MAPA/SDA/CGAL

Cdigo: MET LACV/10/03/01

Laboratrio Nacional Agropecurio - LANAGRO/RS
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Laboratrio de Anlises para Classificao Vegetal
Emisso: 30/05/2014
Mtodo de Ensaio MET
DETERMINAO DE PROTEINA BRUTA Mtodo Kjeldahl Modificado
1 Escopo

Determina o teor de protena em farinhas, gros e cereais coadjuvantes, cujo parmetro est
relacionado qualidade do produto segundo a Instruo Normativa n 8, de 02/06/2005 que
aprova o Regulamento Tcnico de Identidade e Qualidade da Farinha de Trigo.

2 Fundamentos

Mtodo Kjeldahl modificado onde o CuSO4 usado como catalisador. O mtodo determina o
nitrognio total em material livre de nitrato em farinhas, gros e cereais coadjuvantes. A
amostra digerida em H2SO4 e o N convertido em NH3, a qual destilada e titulada.

3 Reagentes, padres e materiais

H2SO4, cido Sulfrico concentrado (95-98%);

Padro H2SO4, 0,1 N;
NaOH, Hidrxido de Sdio 50%;
NaOH, Hidrxido de Sdio 0,1N;
Pastilha cataltica (K2SO4 + CuSO4 + 5H2O) ou Mistura Cataltica;
Papel indicador
Soluo de Vermelho de Metila 0,2%;
Papel manteiga livre de nitrognio;
Frascos Kjeldahl com capacidade adequada;
Frasco Erlenmeyer, capacidade 300 mL;
Barra magntica;
Buretas ou Dispensador de 50 mL.

4 Equipamentos

Balana analtica;
Bloco Digestor;
Destilador de Nitrognio;
Agitador magntico.

5 Precaues analticas

Controle de qualidade do procedimento:

- a cada uso verificar o estado de calibrao da balana analtica;
- a cada uso verificar a temperatura do bloco digestor;
- o item de ensaio deve ser ensaiado em duplicata.
- controlar a digesto com papel indicador

As condies ambientais devem atender o POP LACV/03.

A rea de digesto e destilao deve estar provida de adequada ventilao e exausto.
A alquota de trabalho do item de ensaio deve ser mantida em frasco de vidro,
hermeticamente fechado com o nmero de protocolo correspondente ao registro do produto
at o trmino dos ensaios.
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DETERMINAO DE PROTEINA BRUTA Mtodo Kjeldahl Modificado
Usar luvas descartveis, culos de segurana e jaleco.

O sulfato de cobre recomendado como catalizador devido ao menor grau de

insalubridade com relao ao mercrio e ao selnio ou seus compostos.
As amostras desclassificadas e com anlise complementar devem ser tratadas conforme a
IT LACV/08.

6 Procedimentos

Pesar em duplicata 0,5 g da amostra em tubo de digesto (a amostra pode ser pesada em
papel livre de N para prevenir a aderncia nas paredes do tubo).
Adicionar 1 pastilha catalticas ou 3,5 g da mistura cataltica e 10 mL de cido sulfrico
concentrado.
Aquecer os tubos no bloco digestor, gradativamente, at 100C por 30.
Elevar a temperatura a 240 C por 30 minutos, aps elevar a temperatura at 380C
Em todas as etapas de elevao da temperatura observar se no haver transbordamento
da amostra caso contrrio diminuir a temperatura e reiniciar a elevao da temperatura,
gradativamente, at que a amostra se estabilize e que a fumaa branca e clara aparea no
bulbo do balo.
Proceder digesto por 90 minutos.
Controlar a completa digesto com papel indicador.
Adicionar 2 3 gotas de silicone para reduzir a formao de espuma, se necessrio.
Aps a digesto resfriar os tubos, aproximadamente, 15 min, adicionando pequena poro
de gua destilada para no cristalizar.
Adicionar lentamente 25 mL da soluo de NaOH 50% e 25 mL de gua deionizada,
conectar ao condensador.
Em frasco de 300 mL adicionar 25 mL de H2SO4 0,1N, adicionar 50 mL de gua destilada
e imergir a ponta do tubo do condensador na soluo receptora.
Ferver at a completa destilao da amnia, recolhendo no mnimo 75 mL do destilado.
Titular o destilado com soluo de NaOH 0,1N usando vermelho de metila como indicador
(VL).
Correr e titular uma prova em branco (VB).

7 Resultados

- Para o clculo do resultado se considera a mdia das duplicatas.

% Protena = (VB - VL) x N x 1,4007 x f

PA (g)

Deve ser expresso em base seca: % Protena em base seca = % Protena x 100
100 Umidade%
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DETERMINAO DE PROTEINA BRUTA Mtodo Kjeldahl Modificado

Onde:
VB = mL gastos de NaOH 0,1N na titulao da prova branco;
VL = mL gastos de NaOH 0,1N na titulao da amostra;
N = normalidade da soluo de NaOH usado na titulao;
1,4007= peso molecular do Nitrognio em miligramas;
F = 5,70 = fator de converso de nitrognio para farinha de trigo;
PA = peso da amostra.

Exemplos de fatores empricos de converso de nitrognio:

Alimento Fator Alimento Fator

Emprico Emprico

Farinha de centeio 5,83 Farinha de trigo 5,70

Farinha de Soja 6,25 Amendoim 5,46

Aveia 5,83 Castanha do Par 5,46

Cevada 5,83 Arroz 5,95

Coco 5,30 Gelatina 5,55

Outros alimentos 6,25

Os dados brutos dos ensaios devem ser registrados no Anexo - Ficha de Anlise do POP
LACV/02 Informe de Resultados especfica matriz.
Os resultados dos ensaios devem ser emitidos no Anexo - Laudo de Anlise do POP LACV/02
Informe de Resultados especfico matriz.

8 Arquivamento dos registros

As Fichas de Anlises de Classificao devem ser arquivadas na pasta FICHAS/LACV.

Os Laudos de Classificao devem ser arquivados na pasta LAUDOS/LACV.

9 Referncias

BRASIL. MAPA - Instruo Normativa n 8, de 02/06/2005 que aprova o Regulamento Tcnico

de Identidade e Qualidade da Farinha de Trigo.
BRASIL. MAPA - Instruo Normativa n 31 de 18/10/2005; AACC Method 46-13.
AACC 46-11 A, Crude Protein- Improved Kjeldahl Method, Copper Catalyst Modification.
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DETERMINAO DE PROTEINA BRUTA Mtodo Kjeldahl Modificado
AOAC Internacional. 1996. Official Methods of analysis of AOAC, 16th ed. 2nd rev.Method
984.13.

10 Anexos

No aplicvel.

11 Alteraes

Alterado o item 7 Resultados: incluso do clculo em base seca, registro de dados e emisso
de resultados adequada ao escopo.

12 Responsabilidades

O Responsvel Tcnico responsvel por assegurar que de todo o pessoal que utilizar o MET
tenha sido treinado e habilitado para sua execuo e que esteja sendo corretamente seguido.

Elaborao/Reviso: Aprovao: Verificao:

Marta Severo - LACV
Letcia Fonseca - LACV Joo Mathias Becker - LACV Juliana Kich - UGQ
Neusa Luiza Perizzollo - LACV
Data: 16/05/2014 Data: 30/05/2014 Data: 30/05/2014