AVA 3 – Doenças Infecciosas em Medicina Veterinária

Camila Anunciação Almeida

Relatório sobre métodos de diagnósticos imunológicos

O teste ELISA baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada

com complexos imunes. O teste detecta, identifica e quantifica o antígeno ou anticorpo
utilizando um dos dois conjugados com enzimas. O produto final corado surge por ação
da enzima que converte um substrato incolor em um produto colorido (ou o substrato
alterado pela enzima induz mudança de cor de uma substância indicadora).
Existem quatro tipos de teste ELISA: ELISA direto, indireto, sanduiche e de
competição.
O ELISA direto é quando o alvo é um antígeno ligado à placa, e um anticorpo
primário conjugado a um emissor de cor é colocado diretamente ao alvo, e é um tipo
pouco usado. Já o ELISA indireto é mais usado e é mais usado e é bem parecido com
o direto. Tem também como alvo um antígeno e depois um anticorpo secundário é ligado
novamente (um anti-anticorpo), e então detecta-se esse anticorpo secundário.
Há também o ELISA de competição, esse método pode detectar um antígeno
com baixo peso molecular ou com poucos epítopos de ligação. Utiliza um antígeno
marcado para competir com o antígeno alvo, então, o antígeno marcado se liga menos
quanto tem menos antígenos alvos na amostra. O ELISA sanduiche é o mais comum,
primeiramente, anticorpos de captura são ligados ao fundo da placa, para evitar que
nenhum outro anticorpo interfira na reação com os antígenos alvo que possivelmente
estarão presentes na amostra. E então, são adicionados anticorpos conjugados a
enzima para que façam o reconhecimento do antígeno.
A quantidade de antígeno ou anticorpo no produto final corado é obtido através de leitura
em fotocolorímetro.
Uma diluição seriada é uma técnica na qual se realizam várias diluições progressivas.
Inicia com a solução mais concentrada chegando a soluções menos concentradas,
amplificando o fator de diluição rapidamente. A fonte do material de diluição(soluto) para
cada etapa é proveniente do material diluído da etapa anterior. Em uma diluição em
série, o fator de diluição total é o produto dos fatores de diluição em cada etapa. Assim,
se você tiver uma diluição ½, seu fator de diluição é 2, todas as diluições seguintes
serão multiplicadas por 2.
Para se ter 1 ml de solução, você terá a adição de 0,1 ml do concentrado mais 0,9 ml
do diluente.
Exercícios
Caso 1:
Os cães quando nascem são vermífugos antes de iniciar o ciclo de vacinação. Ao
final do período vacinal esperamos encontrar anticorpos de memória (IgG)nas
seguintes proporções:
• 1:256 para cinomose
• 1:256 para parvovirose
• 1:160 para Hepatite Infecciosa Canina
Ao enviar o material(sangue)para o laboratório para através da técnica ELISA
avaliar a titulação dos anticorpos contra as principais doenças em cães nessa
idade chegou até você o seguinte resultado:
• 1:80 para cinomose
• 1:160 para parvovirose
• 1:160 para Hepatite Infecciosa Canina
O que você deve fazer nessa situação?
´Nesse caso a uma necessidade de revacinação dos animais.

Caso 2
O resultado do teste foi positivo. Após o diagnóstico, é necessário realizar o
procedimento de controle da doença. E posteriormente iniciar a vacinação do animal.