre as isoenzimas o grau de atividade de cada uma. Est demonstrado que existe um gene que determina a seqncia de aminocidos do monmero M e outro que determina a do monmero H. Conforme a maior ou menor atividade de cada um desses genes, haver maior produo do mRNA para M ou para H e os polirribossomos produziro diferentes quantidades de M e H. Como esses monmeros se unem

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espontaneamente, ao acaso, para constituir as enzimas, as propores de M e de H vo depender da atividade daqueles genes. Trata-se de um controle gnico, pelo qual, alterando as propores dos monmeros produzidos (cadeias polipeptdicas), os genes influem na estrutura quaternria das protenas e podem modular a sua atividade enzimtica. Os 20 aminocidos possibilitam a construo de enorme variedade de molculas proticas, com funes diversificadas. As protenas so os componentes qumicos mais diversificados da clula, devido ao fato de serem constitudas de 20 aminocidos diferentes. Essa diversificao estrutural se reflete nas suas mltiplas funes biolgicas (Tabela 3.4), pois, dos componentes macromoleculares das clulas, so os mais polifuncionais. Alm da atividade enzimtica, as protenas tm importante funo estrutural (nos filamentos intermedirios, microfilamentos e microtbulos), informacional (nos hormnios proticos) no movimento das clulas (exemplificado pela atividade motora do complexo actina-miosina) e, finalmente, uma pequena importncia como fonte energtica. A quase totalidade da energia consumida pelas clulas fornecida pelas molculas de lipdios e hidratos de carbono. cidos nuclicos so polmeros de nucleotdeos Os cidos nuclicos so constitudos pela polimerizao de unidades chamadas nucleotdeos. Nucleotdeos do RNA e do DNA. As bases diferentes (uracila e timina) esto assinaladas. No carbono 2', a desoxirribose possui um tomo de oxignio a menos (observar os retngulos cinza). Cada nucleotdeo contm resduos de uma molcula de cido fosfrico, uma de pentose e uma de base prica ou pirimdica. As bases pricas mais encontradas nos cidos nuclicos so a adenina e a guanina, m geral designadas pelas iniciais A e G, respectivamente. As principais bases pirimdicas so a timina, a citosina e a uracila, designadas pelas letras T, C e U. Alm dos polmeros de nucleotdeos, que constituem as molculas dos cidos nuclicos, as clulas contm quantidades relativamente grandes de nucleotdeos livres, desempenhando sobretudo as funes de coenzimas. Por hidrlise parcial possvel retirar o radical fosfato dos nucleotdeos. Aparecem ento compostos denominados (RNA e DNA). Estrutura molecular dos nucleosdeos. No exemplo, o nucleosdeo constitudo pela adenina combinada desoxirribose) nucleosdeos, constitudos por uma pentose e uma base prica ou pirimdica. Os cidos nuclicos so molculas informacionais que controlam os processos

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bsicos do metabolismo celular, a sntese de macromolculas, a diferenciao celular e a transmisso do patrimnio gentico de uma clula para as suas descendentes. Distinguem-se dois tipos de cidos nuclicos: o desoxirribo-nuclico ou DNA e o ribonuclico ou RNA. No DNA, a pentose encontrada a desoxirribose, e as bases so adenina, guanina, citosina e timina. No RNA, a pentose a ribose, e existe uridina em substituio timina; as outras bases so comuns aos dois tipos de cidos nuclicos . O DNA o repositrio da informao gentica e a transmite para as clulas-filhas. O cido desoxirribonuclico ou DNA o responsvel pelo armazenamento e transmisso da informao gentica. E encontrado principalmente nos cromossomos e, em pequenas quantidades, nas mitocndrias e nos cloroplastos. Nos cromossomos das clulas eucariontes, o DNA est associado a protenas bsicas, principalmente histonas. A molcula de DNA consiste em duas cadeias de nucleotdeos dispostas em hlice em torno de um eixo. O passo dessas hlices dirigido no sentido da esquerda para a direita. A direo das ligaes 3' e 5' dister-fosfato de uma cadeia inversa em relao da outra cadeia. Diz-se que essas cadeias so antiparalelas. Em funo desse fato, em cada extremidade da molcula uma das cadeias polinucleotdicas termina em 3' e a outra em 5'. As bases pricas e pirimdicas de cada cadeia polinucleotdica situam-se dentro da hlice dupla, em planos paralelos entre si e perpendiculares ao eixo da hlice, como se fossem degraus de uma escada. Em cada plano ou degrau da escada, a base de uma cadeia forma par com a base da cadeia complementar. Devido s dimenses das molculas das bases, o pareamento s tem lugar entre a timina e a adenina, ou entre a guanina e a citosina, (Fig. 3.18 Polinucleotdeo do DNA.) das cadeias complementares. Portanto, considerando-se os dois polinucleotdeos que constituem a molcula de DNA, as bases esto sempre pareadas na seqncia T-A ou G-C. Isso explica a existncia, no DNA, de nmero igual de molculas de T e A, e de G e C. Na hlice dupla, as bases unem-se atravs de pontes de hidrognio, principais responsveis pela estabilidade da hlice. Quando as pontes de hidrognio so rompidas por exemplo, pelo aquecimento do DNA em soluo , os dois filamentos polinucleotdicos da hlice sofrem desnaturao, separando-se; quando baixa a temperatura, eles se unem novamente. A desnaturao pelo rompimento das pontes de hidrognio pode ser completa ou parcial. Essa desnaturao ocorre mais cedo nas ligaes AT, que tm duas pontes de hidrognio, sendo as ligaes CG mais resistentes, pois tm trs pontes de hidrognio. A desnaturao parcial permite a identificao das zonas ricas em AT e das zonas ricas em CG,

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sendo estes ltimos segmentos mais resistentes desnaturao. Em molculas simples de DNA, como as dos bacterifagos, essa tcnica possibilita a localizao de zonas com diferentes freqncias de nucleotdeos ao longo do filamento de DNA. Ao longo da molcula de DNA, a distncia entre as bases de 0,34 nm e cada volta completa da hlice contm 10 nucleotdeos. A hlice dupla tem um dimetro de 2 nm e sua superfcie mostra dois sulcos, um dos quais mais acentuado que o outro. As bases (hidrofbicas) situam-se dentro da hlice, e os resduos de desoxirribose (hidroflicos) e de cido fosfrico (ionizado e hidroflico) localizam-se na periferia, em contato com a gua intracelular. Ao lado das pontes de hidrognio que representam o elemento principal de unio entre os dois filamentos polinucleotdicos da hlice dupla, a interao hidrofbica das bases pareadas contribui para manter a estabilidade da hlice de DNA. Os grupos fosfricos, ionizados negativamente, permitem ao cido desoxirribonuclico combinar-se com protenas bsicas, isto , carregadas positivamente, ou com outras molculas eletricamente positivas. Devido sua fragilidade e enorme comprimento, tem sido difcil determinar o tamanho exato das molculas de DNA. Sabe-se, por exemplo, que a molcula de DNA do bacterifago lambda, que infecta a bactria Escherichia coli, tem um peso de 32 milhes de dltons e comprimento de 17,2 xm. Na Escherichia coli, o cromossomo uma molcula de DNA, com comprimento de 1,2 mm e peso molecular de 2.800.000.000 dltons. O RNA transfere a informao gentica do DNA para as protenas Ao contrrio do DNA, cuja molcula quase sempre formada por duas cadeias polinucleotdicas, a molcula de RNA um filamento nico, e s existe excepcionalmente, sob a forma de filamentos duplos complementares. Nos dois casos, as excees so encontradas nos vrus: alguns tm DNA em filamento nico, enquanto outros tm RNA em cadeia dupla complementar. Dos pontos de vista funcional e estrutural, distinguem-se trs variedades principais de cido ribonuclico: RNA de transferncia ou tRNA; RNA mensageiro, abreviadamente mRNA; e RNA ribossmico ou rRNA. RNA de transferncia. Dos trs tipos de cidos ribonuclicos, o tRNA o que possui molculas menores. Estas so constitudas de 75 a 90 nucleotdeos e tm peso molecular compreendido entre 23.000 e 30.000 dltons. Sua funo transferir os aminocidos para as posies corretas nas cadeias

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polipeptdicas

em

formao

nos

complexos

de

ribossomos

RNA

mensageiro

(polirribossomos). Para isso, o tRNA possui a propriedade de se combinar com aminocidos e capaz de reconhecer determinados locais da molcula do mRNA constitudos por uma seqncia de trs bases. Entre T e A existem duas pontes de hidrognio e, entre G e C, trs. Esquema da estrutura em hlice dupla do DNA, segundo Watson e Crick. A, adenina; T, timina; C, citosina; G, guanina; P, fosfato e S. Desnaturao parcial da molcula de DNA do bacteriofago T7. A separao dos segmentos polinucleotdicos mais precoce nos segmentos com abundncia de ligaes AT (setas). Micrografia eletrnica. (Vollenweider, H.J., J.M. Sogo and T. KoUer. Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 72:83, 1975. Reproduzido com permisso.)} Essas seqncias, tpicas para cada aminocido, so denominadas cdon. A seqncia de trs bases na molcula do tRNA e que reconhece o cdon chama-se anticdon (Fig. 3.22). Para cada aminocido existe pelo menos um tRNA. A molcula do tRNA um filamento com uma extremidade terminando sempre pela seqncia CCA, isto , pelo cido adenlico (A) precedido de duas molculas de cido citidlico (C). Graas a um processo enzimtico que consome energia liberada por hidrlise de ATP, uma hidroxila do cido adenlico da extremidade CCA esterificada por um Laminocido, formando-se assim uma molcula de Acil-tRNA. A enzima catalisadora dessa esterificao especfica para cada aminocido. A molcula do tRNA possui uma regio que reconhecida pela enzima, e, desse modo, cada aminocido ligado ao seu tRNA. Devido s pontes de hidrognio que se estabelecem entre as suas bases, todos os tRNAs apresentam segmentos das molculas formados por uma hlice dupla. A representao plana, esquemtica, da molcula do tRNA tem o aspecto de uma folha de trevo, a qual mostra o anticdon em um de seus lados. Estrutura do RNA de transferncia para o aminocido tirosina. Alm das bases habituais, esse tRNA contm as seguintes bases: mG = N-2-metiIguanosina; dhU = N-6diidrouridina; omG = 2-0- metilguanosina; dmG = 2-dimetilguanosina; dmA = N-6dimetiladenosina; 5mC = 5-metilcitosina. A letra grega psi () representa o cido pseudouridlico. Alm das bases adenina, guanina, citosina e uracila, comumente encontradas no RNA, o tRNA contm outras bases que no aparecem nos outros tipos de cido ribonuclico (Tabela 3.3). Entre essas bases tpicas do tRNA, esto, por exemplo, a hipoxantina e a metilcitosina. O tRNA possui ainda cido ribotimidlico, que um nucleotdeo constitudo por

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cido fosfrico, ribose e timina, base geralmente encontrada no DNA. Alm disso, o tRNA apresenta em sua molcula o cido pseudo-uridlico, que difere do cido uridlico comum por apresentar a ribose ligada ao carbono 5 da uracila, e no ao nitrognio 3, como habitual. Em concluso, v-se que o tRNA possui caractersticas que o diferenciam dos outros tipos de RNA, facilitando a sua identificao. As regies do tRNA que contm as bases no-habituais talvez sejam importantes para determinar o formato da molcula, pois nessas regies no se formam pontes de hidrognio entre as bases. Os tRN As so inicialmente sintetizados sobre os filamentos de DNA, como molculas maiores que passam por um processamento (splicing) tornando-se menores, antes de migrarem para o citoplasma. Esse processamento do tRNA consiste na remoo de determinados pedaos da molcula maior e soldagem dos ragmentos que vo constituir a molcula final do tRNA. um processo semelhante ao que ser descrito adiante neste captulo ao se examinar o mRNA, onde o assunto tem sido mais estudado. RNA mensageiro O mRNA sintetizado nos cromossomos, como os demais RNAs da clula, e representa a transcrio de um segmento de uma das cadeias da hlice de DNA. Note-se que, durante a sntese do mRNA, os filamentos de um segmento da molcula de DNA separam-se temporariamente. O peso molecular do mRNA varia de acordo com o tamanho da molcula protica que ele vai codificar no citoplasma. Evidentemente, a molcula de mRNA bem maior do que a de protena por ele formada, porque so necessrios trs nucleotdeos para codificar um aminocido. Alm disso, muitas protenas so sintetizadas com um segmento extra, formado por vrios aminocidos que so removidos no acabamento final da protena. Por isso, o peso molecular dos mRNAs da ordem de centenas e at milhares de dltons. Nas clulas procariontes, as molculas de mRNA podem ser ainda maiores, porque nas bactrias uma longa molcula de mRNA pode ser traduzida a partir de locais diferentes, originando mais de uma protena, conforme o local do mRNA onde a traduo teve incio. Cada molcula de mRNA tem um prolongamento (tail) de poli-A que adicionado ainda no interior do ncleo celular, assim que a molcula de mRNA transcrita, por uma enzima que no requer molde (template) de DNA. Portanto, esse segmento do mRNA no est codificado no DNA. Na outra extremidade do mRNA (extremidade 5'), um pequeno capuz (cap.) nucleotdico adicionado por outras enzimas. Os mRNAs citoplasmticos derivam de precursores nucleares conhecidos como hnRNAs (heterogenous RNAs), assim chamados por apresentarem grande heterogeneidade nos

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pesos moleculares e na composio de nucleotdeos. A maioria dos hnRNAs tem molculas enormes, com at 50.000 nucleotdeos. Essas molculas so partidas no ncleo, de modo ordenado. Certos pedaos so removidos e as extremidades dos segmentos que codificam protenas se soldam (splicing), formando-se a molcula acabada de mRNA, que migra para o citoplasma. Fica claro do exposto que, nas clulas eucariontes, o DNA que transcreve os mRNAs constitudo por partes que vo ser traduzidas em protenas, denominadas xons, e em partes que apenas separam os xons. Essas partes "silenciosas" so denominadas ntrons. Portanto, o DNA inicialmente transcreve uma molcula enorme de hnRNA da qual os segmentos sem significado para a sntese protica so removidos, ocorrendo ento a soldagem precisa dos segmentos que levam a codificao para um tipo de molcula protica e, assim, fica formada uma molcula de mRNA. Todavia, alguns genes no possuem ntrons e as molculas de mRNA se formam diretamente do DNA, sem passar pela fase de hnRNA. ntrons e hnRNA s foram encontrados em clulas eucariontes, sendo muito pouco provvel que existam nas procariontes. Dois nucleotdeos encontrados no tRNA: no cido pseudo-uridlico, a ribose liga-se ao carbono 5 da uridina, e no ao carbono 3, como ocorre no cido uridlico. O cido ribotimidlico contm timina, uma base que, usualmente, encontrada no DNA. RNA ribossmico 0 RNA ribossmico muito mais abundante do que os outros dois tipos de RNA, constituindo 80% do RNA celular. Existe combinado com protenas, formando partculas facilmente visveis ao microscpio eletrnico e denominadas ribossomos. Quando presos a filamentos de RNA mensageiro, os ribossomos formam os polirribossomos, onde tem lugar a sntese de protenas. Existem nas clulas dois tipos de ribossomos que se distinguem por seus coeficientes de sedimentao determinados na ultracentrfuga e expressos em unidades S ou Svedberg. Os ribossomos das clulas procariontes tm coeficiente de sedimentao de 70 S e so menores do que os ribossomos das clulas eucariontes, cujo coeficiente de sedimentao de 80 S. Ambos os tipos de ribossomos so formados por duas subunidades, uma maior e outra menor, com caractersticas funcionais e estruturais diferentes. As subunidades se prendem de modo reversvel no incio da sntese da molcula protica, separando-se quando a protena est terminada. A subunidade maior dos ribossomos

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das clulas eucariontes contm trs tipos de RNA, com sedimentao de 28 S, 5,8 S e 5 S, e a dos ribossomos das procariontes possui dois tipos de RNA: um de 23 S e outro de 5 S. A subunidade menor apresenta apenas um tipo de RNA: 18 S nas clulas eucariontes e 16 S nas procariontes. Os ribossomos das mitocndrias e dos cloroplastos so iguais aos das clulas procariontes, dado que apia a interpretao de que essas duas organelas transdutoras de energia se originaram de bactrias que se tornaram simbiontes das clulas eucariontes. Cerca de 50 variedades de protenas foram identificadas nos ribossomos e constituem aproximadamente a metade da massa desses corpsculos. A basofilia citoplasmtica demonstrvel pelos corantes bsicos e removvel pela ribonuclease deve-se aos ribossomos. Estes so particularmente abundantes nas clulas que sintetizam grandes quantidades de protenas, as quais tm o citoplasma fortemente basfilo. Combinao do RNA mensageiro com ribossomos para formar polirribossomos. O RNA pode ter ao enzimtica Em alguns casos, o RNA tem ao cataltica, atuando como uma enzima. A atividade cataltica do RNA foi descoberta ao se estudar a sntese dos RNAs de Tetrahymena, um protozorio ciliado. Descobriu-se que esses RNAs so inicialmente molculas muito grandes das quais certos segmentos so removidos e as partes restantes so soldadas (splicing), formando-se assim a molcula final do mRNA. Todo o processo se realiza, como foi comprovado in vitro, sem a participao de protenas enzimticas. O segmento de RNA que vai ser removido (ntron) catalisa sua prpria remoo e a unio das extremidades da molcula partida. Esse segmento de RNA, in vitro, capaz de catalisar a polimerizao de polinucleotdeos pequenos em polinucleotdeos com mais de 30 nucleotdeos, tendo sido chamado de ribozima. Outros RNAs com atividade cataltica foram descobertos logo depois, como, por exemplo, os tRNAs, que, quase sempre, tambm so sintetizados em tamanho maior. Nesse caso foi observado que a clivagem para produzir a molcula de tRNA final, de tamanho menor, catalisada por um complexo RNA - protena (ribonuclease P). Mas a especificidade e atividade enzimtica desse complexo depende mais do RNA do que da protena. Separando-se o complexo RNA - protena em suas duas partes, somente o RNA tem atividade cataltica, embora o complexo inteiro seja mais ativo. Portanto, nesse caso o RNA essencial para a atividade enzimtica e a protena exerce um papel auxiliar, secundrio.

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A descoberta de que o RNA pode ter atividade enzimtica teve grande repercusso sobre as hipteses quanto origem da vida na Terra. possvel que a molcula inicial das futuras clulas tenha sido um RNA capaz de auto-replicao. Esse RNA primordial teria servido de molde (template) para o DNA, comeando em seguida a sntese dirigida das protenas. Pela tcnica de hibridizao se podem caracterizar as molculas de cidos nuclicos. Existem no citoplasma muitos RNAs diferentes, necessrios para a sntese das numerosas protenas celulares. A caracterizao dos RNAs mensageiros no fcil. Uma tcnica que se tem mostrado muito til para o seu estudo a hibridizao com DNA. A hlice dupla de DNA formada por duas cadeias unidas por pontes de hidrognio que so foras fracas. Essas duas cadeias podem ser separadas facilmente pelo aquecimento brando e podem se recombinar pelo resfriamento lento. Mas as cadeias de DNA separadas podem combinar-se com molculas de RNA, processo muito seguro para caracterizar uma molcula de RNA, pois ela se combina exclusivamente com o segmento de DNA do qual foi transcrita. Os lipdios formam reservas nutritivas e tm papel estrutural nas membranas celulares. Os compostos de carbono extrados de clulas e tecidos por solventes orgnicos no-polares como ter, clorofrmio e benzeno so chamados lipdios. Em virtude de serem definidos por sua solubilidade nesses solventes e no pela estrutura qumica, o grupo dos lipdios compreende substncias com molculas muito diferentes. De acordo com suas funes principais, os lipdios celulares podem ser divididos em duas categorias: lipdios de reserva nutritiva e lipdios estruturais. Estes tm papel relevante na manuteno da estrutura das membranas celulares. As vitaminas A, E e K so lipdios dotados de importantes atividades fisiolgicas. Os hormnios esterides, entre os quais os da adrenal, ovrio e testculo, e o 1,25diidroxicolecalciferol (substncia ativa formada, no organismo dos mamferos a partir da "vitamina" D) so lipdios informacionais (transportam informaes). Todavia, como exercem funes especializadas e no so constituintes gerais das clulas, no sero estudados neste captulo. Lipdios de reserva nutritiva. As reservas nutritivas de natureza lipdica compemse de gorduras neutras. Estas so steres de cidos graxos com o trilcool glicerol ou glicerina. A molcula da gordura neutra pode apresentar um, dois ou, mais comumente, trs resduos de cidos graxos. Quando existe mais de um cido graxo, eles podem ser iguais ou diferentes. O nmero de tomos de carbono nos cidos graxos quase sempre par, porque suas

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molculas so sintetizadas a partir de resduos com dois tomos de carbono. Os cidos graxos mais freqentes nas gorduras neutras so os de 16 e 18 tomos de carbono. Os depsitos intracelulares de lipdios constituem-se quase exclusivamente por gorduras neutras, nas quais o glicerol est esterificado por trs cidos graxos. So, portanto, depsitos de Triacilgliceris ou triglicerdeos, com pequena quantidade de diacilgliceris e monoacilgliceris. Esses depsitos ocorrem em quase todos os tipos celulares, havendo, porm, clulas especializadas para o acmulo de gorduras neutras, as clulas adiposas. Substituio das hidroxilas da glicerina por cidos graxos, para formar uma molcula de triacilglicerol ou triglicerdeo (gordura neutra). Lipdios estruturais. Esses lipdios so componentes estruturais de todas as membranas celulares: membrana plasmtica, envoltrio nuclear, retculo endoplasmtico, aparelho de Golgi, endossomos, mitocndrias, cloroplastos, lisossomas etc. Muitas propriedades dessas membranas decorrem das caractersticas qumicas e fsicas de seus lipdios. Os lipdios estruturais so mais complexos que os de reserva. Suas molculas so longas e dotadas de uma extremidade polar isto , com carga eltrica e uma longa cadeia apoiar, no-ionizada. A extremidade polar hidroflica, enquanto a poro apoiar, constituda geralmente por duas cadeias alifticas, hidrofbica e, portanto, solvel em lipdios. Os lipdios que exercem papel essencialmente estrutural, fazendo parte do sistema de membranas das clulas, so os fosfolipdios (fosfoglicerdeos e esfingolipdios), os glicolipdios e o colesterol. Fosfoglicerdeos. Nesses fosfolipdios, uma das hidroxilas primrias, isto , a do carbono 1 ou a do 3 do glicerol, esterificada pelo cido fosfrico. As outras duas hidroxilas so esterificadas por cidos graxos, sendo o cido graxo do carbono 2 em geral insaturado. O fosfoglicerdeos mais simples o cido fosfatdico, constitudo apenas por um resduo de glicerol, um de cido fosfrico e dois de cidos graxos. O cido fosfatdico existe em pequena quantidade nas membranas celulares. Os fosfoglicerdeos mais encontrados nessas membranas so fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina e fosfatidilinositol. Esfingolipdios. Um exemplo de esfingolipdio a esfingomielina, muito abundante nas bainhas de mielina do tecido nervoso. A bainha de mielina funciona como isolante eltrico de prolongamentos das clulas nervosas, sendo formada por dobras concntricas da membrana plasmtica de clulas especializadas. A esfingomielina constituda por uma molcula de colina, uma de cido fosfrico,

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uma de esfingosina e uma de cido graxo. Frmula dos fosfoglicerdeos. O radical R pode ser a colina, a etanolamina, a serina ou a treonina. Esses fosfolipdios so denominados fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina e fosfatidiltreonina, respectivamente. Frmula da molcula de esfingomielina. A principal caracterstica estrutural dos esfingolipdios a presena da longa cadeia de esfingosina, ao lado de uma cadeia de cido graxo, que se prende esfingosina por uma ligao s-ter. Tal como os fosfoglicerdeos, os esfingolipdios possuem uma extremidade polar e duas caudas apolares. Os glicolipdios tm extremidades polares formadas por glicdios, principalmente D - galactose. Suas molculas so, em geral, constitudas por molculas glicdicas, uma molcula de glicerol e duas de cidos graxos. Os glicolipdios no contm cido fosfrico. Entre os glicolipdios importantes, encontram-se os gangliosdeos, que possuem glicdios muito complexos. Por exemplo, do tecido nervoso isolou-se o gangliosdeo Gm2 constitudo pelas seguintes molculas: um cido graxo, esfingosina, D - glicose, D - galactose, N-acetil-Dgalactosamina e cido N-acetilneuramnico. Os cerebrosdeos so glicoesfingolipdios, pois suas molculas contm esfingosina e glicdios. Os cerebrosdeos so abundantes nas membranas das clulas do tecido nervoso, sobretudo nas bainhas de mielina. Colesterol. O colesterol um esterol, isto , um composto que contm o ncleo peridrociclopentanofenantreno, com uma hidroxila no carbono 3 e uma cadeia aliftica, com oito ou mais tomos de carbono, ligada ao carbono 17 do ncleo. O colesterol est presente na membrana plasmtica das clulas animais, ocorrendo, porm, em quantidade muito menor nas membranas das mitocndrias e do retculo endoplasmtico. 0 colesterol reduz a fluidez das membranas. As clulas dos vegetais no possuem colesterol, que ento substitudo por outros esteris, denominados coletivamente de fitoesteris. A presena de longas cadeias hidrofbicas nos lipdios de grande importncia biolgica, pois so elas que possibilitam a interao hidrofbica responsvel pela associao de lipdios para formar a bicamada lipdica das membranas celulares. A fixao das protenas integrais das membranas devida interao das pores hidrofbicas das molculas dessas

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protenas com os lipdios das membranas. A interao hidrofbica tambm importante no transporte de lipdios no plasma. Por exemplo, os esterides circulam presos a uma regio hidrofbica da superfcie da molcula de albumina, que solvel em gua. Os lipdios tm menor diversidade funcional do que as protenas e polissacardeos. Tm principalmente funo energtica e estrutural. Sua atividade informacional restrita a alguns hormnios esterides. Frmula da molcula do colesterol. A parte cclica da molcula comum a todos os esteris. Os polissacardeos formam reservas nutritivas e unem-se a protenas para formar glicoprotenas (funo enzimtica e estrutural) e proteoglicanas (funo estrutural). Os polissacardeos so polmeros de monossacardeos. H polissacardeos com molculas lineares, enquanto outros tm molculas ramificadas. A molcula de alguns polissacardeos constituda pela repetio de um nico tipo de monossacardeo. So os polissacardeos simples ou homopolmeros. Por exemplo, o amido e o glicognio so polmeros simples de D - glicose e no contm outro tipo de molcula. Os polissacardeos complexos (heteropolmeros), constitudos por mais de um tipo de monossacardeo, so menos freqentes nas clulas, porm alguns so biologicamente muito importantes. Os polissacardeos associados superfcie externa da membrana celular desempenham papel estrutural e informacional, muitas vezes fazendo parte das molculas dos receptores. So encontrados tambm como reserva nutritiva, que a clula utiliza quando h necessidade metablica. Polissacardeos de reserva. Os polissacardeos de reserva so o glicognio, nas clulas animais, e o amido, nas clulas das plantas; ambos so polmeros da D - glicose. Glicognio. O glicognio ocorre no citoplasma das clulas animais sob a forma de grnulos, com dimetro de 15 a 30 nm, geralmente dispostos em aglomerados. Os grnulos de glicognio, alm do polissacardeo, contm protenas, como as enzimas responsveis pela sntese e despolimerizao do glicognio. A D - glicose recebida em excesso pela clula adicionada, por processo enzimtico, s extremidades da molcula de glicognio. Nos momentos de necessidade, tambm por atividade enzimtica, libertam-se molculas de D - glicose, que sero utilizadas para os processos metablicos da clula. Algumas clulas, como as do fgado, lanam glicose no sangue, para manter estvel a concentrao desse acar no plasma sangneo, o que de grande importncia para as funes dos diversos tecidos do corpo.

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A molcula de glicognio tem dimenses variveis e muito ramificada em todas as direes do espao. Amido. Ao contrrio da clula animal, que armazena glicognio, a clula vegetal tem amido como reserva energtica. O amido composto de dois tipos de molculas: a amilose, um polmero linear, e a amilopectina, um polmero ramificado, ambos constitudos por unidades de glicose. Polissacardeos estruturais e informacionais. Alm dos polissacardeos de reserva nutritiva (glicognio e amido), as clulas sintetizam outros polissacardeos que fazem parte da superfcie celular, onde participam do reconhecimento entre as clulas para constituir os tecidos, da constituio dos receptores celulares e das ligaes estruturais entre o citoplasma e a matriz extracelular. Combinados com protenas, os polissacardeos estruturais fazem parte do glicoclice das clulas animais, da parede das clulas bacterianas e da parede das clulas das plantas. A maioria dos polissacardeos estruturais e informacionais so heteropolmeros. Devido sua complexidade, a estrutura de muitos deles no foi ainda elucidada. Eles constituem as glicosaminoglicanas, que se ligam a protenas para formar as proteoglicanas, e a poro glicdica das glicoprotenas, cuja estrutura geral ser explicada no Cap. 12. A Tabela 3.4 d uma viso geral da diversidade funcional e estrutural dos principais componentes macromoleculares das clulas. Os polissacardeos tm funes energticas, estruturais e informacionais (glicoclice, hormnios glicoproticos).

Esquema plano da molcula de glicognio que, na realidade, ramifica-se em todas as direes do espao, como os galhos de uma rvore. Cada crculo representa um resduo de glicose. principalmente informacional: constituem os genes e so responsveis pela expresso da informao neles contida. Excepcionalmente, o RNA pode ter atividade enzimtica. Os lipdios esto presentes em todas as membranas celulares, onde tm papel estrutural, e, como depsitos citoplasmticos, representam tambm reserva nutritiva que metabolizada para fornecer energia para a clula. Os polissacardeos em combinao com protenas tm papel estrutural. Isoladamente, so encontrados sob a forma de amido, nas clulas vegetais, e de glicognio, nas clulas animais, representando importante material energtico. Existe, nas clulas, preponderncia absoluta dos compostos de carbono, embora eles sejam extremamente raros na litosfera (crosta terrestre). Isso sugere que as primeiras clulas foram constitudas com esses compostos e que essa seleo foi transmitida s clulas seguintes,

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durante o processo evolutivo. As funes vitais dependem da presena de macromolculas polimricas de compostos de carbono. Esses polmeros so constitudos pela associao, em nmero varivel, de unidades ou monmeros, que podem ser iguais, nos homopolmeros, como o glicognio, ou diferentes, nos heteropolmeros, como os cidos nuclicos. Os biopolmeros mais importantes so as protenas, formadas por aminocidos, os polissacardeos constitudos de monossacardeos e os cidos nuclicos formados por nucleotdeos. E muito comum a associao de macromolculas para formar complexos como lipoprotenas, glicoprotenas, proteoglicanas e nucleoprotenas (cidos nuclicos e protenas). A associao entre gua e vida bem conhecida, e toda clula obviamente rica em gua. A molcula de gua um dipolo, com uma extremidade eletricamente mais negativa (mais rica em eltrons) do que a outra. Por suas propriedades, as molculas de gua influem poderosamente nos processos metablicos, tendo papel tambm na configurao espacial das macromolculas e, portanto, na atividade funcional destas.