UNESP

FACULDADE DE CINCIA E TECNOLOGIA

FCT Campus de Presidente Prudente

Unesp

Relatrio de Bioqumica
EXTRAO E CARACTERIZAO DE POLISSACARDEOS:
EXTRAO E CARACTERIZAO DO AMIDO DE BATATA
EXTRAO E CARACTERIZAO DO GLICOGNIO HEPTICO

Discentes: Gabriela Bitto de Oliveira

Jos Carlos de Oliveira Junior
Tamara Murisugi de Oliveira
Docente: Profa. Dra. Maria de Lourdes Corradi C. Da Silva
Disciplina: Bioqumica
Curso:
Engenharia Ambiental
2 ano

Presidente Prudente, 07 de abril de 2010

ndice
1. Introduo ......................................................................................................................................2
2. Objetivos .........................................................................................................................................4
3.Matrias ...........................................................................................................................................4
3.1. Extrao e caracterizao do amido da batata ................................................................................................4
3.2.Extrao e caracterizao do glicognio heptico ...........................................................................................4

4. Metodologias ..................................................................................................................................5
4.1. Extrao e caracterizao do amido da batata
4.1.1. Extrao do amido ........................................................................................................................ 5
4.1.2. Preparo de uma soluo de amido. ............................................................................................... 5
4.1.3. Caracterizao do amido por reao de fenol cido sulfrico ......................................................5
4.1.4. Caracterizao do amido por reao com iodo .............................................................................5
4.1.5. Precipitao do amido por soluo saturada de sulfato de amnio ...............................................5
4.1.6. Precipitao do amido por lcool etlico ......................................................................................5

4.2. Extrao e caracterizao do glicognio heptico

4.2.1. Extrao do glicognio heptico com KOH a quente ...................................................................6
4.2.2. Caracterizao Colorimtrica e Hidrlise Enzimtica do Glicognio ..........................................6

5. Resultados e Discusses .................................................................................................................7

5.1. Extrao e caracterizao do amido da batata
5.1.1. Extrao do amido .........................................................................................................................7
5.1.2. Preparo de uma soluo de amido .................................................................................................7
5.1.3. Caracterizao do amido por reao de fenol cido sulfrico ......................................................7
5.1.4. Caracterizao do amido por reao com iodo .............................................................................7
5.1.5. Precipitao do amido por soluo saturada de sulfato de amnio ...............................................8
5.1.6. Precipitao do amido por lcool etlico .......................................................................................8

5.2. Extrao e caracterizao do glicognio heptico

5.2.1. Extrao do glicognio heptico com KOH a quente ...................................................................8
5.2.2. Caracterizao Colorimtrica e Hidrlise Enzimtica do Glicognio ..........................................9

6. Concluso .....................................................................................................................................10
7. Bibliografia ..................................................................................................................................11

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1. INTRODUO
Os principais polissacardeos encontrados na natureza so constitudos de glicose, um
carboidrato, mostrado na Figura 1.1. A glicose,o glicognio e o amido que so polissacardeos
estruturais das plantas, de reserva animal e reserva vegetal, respectivamente, so formados
exclusivamente de glicose. A reao de fenol cido sulfrico pode ser utilizada para caracterizar a
presena de glicose e carboidratos em geral. O mecanismo da reao baseia-se na formao de
furfural e hidroximetil-furfural pela ao de um cido forte sobre uma pentose e hexose,
respectivamente

Figura 1.1 Molcula de Glicose

O amido, um composto grande e complexo, considerado a principal reserva das plantas

armazenado nas clulas do parnquima amilfero(tecido vegetal presente nos tubrculos com clulas
armazenadoras de amido) de caules (batatinha) e razes (mandioca) e de muitas algas. Dentro das
clulas encontram-se na forma de dois principais grnulos: a amilose e amilopectina,
polissacardeos que diferem na estrutura molecular. Apresentam-se como ps finos de colorao
esbranquiada, formas e estratificaes variveis. A molcula de amilose no apresenta
ramificaes e, no espao, apresenta estrutura helicoidal. J a amilopectina, possui uma estrutura
ramificada, sendo que os ligantes aparecem a cada 24-30 molculas de glicose; a ligao entre as
unidades de glicose do tipo alfa 1-4 na mesma cadeia, porm, unindo as cadeias aparece as
ligaes do tipo 1-6.
O gro de amido constitudo de hilo (ponto inicial de formao) e lamelas ou estrias
(zonas claras e escuras). Na anlise microscpica devem ser observadas caractersticas como a
forma (esfricos, ovides, polidricos, periformes, elipsides etc.), presena de lamelas, tipo de hilo
(pontuado, estrelado, linear etc.) e estado de agregao.

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Figura 1.2 Estrutura do Amido

Para caracterizar a presena de amido em algum material basta adicionar iodo, pois coramse de azul-arroxeado frente ao iodo, pelo fato deste halognio formar um complexo com os
polissacardeos, principalmente amilose. Por este motivo, utiliza-se como corante de identificao a
glicerina iodada ou o lugol.
Quando tratados por gua aquecida, entumecem. So solveis em soluo aquosa de cloral
hidratado. So refringentes e apresentam uma cruz negra de braos recurvos (cruz de Malta) quando
observados luz polarizada.
J o glicognio, um polissacardeo de reserva nas clulas animais, possui uma estrutura mais
compacta e ramificada do que o amido. Aparece em abundncia no fgado (at 10% do peso efetivo)
e tambm compe significativamente o msculo esqueltico (1 a 2%). Nos hepatcitos o glicognio
aparece como grandes agregados moleculares, grnulos ou rosetas, formados por grnulos
menores. O glicognio constitu-se de uma molcula ramificada formada por unidades de glicose
em ligao glicosdica 1-4, com ramificao onde a ligao 1-6. Vale lembrar que a quantidade
ligao 1-6 mais presente no glicognio, o que confere o alto grau de ramificao da molcula.
Esse metabolizvel por dois tipos de enzimas: a fosforilase (produzindo glucose-1-fosfato)
e as amilases (alfa, beta, amiloglucosidase, isoamilase, etc.), estas produzindo glucose ou
oligmeros. Pode ser isolado dos tecidos por meio de digesto a quente , com soluo concentrada
de lcalis fortes ou a frio com soluo de cloreto de mercrio. Em ambos os mtodos so
preservadas as ligaes de glicosdicas no redutoras alfa 1-4 e alfa 1-6.
O glicognio susceptvel hidrlise enzimtica pelas alfa amilases, como por exemplo, a
salivar. A exemplo da amilose, ele tambm se complexa com o iodo, embora o faa com menor
intensidade que os dois componentes do amido. Como a reatividade do iodo depende dos segmentos
lineares com ligaes alfa 1-4 cada passo de hlice com 6 resduos glucosil oclue um tomo de I 2 e
h formao de cor.
A intensidade da reao com iodo d-se na seguinte ordem decrescente: amilose,
amilopectina, glicognio; e as cores formadas so respectivamente: azul intenso, violceo avinhado
e castanho.
O tratamento desses polissacardeos com alfa amilases, especficas para a hidrlise das
ligaes glicosdicas alfa 1-4, suprime ento esta reatividade frente ao iodo.
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2. OBJETIVO
a) Demonstrar a extrao e caracterizao de polissacardeos de materiais biolgicos: amido de
batata e glicognio de fgado;
b) identificar o amido e o glicognio como carboidratos;
c) evidenciar o amido e o glicognio atravs de reaes de colorao e precipitao.
3. MATERIAIS
3.1. Reaes de caracterizao do amido
a) Soluo de amido recm-preparada;
b) cido sulfrico concentrado;
c) soluo de fenol 5%;
d) soluo de lugol;
e) soluo saturada de sulfato de amnio;
f) lcool etlico absoluto.
g) bquer 250mL;
h) erlernmeyer de 125mL;
i) filtro de papel.
3.2.Extrao do glicognio heptico
Alm dos materiais j citados, necessita-se de:
a) 5g de fgado fresco de boi;
b) soluo de KOH 5M;
c) etanol gelado;
d) centrfuga com frequncia de pelo menos 3000 r.p.m;
e) saliva (mistura de 2 ou 3 doadores) diluida 1:10 com soluo de NaCl 5mM.
f) reativo do iodo.

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4. METODOLOGIA
4.1. Extrao e caracterizao do amido da batata
4.1.1. Extrao do amido
Raspar um pedao de batata, transferir a raspa para um bquer de 250mL. Adicionar 100mL
de gua destilada e agitar com um basto de vidro. Filtrar e recolher o lquido num erlernmeyer de
125mL. Deixar o amido depositar no fundo do enlernmeyer durante 10 minutos e, a segui, remover
cuidadosamente o lquido sobrenadante para descart-lo. O que sobra no erlernmeyer um depsito
de amido.
4.1.2. Preparo de uma soluo de amido
Manter aproximadamente 150mL de gua fervendo em um bquer de 250mL. Acrescentar
aproximadamente 50mL de gua fria ao depsito de gros de amido obtido anteriormente e
adicionar esta suspenso de amido lentamente e com constante agitao, gua fervente. Continuar
o aquecimento at que se forme uma soluo leitosa e azulada.
4.1.3. Caracterizao do amido por reao de fenol cido sulfrico
Em um tubo de ensaio pipetar 0,5 ml de soluo de amido (diluda previamente de 1:10), ou
seja, adicionar 4,5ml de gua destilada. Desta soluo coletar 0,5ml e colocar num segundo tubo,
juntar a este 0,5ml de soluo de fenol 5% e adicionar 2,5ml de cido sulfrico concentrado, nun
nico jato. Observar a cor laranja caracterstica da reao.
4.1.4. Caracterizao do amido por reao com iodo
Em um tubo de ensaio pipetar 2ml de soluo de amido e adicionar 2 gotas de lugol. Notar o
aparecimento de cor azul intensa. Aquecer. Observar. Resfriar o tubo em gua corrente. Observar.
4.1.5. Precipitao do amido por soluo saturada de sulfato de amnio
A 5ml de soluo de amido adicionar 5ml de soluo saturada de sulfato de amnio. Agitar
fortemente e deixar em repouso por 10minutos. Filtrar. Pesquisar, separadamente, no filtrado e no
precipitado, a presena de amido pelo teste do iodo, adicionando 2 gotas de lugol ao precipitado e
tambm no sobrenadante.
4.1.6. Precipitao do amido por lcool etlico
A 2ml de soluo de amido adicionar 5ml de lcool etlico. Agitar. Filtrar e pesquisar amido
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como na experiencia anterior, tanto no filtrado, como no precipitado.

4.2. Extrao e caracterizao do glicognio heptico
4.2.1. Extrao do glicognio heptico com KOH a quente
Colocar 5g de fgado em um tubo de ensaio com 15mL de KOH 5M. Aquecer em banho
maria, agitando at a dissoluo do tecido, aproximadamente 15 minutos. Ao esfriar a mistura,
deve-se despej-la lentamente em um erlernmeyer com 40 mL de etanol gelado.
4.2.2. Caracterizao Colorimtrica e Hidrlise Enzimtica do Glicognio
Inicialmente so numerados seis tubos de ensaio. No tubo 1 h somente 0,4mL de gua
destilada; o tubo 2 contm 0,3mL de gua destilada e 0,1mL de saliva diluda 1:10 com NaCl 5mM;
o tubo 3 apresenta 0,3mL de gua destilada e 0,1mg/mL de glicognio enquanto que o tubo 4
contm 0,1mL daquela e 0,3mg/mL deste. J no tubo 5 foi adicionado 0,2mL de gua destilada,
0,1mg/mL de glicognio e 0,1mL de saliva diluda 1:10 com NaCl 5mM. Por fim, no tubo 6,
encontra-se apenas 0,3mg/mL de glicognio e 0,1mL da saliva. Os tubos de ensaio, ento, ficam
incubados temperatura ambiente por aproximadamente 10minutos, com agitao dos tubos 5 e 6
ocasionalmente. E, aps o tempo de incubao, adicionado 1,6mL de reativo de iodo a comear
pelos tubos 5 e 6 seguido da agitao dos tubos.

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5. RESULTADOS E DISCUSSO
5.1. Extrao e caracterizao do amido da batata
5.1.1. Extrao do amido
Ao raspar a batata com uma faca h o rompimento das clulas que a compem, dentro
dessas clulas h presena de amiloplastos, onde esto contidos os grnulos de amido (amilopectina e amilose). Com o rompimento das clulas os amiloplastos so liberados para o meio, que
no caso do experimento composto por 100ml de gua, solubilizando-se. A agitao com o basto
de vidro feita para influenciar ainda mais a liberao dos amiloplastos das clulas da batata. Filtra
a soluo obtida e espera o amido precipitar para retirar o sobrenadante e obter uma maior
concentrao de amido na soluo.
5.1.2. Preparo de uma soluo de amido
No preparo da soluo de amido adicionou-se agua fria ao depsito de amido obtido na
reao anterior para que depois essa soluo resultante pudesse ser adicionada gua quente
fazendo com que os amiloplastos se rompessem, liberando a amilose e a amino-pectina para o meio.
A amostra obtida uma soluo esbranquiada onde h a presena dos amidos citados
anteriormente permite a realizao de reaes de caracterizao desse polissacardio.
5.1.3. Caracterizao do amido por reao de fenol cido sulfrico
Aps misturar as solues de amido diluda, a soluo de fenol 5% e do cido sulfrico,
forma-se no tubo uma soluo de cor laranja, caracterizando assim a presena de amido na amostra.
Isso ocorre pelo fato de um cido forte, no caso o cido sulfrico, agir sobre a hexose, amido,
hidrolisando-o e liberando molculas de glucose que forma um composto chamado hidroximetilfurfural. Esse ultimo composto reage com o fenol formando o produto de colorao laranja citado
acima.
5.1.4. Caracterizao do amido por reao com iodo
Aps a adio de lugol na soluo de amido bem visvel a colorao azul-escuro que se
forma no tubo, porm quando este aquecido essa soluo passa a ter uma colorao amarelada
translucida. A soluo de amido fica azul-escura na presena de lugol, devido aquela formar um
complexo colorido com o iodo presente neste. Sendo que a amilose d origem a uma colorao
negro-azulada, enquanto a amilopectina d origem a uma colorao vermelho-violcea, o que no
nos deixa concluir que a amilose encontrava-se em maior quantidade na soluo do que a
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amilopectina devido ao predomnio da colorao azul-escuro. J que aquela, devido as suas cadeias
lineares apresenta uma conformao helicoidal capaz de ocluir o iodo, o que no ocorre com a
amilopectina onde a formao de hlice fica em parte dificultada pelos pontos de ramificao da
molcula.
Ao aquecer a soluo de amido e lugol esse complexo se dissocia, formando uma soluo
amarelo-laranjada devido a presena de iodo dissociado que proporciona essa cor caracterstica.
5.1.5. Precipitao do amido por soluo saturada de sulfato de amnio
Depois de 10 minutos de repouso, observa-se a formao de um precipitado no fundo do
tubo, sendo este de colorao branca e aspecto viscoso. Ele ocorre devido a adio de sulfato de
amnio na soluo de amido. Pois assim como as protenas, o amido se solubiliza na gua devido a
presena de pontes de hidrognio, o sulfato de amnio, sendo um sal muito solvel, aumenta a fora
inica desidratando o amido sendo que este precipita.
Porm, aps filtrar o precipitado e adicionar o lugol neste e na soluo filtrada observa-se
que a cor do tubo que a possui azul translucida, mostrando que h a possibilidade de nem todo o
amido ter se precipitado, levando-se em considerao a reao de caracterizao com iodo, citada
acima. O precipitado, como esperado, apresenta um colorao azul-preta, por ser composto
essencialmente de amido.
5.1.6. Precipitao do amido por lcool etlico
Neste experimento tambm forma-se um precipitado com as mesmas caractersticas do
precipitado descrito acima. S que neste caso, a precipitao ocorre devido a adio de lcool
etlico na soluo de amido. O etanol um solvente orgnico, possui grande solubilidade na gua,
assim, quando adicionado soluo de amido ele se solubiliza rompendo as interaes amido-gua
fazendo com que este se precipite. Aps filtrar-se a amostra, adiciona-se lugol tanto ao precipitado
quanto a soluo filtrada. Observa-se nesse ponto, uma diferena entre a soluo filtrada desse
experimento com a do anterior, a colorao do tubo fica amarelo-laranjado devido ao iodo do lugol,
pressupondo-se assim, que no h presena de amido nela, o que no ocorreu no filtrado anterior. O
precipitado, como esperado, adquiri cor azul-preta, por ser formado essencialmente de amido.
5.2. Extrao e caracterizao do glicognio heptico
5.2.1. Extrao do Glicognio Heptico
Aps a dissoluo do tecido animal e com a adio de etanol gelado evitando assim, sua
vaporizao, j que tal composto voltil temperatura ambiente ocorre a precipitao do tecido
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na forma de flocos, isto porque o lcool etlico forma pontes de hidrognio com a gua, impedindo
a ligao desta com o glicognio, o qual precipita-se.
Com a centrifugao dos seis tubos de ensaio, obtm-se um lquido sobrenadante e uma
pequena poro marrom escuro de precipitado. Aps a retirada de tal lquido e a adio de gua
destilada (no total, 3mL), foi possvel notar a formao de espuma. A formao de espuma ocorre
devido presena de KOH, lipdios e protenas de membrana. Finalmente, depois de centrifugar e,
em seguida, dissolver novamente (10mL de gua destilada) o precipitado, obtm-se uma soluo
opalescente e que contm glicognio.
5.2.2. Caracterizao Colorimtrica e Hidrlise Enzimtica do Glicognio
Os tubos 1 e 2, ambos contendo gua destilada, e a saliva no segundo, adquirem colorao
amarelada devido presena do iodo. J os tubos 3 e 4, contendo apenas gua destilada e
glicognio, apresentam colorao levemente castanho, sendo que esta d-se mais intensamente no
tubo 4, visto que h maior concentrao de glicognio, comprovando assim que esta tcnica
colorimtrica pode ser aplicada quantitativamente, isto , existe correspondncia linear entre a
concentrao de glicognio e a densidade tica.
Os tubos 5 e 6 so os nicos que contm saliva (amilase salivar) e glicognio
simultaneamente. Alm disso, h gua no tubo 5, da a hidrlise do glicognio neste ser um pouco
maior em relao ao tubo 6, pelo qual iniciou-se a adio de reativo de iodo.
Comparando os tubos 3 e 5, os quais contm a mesma quantidade de glicognio
(0,1mg/mL), pode-se notar que o primeiro apresenta colorao castanho mais intensa, devido
ausncia da amilase salivar, a qual auxilia o processo de degradao do glicognio.
A partir da anlise dos tubos 4 e 6 ambos contendo 0,3mg/mL de glicognio verifica-se
diferenas na colorao de suas amostras. No tubo 4, ocorre a hidrlise total do glicognio,
enquanto que no tubo 6, sem gua destilada, h hidrlise parcial do glicognio pela ao da amilase
salivar.
importante destacar que a diluio da saliva apenas com cloreto de sdio justifica-se por
ser o nion Cl um excelente ativador da amilase salivar. A presena de tampo dispensvel, pois a
amilase salivar apresenta ampla faixa de pH timo (de 5 at 8) e a incluso do habitual tampo
fosfato pH 7,0 geraria uma incompatibilidade com a presena de cor (CaCl2).

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6.CONCLUSO
Durante os experimentos trabalhou-se com dois tipos diferentes de polissacardio, um de
origem vegetal, o amido, e outro de origem animal, o glicognio. Na extrao destes das suas
respectivas clulas, pode-se notar uma grande diferena: a complexidade para extrair glicognio das
clulas do fgado comparado extrao do amido das clulas da batata. Isso ocorre devido a
diferena de estrutura molecular entres esses carboidratos, sendo aquele altamente ramificado.
Na execuo das reaes de colorao para a caracterizao dos carboidratos percebe-se que
os compostos contendo iodo, so convenientes identificao, tanto a do amido, composto por
amilose e amilopectina, quanto a do glicognio.
Na precipitao dos dois diferentes carboidratos percebe-se uma maior complexidade para
trabalhar com o polissacardeo glicognio. Sendo necessrio leva-lo a uma centrifugadora para que
se pudesse precipita-lo com o auxlio de um mtodo fsico, o mesmo no ocorre com o amido que
precipitado apenas com a adio de determinadas substncia, destacando-se o lcool etlico,
utilizado na precipitao dos dois. Essa diferena ocorre pelo mesmo motivo da complexidade de
extrao do glicognio comparado com o amido, j que aquele contem uma estrutura molecular
muito mais complexa que este.

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7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
LEHNINGER, ALBERT LESTER. Princpios de bioqumica. 4 edio. So Paulo: SARVIER,
2006.
MARZZOCO, ANITA & TORRES, BAYARDO B. Bioqumica Bsica. 3 edio. Rio de Janeiro:
GUANABARA KOOGAN, 2007.
Teste do amido. <www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticasch/testeamido.html>. Acessado
em: 05 de abril de 2010.

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