D.

ENZIMAS COMO ALVO TERAPÊUTICO

D.2.3. INIBIDORES DE ENZIMAS COM COFACTORES

D.2.3.1 NAD COMO CO-FACTOR:INIBIDORES DA 3-

HIDRÓXIMETILGLUTARILCoA REDUTASE

Ana Paula Francisco QFI 2014-2015 1

Sumário:
D.2.3. Inibidores de enzimas com cofatores
D.2.3.1. NAD como cofator: inibidores da 3-hidróxi-3-metilglutaril Co-
enzima A (HMG-CoA)
D.2.3.1.1. Aplicação terapêutica
D.2.3.1.2. Características estruturais e funcionais da
HMG-CoA: sitio catalítico e catálise enzimática
D.2.3.1.3. Inibidores reversíveis: mevastatina e
lovastatina
D.2.3.1.4. Otimização de protótipos

2
 INIBIDORES REVERSÍVEIS COMO AGENTES
FARMACODINÂMICOS
 D.2.3.1.1 Aplicação terapêutica

• As doenças coronárias são a principal causa de

morte nos países industrializados

• O colesterol é o principal componente dos ateromas.

• 2/3 do colesterol circulante é biossíntetizado no

fígado

3
 D.2.3.1.1 Aplicação terapêutica

colesterol

O colesterol pode ser biossintetizado no fígado e

ingerido através da dieta. É essencial para a estrutura e
função das membranas celulares e percursor dos
esteróides.

4
 D.2.3.1.1 A biossíntese do colesterol

5
 D.2.3.1.1 O NAD como co-factor

Dinucleótido
Adenina

Fosfato
Nicotinamida

6
 D.2.3.1.1 O NAD como co-factor

7
 D.2.3.1.1 O NAD como co-factor

8
 D.2.3.1.2 Mecanismo enzimático da redução do
hidroximetilglutaril-CoA a ácido mevalónico

Esquema do mecanismo molecular e principais interacções do

substrato (HMGCoA), mevaldeído e do ácido mevalónico com
aminoácidos do sítio catalítico da enzima

Lys691
Asp767

Glu559

His866

9
K-Lys Esquema do centro activo da HMGR humana com o substrato
S-Ser
L-Leu
D-Asp
E-Glu Grupo Resíduo Tipo de acção
funcion que interacção
N- Asx al realiza a
interacç
ão
1-C=O Glu559, Ligação de Polarização do
Lys691 H carbonilo

3-OH Asp 690, Ligação de

Arg 590 H

3-CH3 Leu 853 van der

Waals

5-C-OH Lys 735 Ligação Região terminal

iónica COO- cuja carga é
estabilizada por
ambos os resíduos
5-C=O Ser684 Ligação de
H

-SH His866 Ligação de Posição adequada

(CoA) H próxima do sítio
para doar H ao
grupo tiol do CoA

Istvan E S et al. EMBO J. 2000;19:819-830

10
 D.2.3.1.2 Interacções do substrato com os resíduos de
aminoácido do sítio catalítico da enzima

A interação do HMG com a enzima é sobretudo polar e iónica

11
 D.2.3.1.3. Inibidores reversíveis: mevastatina e lovastatina
 Mevastatina: metabolito isolado dos fungos Penicillium
citrinum e de P. brevicompactum (Compactina)

 A Lovastatina foi isolada de Aspergillus terreus pela Merck

(Mevinolina)

 Mevastatina e Mevinolina reduzem os níveis de colesterol

por inibição competitiva da HMG-CoA redutase.

HO O
HO O
O
O O
O
O
O H
H Me Me
Me Me

Me
Ki = 1.4 nM Ki = 6.4 nM
Mevastatina Mevinolina
12
 D.2.3.1.3. Inibidores reversíveis: mevastatina e lovastatina

 Lovastatina complexada com HMG-CoA reductase: base

para a compreensão das relações estrutura-actividade

Bolsa
lipofílica
Domínio
HMG

1T02

13
 D.2.3.1.3. Inibidores reversíveis: mevastatina e lovastatina

 A lovastatina inibe a HMG-CoA redutase com a lactona

hidrolisada: mimetiza o intermédio do substrato natural.
Domínio de ligação do HMG

HO HO
CO2H CO2H
OH OH
O
H H
SCoA
O
H
Me Me

Bolsa lipofílica

14
 D.2.3.1.3. Inibidores reversíveis: mevastatina e lovastatina
Mevastatina e lovastatina: A hidrólise destes pró-fármacos produz
um 3,5-hidróxi-ácido que mimetiza o intermédio da síntese do
HMG-CoA.

15
 D.2.3.1.4 Optimização dos protótipos

HO HO O HO O
CO2Na
OH O O
O O O
R
O O O
H Me Me H R H
Me Me Me Me Me

HO Me

pravastatina simvastatina Di-hidromevastatina

1ª geração 2ª geração
Hidrofilica Lipofilica
Não é pró-fármaco Pró-fármaco
Derivado semi sintético

16
 D.2.3.1.4 Optimização dos protótipos

Novas estatinas

A unidade de decalina pode ser substituída por

grupos bis-arilo, que podem incluir heterociclos.

HO O HO HO
CO2Na CO2Na
O OH OH
O
F F
O Me Me
H
Me Me N
Me Me
MeO N
Me
N
Me Me O H

Cerivastatina Atorvastatina

17
  D.2.3.1.4 Optimização dos protótipos

Novas estatinas

Rosuvastatina- 2004
1º derivado totalmente sintético reduz de forma rápida os
níveis de colesterol das LDL

1T02

18
 D.2.3.1.4 Optimização dos protótipos

As estatinas exploram a flexibilidade da HMG-CoA redutase para

criar uma bolsa hidrofóbica perto do centro activo e assim
aumentar a capacidade de interacção com a enzima

Interacções polares e
iónicas com o centro activo

19
 D.2.3.1.4 Optimização dos protótipos

Esquema das interações da rosuvastatina com o centro activo

da enzima

Interacções polares entre o resíduo HMG e os resíduos localizados no loop cis,

Ser684, Asp690, Lys691 e lys692. O carboxilato forma uma ligação iónica com Lys735. O
5-OH ligações de H com Glu559 e Asp767. Parte lipofilica estabelece interacções
hidrofobicas com Leu562, Val683, Leu553, Ala856 e Leu857 . ligação adicional entre o F
e o grupo guanidina da Arg590. Para além disso forma ainda ligações de H extra
entre o grupo sulfona e a Ser563 e Arg568
20
 D.2.3.1.4 Optimização dos protótipos

K-Lys
S-Ser
L-Leu
D-Asp
E-Glu
H-His
V-Val
R-Arg

21
 D.2.3.1.4 Optimização dos protótipos

Valores de IC50 de algumas estatinas e Km do HMG CoA

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 D.2.3.1.4 Relações estrutura-actividade

A lactona ou o seu equivalente acíclico são essenciais (ácido 3,5-di-

hidroxivalérico ou b,d-di-hidróxi-heptanóico, com substituintes na posição
7)

O grupo CO2H deverá estar aniónico

Os grupos OH deverão estar não-substituídos

O éster butírico acomoda mais um grupo metilo

A decalina permite variações estruturais simples e a sua substituição por

anéis heterociclicos substituídos como indol (fluvastatina), piridina
(cerivastatina), pirrol (Atorvastatina) ou pirimidina (rosuvastatina),
conduz a derivados activos

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