ESPECTROSCOPIA VISVEL E ULTRAVIOLETA

Princpios bsicos
A espectrofotometria visvel e ultravioleta um dos mtodos analticos mais usados
nas determinaes analticas em diversas reas. aplicada para determinaes de compostos
orgnicos e inorgnicos, como, por exemplo, na identificao do princpio ativo de frmacos.
A espectroscopia de absoro molecular valiosa para a identificao dos grupos
funcionais na molcula. ais importante, entretanto, so as aplicaes da espectroscopia de
absoro visvel! ultravioleta para a determinao "uantitativa de compostos contendo grupos
absorventes.
A regio ultravioleta do espectro geralmente considerada na faixa de #$$ a %$$ nm,
e a regio do visvel entre %$$ a &$$ nm. As energias correspondentes a essas regies so ao
redor de '($ a )# *.cal.mol
+'
na regio ultravioleta, e )# a ,- *.cal.mol
+'
para a regio visvel.
.nergias dessa magnitude correspondem, muitas ve/es, 0 diferena entre estados eletr1nicos
de muitas molculas.
A absoro da regio visvel e ultravioleta depende, em primeiro lugar, do n2mero e
do arran3o dos eltrons nas molculas ou ons absorventes. 4omo conse"56ncia, o pico de
absoro pode ser correlacionado com o tipo de ligao "ue existe na espcie "ue est sendo
estudada.
7e um ponto de vista prtico, o aspecto mais importante do clculo "untico a
determinao de "uanta lu/ absorvida pela amostra. 8sto descrito pela lei de Beer-
Lambert, "ue d a relao entre a intensidade da lu/ incidindo na soluo 9I
0
), e a intensidade
da lu/ saindo da soluo 9I).
Log (I
0
/ I) =A=cl
A= absorbncia
: absorvidade molecular ou coeficiente de extino
c= concentrao do material absorvedor
l= espessura da amostra da amostra atravs da "ual a lu/ passa.
A absoro pelos compostos orgnicos e inorgnicos relacionada com uma
defici6ncia de eltrons na molcula. ;os inorgnicos, o comprimento de onda de absoro das
transies <d-d depende do metal envolvido, do n2mero de grupos coordenados, da
basicidade, dos tomos doadores e da geometria dos grupos coordenados.
;os compostos orgnicos, os "ue possuem dupla ligao absorvem fortemente no
ultravioleta remoto. =s compostos "ue possuem ligaes simples e duplas alternadamente,
c>amadas de ligaes con3ugadas, produ/em absoro em comprimentos de ondas maiores.
?uanto mais extenso for o sistema con3ugado, mais longos sero os comprimentos de onda
absorvidos, podendo c>egar 0 regio do visvel.
Desvios da Lei de Lambert-Beer
7esvios "umicos
Deslocamento do equilbrio@ "uando um analito dissocia, associa ou reage com um
solvente para formar um produto "ue tem um espectro de absoro diferente do analito. .x@
indicador cido+base.
Dissocia!"o de com#le$os@ excesso ou insufici6ncia de agente complexante.
7esvios instrumentais
.m solues muito concentradas, as molculas de soluto influenciam umas 0s outras
devido a suas proximidades, pois "uando ficam muito perto umas das outras, a absorvidade
pode mudar um pouco.
Espectrofotmetros
.spectrofot1metros so instrumentos capa/es de registrar dados de absorvncia ou
transmitncia em funo do comprimento de onda. .ste registro c>amado de espectro de
absoro ou de espectro de transmisso, segundo o dado registrado for de absorvncia ou
transmitncia, respectivamente. = espectro de absoro caracterstico para cada espcie
"umica, sendo possvel a identificao de uma espcie "umica por seu <espectro de
absoroA.
A caracterstica mais importante dos espectrofot1metros a seleo de radiaes
monocromticas, o "ue possibilita in2meras determinaes "uantitativas regidas pela Bei de
Ceer. ?uando a regio espectral usada a ultravioleta!visvel, so necessrios componentes
Dticos de "uart/o e detectores altamente sensveis capa/es de detectar radiaes nessa extensa
faixa espectral em "ue atua o instrumento. =s espectrofot1metros, em geral, cont6m cinco
componentes principais@ fontes de radiao, monocromador, recipientes para conter as
solues, detectores e indicadores de sinal.
Fontes de radiao
As fontes de radiao mais comuns baseiam+se na incandesc6ncia e so muito
prticas no infravermel>o e no visvel, mas devem atuar em temperaturas elevadas na faixa do
ultravioleta. As fontes de radiao so constitudas por filamentos de materiais "ue so
excitados por descargas eltricas com elevada voltagem ou a"uecimento eltrico.
Eara "ue uma fonte de radiao se3a considerada de boa "ualidade deve@
+ gerar radiao continua, ou se3a, emitir todos os comprimentos de onda, dentro da
regio espectral utili/adaF
+ ter intensidade de pot6ncia radiante suficiente para permitir a sua deteco pelo
sistema detector da m"uinaF
+ser estvel, isto , a pot6ncia radiante deve ser constante. Alm disso, deve ter vida
longa e preo baixo.
%i#os de &ontes de radia!"o
Gontes de radiao onocromador 4ompartimento
Amostra!padro
Histema detector 7ispositivo de
processamentos de dados
.s"uema dos componentes principais de um espectrofot1metro
L'm#ada de &ilamento de tungst(nio@ incandescente, produ/ emisso continua na faixa
e ,#$ a #($$nm. = invDlucro de vidro absorve toda radiao abaixo de ,#$nm, limitando o
uso da lmpada para o visvel e infravermel>o.
L'm#ada de quart)o-iodo@ incandescente, o invDlucro de "uart/o emite radiao de
#$$ a ,$$$nm. Hua vantagem "ue pode atuar na regio do ultravioleta.
L'm#ada de descarga de *idrog(nio ou de deut+rio@ a mais usada para emisso de
radiao ultravioleta. 4onsiste em um par de eletrodos fec>ados em um tubo de "uart/o ou
vidro, com 3anela de "uart/o, preenc>ido com gs >idrog6nio ou deutrio. Aplicando alta
voltagem, produ/+se uma descarga de eltrons "ue excitam outros eltrons gasosos a altos
nveis energticos. ?uando os eltrons voltam a seus estados fundamentais, emitem radiao
contnua de '&$ a ,)$nm.
L'm#ada de catodo oco@ tipo especial de fonte de lin>a. preenc>ida com um gs
nobre, a fim de manter uma descarga de arco. = ctodo tem a forma de um cilindro oco,
fec>ado em uma extremidade, revestido com o metal cu3as lin>as espectrais se dese3am obter.
= nodo um fio reto ao lado do ctodo. A energia do arco causa e3eo dos tomos
metlicos do revestimento do ctodo os "uais, excitados, emitem os seus espectros
caractersticos.
Laser@ pelo processo de emisso estimulada, os lasers produ/em uma enxurrada de
feixes muito estreitos e intensos de radiao. Iodas as ondas procedentes ao material emissor
esto em fase entre si, e, por isso, praticamente no apresenta disperso "uando se propaga.
8sso permite uma concentrao de energia num ponto muito pe"ueno, mesmo "ue
este3a numa distncia considervel.
Monocromadores
Ho dispositivos essenciais dos espectrofot1metros e tem como funo a seleo do
comprimento de onda e "ue se tem interesse para a anlise. J constitudo de uma fenda de
entrada de um elemento de disperso de radiao e de uma fenda de sada. = elemento de
disperso pode ser um prisma ou uma rede de difrao.
,) -onocromador #rism.tico@ a radiao policromtica procedente da fonte de
radiao passa pela fenda de entrada e incide sobre a face de um prisma, sofrendo desvio. =s
prismas de "uart/o so indicados para trabal>ar na regio ultravioleta, embora ten>am mais
disperso "ue o vidro. ;a regio do visvel so empregados primas de vidro. =s prismas de
"uart/o apresentam desvantagem de serem altamente refringentes e oticamente ativos.
/) -onocromador reticular@ o principal elemento de disperso dos monocromadores
reticulares a rede de difrao, "ue consiste em uma placa transparente com in2meras
ran>uras paralelas e de mesma distncia. As redes de difrao dispersam a radiao
policromtica baseadas no fen1meno da interfer6ncia, e a disperso resultante desta rede
linear. As redes de difrao possuem resoluo mel>or "ue os prismas e podem ser utili/adas
em todas as regies espectrais.
Recipientes
Ho usados como recipientes cubas ou cubetas retangulares de vidro ou "uart/o.
As cubetas de vidro so usadas "uando se trabal>a na regio do visvel. Eara a regio
do ultravioleta, devem+se usar as cubetas de "uart/o, "ue so transparentes 0 radiao
ultravioleta, pois o vidro absorve a mesma.
Kma cubeta ideal deve ser de ' cm, para simplificar os clculos da expresso da Bei de
Ceer. As cubetas tambm podem ter dimenses diferentes, e esse dado deve ser considerado
na >ora do clculo.
Eara aplicaes industriais, como, por exemplo, no controle de "ualidade de lotes de
produo, utili/a+se um sistema automati/ado em "ue as amostras circulam em srie em
cubetas ade"uadas. .sse sistema c>amado de anlise por in3eo de fluxo ou G8A 9do ingl(s
0lo1 In2ection Anal3sisL
Tipos de espectrofotmetros para reio visve! e "!travio!eta
M' cmN
4ubeta convencional
=s espectrofot1metros variam em sua complexidade e desempen>o. .xistem modelos
simples e mais sofisticados, e"uipados com softOares especiais de acordo com a necessidade
industrial.
=s componentes dos espectrofot1metros esto relacionados com a faixa do
comprimento de onda, a exatido e a preciso re"ueridos para as anlises. Eodem ser de dois
tipos@
+ espectrofot1metros mono+feixeF
+ espectrofot1metros duplo+feixe.
'L 4s#ectro&ot5metros mono-&ei$e @ a3usta+se a transmitncia em $P,
fec>ando o obturador entre a fonte de radiao e o detector. ApDs ocorre o a3uste de
transmitncia em '$$P. 4oloca+se o solvente 9brancoL no camin>o Dtico, abre+se o
obturador e varia+se a intensidade da radiao at "ue o sinal se3a de '$$P de
transmitncia. .nto substitui+ se o recipiente com solvente pelo recipiente com a
amostra e o percentual de transmitncia da mesma lido no indicador de sinal.
#L 4s#ectro&ot5metros de du#lo-&ei$e @ dois feixes de radiao so
formados no espao. Km feixe passa pela soluo de refer6ncia 9brancoL at o
transdutor e o segundo feixe, ao mesmo tempo, passa atravs da amostra at o segundo
transdutor. ;os espectrofot1metros deste tipo o a3uste do $P feito com a interrupo
de radiao nos dois feixes e o '$$P de transmitncia a3ustado com o solvente
9brancoL colocado no camin>o Dtico dos dois feixes.
Procedimentos ana!ticos em espectrofotometria visve! e "!travio!eta
An.lise qualitati6a@ pela analise da absorvncia possvel determinar "ual espcie
"umica esta presente na amostra. Iambm possvel detectar contaminaes ou processos de
decomposio de matrias+primas pela comparao dos espectros de absoro da matria e do
padro da mesma.
An.lise quantitati6a@ a condio essencial para "ual"uer determinao por
espectrofotometria no visvel e ultravioleta a observao da lei de Ceer.
=utras condies como pQ, tcnicas de extrao por solventes, a3uste do estado de
oxidao, remoo prvia dos interferentes, controle da fora i1nica do meio, e as variaes
das temperaturas tambm so observadas.
4s#ectro de #rotenas
+ possuem espectro bem caractersticoF
+so influenciadas pelo meio local@ dependem de fen1menos eltricosF
+mostra a "uantidade de >lice R e fol>a SF
+caso a protena se3a desnaturada, a espectroscopia ser diferente.
4s#ectro de .cidos nucl+icos
+tem a absorbncia menor "ue a soma das absorbncias dos nucleotdeos
individuais 9>ipocromicidadeL e ocorre devido ao empil>amento ou alin>amento dos
planos paralelos das basesF
+se ocorrer um acrscimo na absoro N >ipercromicidade
+serve para determinar se esto estruturados.
0luoresc(ncia e &os&oresc(ncia
Gluoresc6ncia a emisso de lu/ associada com eltrons "ue se movem de um
estado excitado para o estado fundamental.
Gosforesc6ncia a capacidade "ue uma espcie "umica tem de emitir lu/.
As duas so fre"5entemente usadas para se estudar processos biolDgicos e so
muito mais 2teis "ue a absorbncia, por serem consideravelmente mais sensveis,
podendo, ento, detectar concentraes bastante baixas.
#"tomao nos m$todos espectrofotom$tricos
=s principais motivos para o desenvolvimento de um sistema "ue viabili/asse vrias
determinaes simultneas com o mnimo de trabal>o >umano foram@
+ preenc>er as necessidades dos laboratDrios de analises clnicas, devido crescente
n2mero de analisesF
+ o aumento do n2mero de espcies "umicas a serem determinadas no sangue e na
urina como anlise de rotina.
= uso desses instrumentos em laboratDrios de anlises clnicas foi logo estendido a
laboratDrios de controle de "ualidade de processos industriais num variado tipo de amostras
como ar, gua solo, produtos agrcolas e farmac6uticos.
As vantagens dos mtodos automati/ados so@
+ maior velocidade no processamento das anlisesF
+ maior confiabilidade nos resultadosF
+ minimi/ao de contaminaesF
+ diminuio na gerao de resduosF
+ menor consumo de amostras e reagentes.
BIBLIOGRAFIA
Hilverstein, T. ., Cassler, U. 4., orrill, I. 4., Identificao esect!o"#t!ica
de co"ostos o!$%nicos (V ed., BI4.
Winad, aria .lisabet> do 4antoF Winad, .lsa Tegina do 4anto, &#todos
esect!osc'icos de ana(ise )*antitati+a, editora KGH.
U,IVERSI-A-E FE-ERAL -E SA,TA &ARIA
CE,TRO -E CI.,CIAS ,ATURAIS E E/ATAS
ESPECTROSCOPIA VISVEL E ULTRAVIOLETA
A(ice &ac0ado Le"os
A(ine Pai+a ,o1(e
2ecson 3esse! Se$at
Isa1e( -a!onco A(e4and!e
La*!en Pais
Let5cia Tei4ei!a ,*nes
Lo*ise Vi$no(es ,e+es
Santa &a!ia, RS, B!asi(
6778