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Artigo

2-Metiloxolano como um solvente de base biológica para

extração verde de aromas de lúpulo (Humulus lupulusEU.)

Vicente Rapinel1,2, AziadéChemat1, Cyrille Santerre3, Justine Bela3, Farnaz Hanaei3, Nadine
Vallet3 , Laurence Jaques2e Anne-Sylvie Fabiano-Tixier1,*
1 Green Extraction Team, Avignon University, INRAE, UMR408, F-84000 Avignon, França;
vincent.rapinel@minakem.com (VR); aziade.chemat@alumni.univ-avignon.fr (AC)
2 Pennakem Europa, 224 avenue de la Dordogne, F-59944 Dunkerque, França; laurence.jacques@minakem.com
3 Institut Supérieur International du Parfum, de la Cosmétique et de l'Aromatique alimentaire (ISIPCA), 34-36 rue
du parc de Clagny, F-78000 Versalhes, França; csan terre@isipca.fr (CS); jbelay@isipca.fr (JB); fhanaei@isipca.fr
(FH); nvallet@isipca.fr (NV)
* Correspondência: anne-sylvie.fabiano@univ-avignon.fr

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Recebido: 22 de janeiro de 2020; Aceito: 6 de abril de 2020; Publicado: 9 de abril de 2020 ---

Abstrato:O potencial do uso do solvente de base biológica 2-metiloxolano, também conhecido como 2-
metiltetrahidrofurano ou 2-MeTHF, como alternativa aos solventes de petróleo, como o hexano, foi
investigado para a extração de compostos voláteis de cones de lúpulo.Humulus lupulusEU.). Extrações em
escala de laboratório foram acopladas à previsão in silico da solubilidade de solutos para avaliar o potencial
técnico deste solvente de base biológica. A abordagem preditiva foi realizada usando o software de simulação
COSMO-RS (modelo de triagem do tipo condutor para solventes reais) e mostrou que o 2-metiloxolano é tão
bom ou melhor que o hexano para solubilizar a maioria dos aromas dos cones de lúpulo. Os resultados
experimentais indicaram que o maior rendimento de aroma foi obtido com 2-metiloxolano com 20,2%
enquanton-hexano foi capaz de extrair apenas 17,9%. A caracterização dos aromas extraídos pelos dois
solventes mostrou uma composição semelhante, onde a lupulona foi o principal componente seguido da
humulona. Não foi observada seletividade dos solventes para nenhum dos principais analitos. Por fim, foi
realizada uma análise sensorial dos extratos, mostrando que ambos os concretos com 2-metiloxolano e
hexano apresentam perfis olfativos semelhantes. Os resultados indicam que o 2-metiloxolano pode ser um
promissor solvente de extração de base biológica para substituição de hexano.

Palavras-chave:2-metiloxolano; hexano; solvente verde; Extração; aromas

1. Introdução

Na extração sólido-líquido, é comumente admitido que a eficiência da extração depende fortemente do

solvente, como descrito por Choi e Verpoorte [1]: “O que você vê é o que você extrai”. Os solventes
convencionais, geralmente utilizados na extração de plantas, têm a importante vantagem de apresentar boa
seletividade, ponto de ebulição relativamente baixo e baixa entalpia de vaporização, o que facilita sua remoção
após a extração e limita o consumo de energia. Em particular, o hexano é considerado o melhor solvente para
a extração de moléculas lipofílicas, como lipídios, aromas e cores, como carotenóides.2] e o motivo pelo qual é
amplamente utilizado na indústria extrativa. No entanto, além de suas vantagens óbvias, esses solventes
também apresentam aspectos negativos. Na maioria dos casos, são obtidos de recursos não renováveis,
muitas vezes de origem petrolífera, emissores de VOC (composto orgânico volátil) e prejudiciais à saúde
humana e ao meio ambiente. Em particular,n-hexano, o principal isômero do hexano, é conhecido por ser
neurotóxico e perigoso para o meio ambiente.3,4].
Portanto, a seleção do solvente é crucial na demarche da extração verde, portanto, as seguintes diretrizes
de boas práticas [5] deve ser respeitado o máximo possível para garantir a durabilidade do processo global:

Moléculas2020,25, 1727; doi:10.3390/moléculas25071727 www.mdpi.com/journal/molecules

Moléculas2020,25, 1727 2 de 12

• Uso de um solvente de origem natural, renovável ou de origem agro

• Evite o uso de solventes que possam afetar a segurança e a saúde dos operadores de produção e
consumidores. Não deve ser um CMR (carcinogênico, mutagênico, tóxico para a reprodução) ou tóxico (ou
apresentar baixa toxicidade), não deve induzir efeito alergênico e não deve pertencer a desreguladores
endócrinos.
• Uso de solvente compatível com o existente em instalações industriais
• Prefira um solvente com alta taxa de reciclabilidade
• Alta biodegradabilidade e sem bioacumulação, para limitar o impacto global do processo no meio ambiente
• Uso de solvente que limita o consumo de energia e custo do processo global (solvente com baixo ponto de
ebulição, baixa capacidade de calor específico e baixa entalpia de vaporização)
• Garantir uma recuperação máxima de solvente no final do processo usando várias técnicas disponíveis

No final dos anos 2000, um novo solvente chamado 2-metiloxolano (CAS 96-47-9), também conhecido
como 2-metiltetrahidrofurano ou 2-MeTHF, apareceu no mercado de solventes. Originalmente usado na
indústria química fina [6,7] como solvente de reação em substituição ao THF (tetrahidrofurano), estudos
recentes comprovaram que o 2-metiloxolano é um solvente “verde” muito promissor para a extração de
componentes bioativos de fontes naturais. É 100% produzido a partir de biomassa renovável por hidrogenação
de frações de carboidratos, obtido por hidrólise ácida de hemicelulose de diversas matérias-primas.6,8,9]. É
biodegradável, tem uma pegada ambiental promissora, com uma boa avaliação toxicológica preliminar [10], e
é fácil de reciclar. No entanto, a substituição de solventes é um processo muito longo que exige muito esforço e
pesquisa para convencer a indústria. Desde 2012, vários estudos foram realizados para avaliar o potencial do 2-
metiloxolano como alternativa ao solvente de petróleo para extração de óleos.11–14], cores [15,16] e aromas [
17,18].
Neste contexto, este estudo tem como objetivo avaliar sob o conceito de química verde o desempenho do 2-
metiloxolano como solvente de substituição de hexano para extração de aromas alimentares de cones de lúpulo. O
lúpulo foi selecionado como modelo do nosso estudo por ser um produto utilizado mundialmente, principalmente na
indústria cervejeira para adicionar amargor e aroma à cerveja, com componentes majoritários como ésteres, aldeídos,
cetonas, terpenos e ácidos carboxílicos. Uma análise teórica de solubilidade foi inicialmente realizada usando um
método preditivo computacional (combinação tipo condutor de química quântica (COSMO)) acoplado com
termodinâmica estatística (solventes reais, RS) para comparar a solvatação de metabólitos de aromas direcionados em
2-metiloxolano en-hexano. Após abordagem silico e considerando as propriedades físico-químicas, avaliamos
experimentalmente a capacidade do 2-metiloxolano comparado ao hexano para extrair concretos aromáticos de
cones de lúpulo. Realizamos comparações apropriadas em termos de solubilidade, rendimentos de extração de aroma
e parâmetros econômicos versus ecológicos.

2. Resultados e Discussão

2.1. Estudo de Solubilidade: COSMO-RS

Figura1mostra as previsões de solubilidade do COSMO-RS de alguns componentes aromáticos no lúpulo,

como humulone, humuleno e lupulone emn-hexano e 2-metiloxolano. Esses solutos direcionados foram
escolhidos porque são conhecidos por representar a maioria dos compostos aromáticos do lúpulo. As
simulações foram realizadas em 25◦C, mas também nas temperaturas de ebulição de cada solvente. Os
resultados, expressos em log10(xsolúvel), o logaritmo da fração molar do soluto no solvente, mostra uma
solubilidade teórica muito maior dos analitos em 2-metiloxolano, em particular humulona e lupulona que são
mais polares que o humuleno. Com efeito, tanton-hexano e 2-metiloxolano têm uma grande superfície com
uma densidade de carga neutra que permite interações favoráveis com outras superfícies lipofílicas, em
particular o humuleno, mas a especificidade do 2-metiloxolano vem da presença do átomo de oxigênio no
grupo oxolano que também permite interações com dipolos encontrados em humulona (2 cetonas e 3 grupos
hidroxila) e lupulona (2 cetonas e 2 grupos hidroxila) (ver Figura1UMA). Portanto, os cálculos do COSMO-RS (ver
Figura1B) previu solubilidades muito mais altas de compostos oxigenados, como humulona (×105vezes mais
em 25◦C) e lupulona, mas também quase igual
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solubilidade para humuleno, um composto apolar. Como lembrete,n-hexano é um dos solventes de referência para
solubilização de compostos lipofílicos. Deve-se notar também que, como esperado, as solubilidades previstas
aumentaram com a temperatura, mais ou menos dependendo do soluto/solvente.

Figura 1.(UMA) Superfícies Sigma de lupulona, humulona, humuleno,n-hexano e 2-metiloxolano. Amarelo/

vermelho: densidade de carga da molécula < 0, azul: densidade de carga da molécula > 0, verde: densidade de
carga da molécula = 0. (B) Condutor como modelo de triagem para solventes reais (COSMO-RS) resultados da
previsão de solubilidade de humulona, humuleno e lupulona emn-hexano e 2-metiloxolano a 25◦C e no ponto de
ebulição. Cinza: referência, verde: melhor solvente que a referência.

Em conclusão, os cálculos do COSMO-RS previram que o 2-metiloxolano oferece uma melhor solubilização do
quen-hexano para os principais compostos aromáticos que são normalmente encontrados nos concretos de lúpulo.
Isso é particularmente visível no caso de compostos mais polares, como humulona ou lupulona. Este primeiro estudo
in silico representa um primeiro passo importante para determinar se o 2-metiloxolano pode substituir com sucesso o
hexano para a extração de sabores de lúpulo.

2.2. Rendimentos de extração

Os rendimentos de extração obtidos para ambos os solventes usando maceração e extração Soxhlet são
mostrados na Tabela1. Conforme mencionado na literatura, as extrações usando 2-metiloxolano geralmente deram
maiores rendimentos de extração em comparação com o hexano, independentemente da técnica de extração
utilizada. Aqui, macerações de 2 h sob refluxo também resultaram em maiores rendimentos de extração bruta usando
2-metiloxolano (16,6%) em comparação com hexano (12,7%). O rendimento total da extração bruta, avaliado usando
extração Soxhlet (6 h), também resultou em maior rendimento com 2-metiloxolano (20,2% vs. 17,9% com hexano). A
diferença de rendimento de extração pode ser explicada por vários fatores, incluindo (i) a maior temperatura de
extração devido ao maior ponto de ebulição (80◦C vs. 68◦C); (ii) o maior poder de solvência; (iii) uma extração maior
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espectro, de moléculas apolares a levemente polares, conforme previsto pelo COSMO-RS; (iv) presença de solvente
residual aprisionado no extrato ceroso.

Tabela 1.Rendimentos de Extração.

Tecnico/Solvente Hexano 2-Metiloxolano

Maceração (2 h) 12,7% +/- 0,7 16,6% +/− 0,5
Soxhlet (6 h) 17,9% +/- 0,2 20,2% +/- 0,3

Curiosamente, deve-se notar também que a cinética de extração parece mais rápida no caso do 2-metiloxolano,
pois uma maceração de 2 h extraiu 82% do rendimento bruto total, enquanto o hexano extraiu apenas 71%. Esses
resultados obviamente podem estar ligados à maior temperatura de extração (extração sob refluxo), mas alguns
autores também encontraram resultados semelhantes para extrações, ambas sob refluxo [2] e na mesma
temperatura (55◦C) [12]. Essas informações são cruciais para o dimensionamento de equipamentos de processo
industrial, pois influenciam diretamente no tempo de residência no extrator e, consequentemente, na produtividade.

2.3. Composições Químicas

Os aromas de lúpulo são uma mistura complexa de substâncias voláteis, incluindo monoterpenos,
sesquiterpenos e álcoois voláteis, bem como derivados prenilados de floroglucinol conhecidos como “α-ácidos”,
responsáveis pelo amargor do lúpulo e “β-ácidos”. Os constituintes emHumulus lupulus(lúpulo) são principalmente β-
mirceno, linalol, α-humuleno e β-cariofileno. No entanto, a composição não é consistente ao longo dos anos ou
cultivares [19]. Os α-ácidos, particularmente humulone, cohumulone e adhumulone são constituintes importantes que
determinam a qualidade do lúpulo.20]. Os β-ácidos, principalmente a lupulona, são frequentemente considerados
indesejáveis, pois são propensos à auto-oxidação e muitas vezes causam problemas de sabor estranho.21]. Um
estudo anterior realizado por Filly et al. [17] mostraram que o 2-metiloxolano pode ser uma alternativa credível de
base biológica e não tóxica ao hexano para extração de aromas de botões de groselha. Aqui, o 2-metiloxolano foi
avaliado como uma alternativa ao hexano para a extração de aromas de pellets de lúpulo usando extração sólido-
líquido. Apenas os extratos de maceração foram analisados neste estudo, pois os extratos de Soxhlet não foram
considerados representativos do que poderia ser obtido na indústria. A composição do óleo essencial também foi
determinada como referência para a parte olfativa.
No contexto da extração de aromas de lúpulo, analisamos os extratos por cromatografia gasosa-espectrometria
de massa (GC-MS) e detector de ionização de chama (FID) para investigar se os maiores rendimentos de extração e a
diferença em termos de solubilidade também podem levar a diferenças de a composição química dos extratos (ver
cromatogramas na Figura S1). As composições de ambos os extratos solventes foram comparadas com o óleo
essencial usando GC-MS/FID. No total, 87 compostos foram detectados (Tabela2), com respectivamente 66 compostos
no óleo essencial, 19 no extrato de maceração com hexano e 15 no extrato de maceração com 2-metiloxolano.

Finalmente, ambos os solventes mostraram um perfil químico relativamente semelhante com uma maioria de
ácidos amargos e derivados (> 70%), em particular α-ácidos (17,9% e 19,1%, respectivamente). A variação mais
significativa entre os dois solventes é a proporção de lupulona (β-ácido), menor no extrato hexânico (41% vs. 60%).
Pelo contrário, os teores de humuleno são muito próximos (1,42 vs. 1,16%). Este resultado está de acordo com as
previsões de solubilidade feitas usando o COSMO-RS.
No entanto, alguns desvios das previsões devem ser observados. Primeiro, o extrato de hexano tem uma
quantidade bastante alta de hulupona (9,3%), conhecida por ser um produto de oxidação da lupulona [21,22].
Como este composto não foi detectado no extrato de 2-metiloxolano e porque não há razão para que o
hulupone seja extraído seletivamente por hexano, assumiu-se que (i) foi devido a um superaquecimento ou
exposição ao ar durante as etapas de extração ou dessolvantização; (ii) como hulupona é muito fotossensível [
23], foi degradado por luz UV no extrato de 2-metiloxolano devido ao armazenamento prolongado na luz.
Então, não foram observadas grandes diferenças para o teor de humulona e isohumulona, embora
teoricamente devam ser mais solúveis em 2-metiloxolano devido à sua natureza mais polar.
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Mesa 2.Abundância relativa de analitos (>1%) encontrada em extratos de maceração de lúpulo.

Composto CAS RI OE Hexano 2-Metiloxolano

Metacroleína 78-85-3 568 nd 0,63 1,25
2-metil-3-Buten-2-ol 115-18-4 606 nd 5,65 2h30
Dietil acetal 105-57-7 717 nd 5,32 1,91
β-Mirceno 123-35-3 991 35.03 nd nd
Linalol 78-70-6 1100 1,20 nd nd
2,3,4-Trimetil-2-pentanol 66576-26-9 / nd 2,55 1,45
E-Cariofileno 87-44-5 1444 8,87 nd nd
E-β-farneseno 18794-84-8 1458 6,96 nd nd
α-Humuleno 6753-98-6 1467 22,34 1,42 1,16
γ-Murolene 30021-74-0 1475 1,28 nd nd
β-Selineno 17066-67-0 1485 1,51 0,66 0,44
Geranil isobutanoato 2345-26-8 1515 1,55 nd nd
α-Selineno 473-13-2 1494 1,56 nd nd
γ-Cadineno 39029-41-9 1512 1,05 nd nd
δ-cadineno 483-76-1 1530 1,38 nd nd
Óxido de cariofileno 1139-30-6 1573 1,61 2,40 2.07
Óxido de Humuleno II 19888-34-7 1642 2,72 1,79 2,20
E,Z-1,3-Ciclododecadieno 1129-92-6 / 1,56 nd nd
Fitol 150-86-7 / nd 2,00 2.17
Hulupone 468-62-2 / nd 9h30 nd
Isohumulona 25522-96-7 2715 nd 6,00 8,93
R-Humulona 26472-41-3 2740 nd 11,89 19/10
Lupulona 468-28-0 / nd 41,34 60,22
Limonina 1180-71-8 / nd 4,52 4.15
RI: índice de retenção de Kovats; OE: óleo essencial; nd: não detectado.

Em conclusão, o COSMO-RS é uma ferramenta útil para o processo de seleção de solventes, porém os valores de
solubilidade por si só não podem representar a complexidade dos processos de extração, em particular o fenômeno
de difusão intrapartícula, e não devem ser vistos como uma ferramenta capaz de prever a composição quantitativa de
um extrato. Além disso, deve-se notar que a dessolventização, em particular para este tipo de material “pastoso”, e o
armazenamento podem ter um grande impacto na composição do extrato.
Como esperado, os extratos de óleo essencial e solvente têm composições muito diferentes. O óleo essencial de
lúpulo é composto principalmente de monoterpenos e sesquiterpenos, em particular β-Mirceno (35%), α-Humuleno
(22%), E-Cariofileno (9%) e E-β-Farneseno (7%), mas mostra sem vestígios de ácidos amargos e sem voláteis suficientes
para serem removidos.

2.4. Análise Sensorial

Resultados da análise sensorial (Figura2) mostraram que, como esperado, o perfil olfativo do
óleo essencial é significativamente diferente dos concretos, apresentando notas olfativas muito
intensas de “manjericão”, “pimenta” e “legumes”, significativamente menos intensas para “álcool de
frutas” e “álcool metilado”. aguardente” e ausência de notas de “ameixa macerada” e “caramelo”. Ao
contrário, ambos os extratos de lúpulo apresentaram perfis olfativos semelhantes,
independentemente do tipo de solvente. A predominância dos descritores “álcool” e “álcool
metilado” nos extratos solventes em relação ao óleo essencial está de acordo com sua composição
química (<30% de moléculas odoríferas). Os sabores “nozes”, “tabaco” e “caramelo” que também
foram usados para descrever extratos solventes podem estar relacionados à presença de produtos
de oxidação gerados durante a dessolventização. Para concluir,
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Óleo essencial 2-Metiloxolano Hexano

7
UMA
AA
6 UMA
UMA UMA
5
UMA
Notas médias
4 AA UMA UMA
UMA
UMA
3 UMA AB
UMA UMA
2 BB UMA
BB B UMA UMA
UMA UMA B UMA
B
1 B B UMA
UMA
B B
0

Descritores

Figura 2.Descritores olfativos utilizados pelo painel sensorial para avaliar o óleo essencial e os dois
extratos de lúpulo. ANOVA com limiar de 5% seguido do teste de Fisher para determinar as diferenças
significativas entre as notas médias das três amostras. Produtos com a mesma letra não são
significativamente diferentes.

2.5. Comparação Tecnoeconômica

Além da avaliação da capacidade de extração e qualidade dos extratos, avaliamos 2-metiloxolano en

-hexano sob os aspectos técnicos, ecológicos e econômicos. Em particular, a Tabela3mostra que o 2-
metiloxolano como solvente verde é produzido 100% por transformações bioquímicas de blocos de construção
agrícola (ou seja, moléculas definidas obtidas a partir da matéria-prima de biomassa) [2]. Em contraste, o
hexano é atualmente obtido 100% do petróleo e é conhecido por ser perigoso para o meio ambiente e a saúde.
Em relação à toxicidade, resultados recentes comparando as concentrações de efeitos adversos não
observados (NOAEC), usadas para determinar a concentração máxima segura de um composto no ar para os
trabalhadores, mostraram que o NOAEC do hexano é 23 vezes menor que o 2-metiloxolano (122 ppm vs. 2838
ppm) [24,25]. Em relação ao impacto ambiental, um estudo recente [26] mostrou que o CO2as emissões para
fabricar 1 kg de solvente foram 10 vezes menores para 2-metiloxolano do que para solvente convencional,
como hexano (0,19 vs. 1,9 kg CO2/kg). Por fim, um estudo anterior de Sicaire et al. na extração de óleo de colza [
12] mostrou que mesmo que o preço do solvente seja superior ao do hexano (8-9€/kg vs. 1€/kg [24]) e a
energia necessária para vaporizar 1 kg de solvente (entalpia de vaporização) é 10% maior para o 2-
metiloxolano, pode ser compensado em escala industrial graças ao maior rendimento de extração e extração
mais rápida. Para extratos mais valiosos, como aromas e perfumes, o custo extra devido ao solvente pode ser
compensado ainda mais facilmente, sem considerar qualquer preço “premium” que poderia ser aplicado
devido ao aspecto “mais verde” dos extratos.

Tabela 3.Parâmetros técnicos e ecológicos de solventes utilizados experimentalmente.

Bp (◦C) Registro P Vaporização Segurança CO 2 Pegada

Solvente Recurso
[27] [27] Entalpia (kJ/kg) [7] Símbolos (kg/kg) [26]

100%
n-hexano 68 4,00 334 1,9
Petróleo

100%
2-metiloxolano 80 1,85 364 Cereal 0,19
colheita
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3. Materiais e Métodos

3.1. Material da Planta e Produtos Químicos

Cones de lúpulo (Humulus lupulusEU.; variedade “Cascata”; colheita 2017; α = 6,5, Figura3) foram comprados
como pellets de um fornecedor local (França). Para produtos químicos, tanto 2-metiloxolano (inibidor de
peróxidos:BHT) e hexano (grau técnico) usado para extrações foram adquiridos da VWR International (Radnor, PA,
EUA). Os solventes e reagentes utilizados para análise eram de grau analítico.

Figura 3.Pellets de cones de lúpulo (diâmetro = 6 mm; comprimento = 5–20 mm).

3.2. Método Computacional: Cálculos do COSMO-RS

O modelo de triagem do tipo condutor para solventes reais (COSMO-RS) foi usado para prever e
comparar a solubilidade de alguns solutos selecionados em 2-metiloxolano en-hexano.
Resumidamente, o COSMO-RS é um método de cálculo desenvolvido por Klamt [28] usando um modelo de química
quântica baseado na previsão do potencial químico de uma substância na fase líquida. O COSMO-RS pode ser usado como
ferramenta poderosa para triagem de solventes de extração [29–33].
O procedimento do COSMO-RS compreendeu duas etapas em diferentes escalas: uma etapa de escala microscópica
seguida de uma etapa de escala macroscópica. Primeiro, o modelo COSMO é usado para aplicar um ambiente condutor
virtual para a molécula, induzindo uma densidade de carga de polarização em sua superfície: a superfície σ (Figura1UMA). A
cor verde corresponde a uma densidade de carga igual a 0, a cor azul a uma densidade de carga positiva (δ+), e a cor
vermelha para uma densidade de carga negativa (δ−). A estrutura da molécula e a distribuição de carga são então otimizadas
para obter a energia mínima do sistema usando cálculos baseados em algoritmos (teoria do funcional da densidade).

Com base na densidade de carga de polarização obtida, a energia de interação do soluto é quantificada
usando um cálculo termodinâmico estatístico. A distribuição espacial da carga de polarização é convertida em
uma função de composição: σ-profile. Este perfil σ fornece informações sobre a distribuição de polaridade
molecular. Nesta fase, a molécula é considerada isolada, de modo que as interações com moléculas vizinhas
não são levadas em consideração. Para considerar a molécula como um solvente (ou um soluto em um
solvente), esta função é então integrada para calcular o potencial químico da superfície (σ-potencial) usando o
programa COSMOthermX (versão C30 release 16.02). O potencial σ pode ser interpretado como a afinidade
entre um solvente S e a superfície σ. As interações de solvente são reduzidas a uma combinação de interações
locais entre um par de porções de superfície com densidades de carga σ e σ'. O funcional de energia de
interação Einté definido como a soma de três contribuições (Equação (1)).

Eint= Edesajustado+ Ehb+ Evdw (1)

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onde Edesajustadoé a energia de interação entre duas superfícies de densidade de carga diferente; Ehbé a energia
de ligação de hidrogênio; EVdWé as interações de Van der Waals.
Cálculos termodinâmicos estatísticos são então usados para calcular as propriedades
macroscópicas dessas interações moleculares. Em particular, a determinação do potencial químico é
usada para prever quase todas as propriedades termodinâmicas de compostos ou misturas de
compostos, incluindo a solubilidade. Na prática, o software COSMOthermX calcula a solubilidade teórica
de um soluto no solvente, expressa como o logaritmo da fração molar do soluto: log10(xsolúvel). A
solubilidade relativa é calculada a partir da seguinte equação (Equação (2)):

------exp(µpuro−µassim lvent
eu eu
− ∆G eu,fusão ---------

10--
registro10(xeu) =registro - (2)
RT

eué o potencial químico do composto puroeu;µsolvente eu

Ondeµpuro é o potencial químico deeuno
diluição infinita;∆Geu, fusãoé a energia livre de fusão deeu;xeué a solubilidade molar deeu.
A solubilidade relativa é sempre calculada em diluição infinita. O registro10(xsolúvel) da melhor solubilidade é
definido como 0 e todos os outros solventes são fornecidos em relação ao melhor solvente. Como exemplo, um soluto
com log10(xsolúvel) = -1 em um solvente S tem, em teoria, uma solubilidade que é 10 vezes menor que o mesmo soluto
no melhor solvente (log10(xsolúvel) = 0). Os cálculos foram realizados em 25◦C e no ponto de ebulição (68◦C para
hexano, 80◦C para 2-metiloxolano), utilizando o modo “iterativo”, considerando que solutos e solventes são puros e
em estado líquido. A confiabilidade das simulações do COSMO-RS no contexto da extração de produtos naturais foi
avaliada por Filly et al. [29].

3.3. Rendimento de extração

As extrações brutas foram calculadas usando a seguinte equação (Equação (3)):

massa de extrato seco (g)

Rendimento de extração (%) = (3)
massa de material de partida (base seca) (g)

3.4. Extração Sólido-Líquido

Resumidamente, 17 g de pellets de lúpulo foram embebidos em 175 mL de solvente (hexano ou 2-metiloxolano) e

depois aquecidos sob refluxo por 2 h. Os extratos foram filtrados sob pressão reduzida através de um pouco de algodão, em
seguida, o solvente foi evaporado usando um evaporador rotativo a vácuo (40◦C; 130mbar; 30 minutos). Como os extratos
secos obtidos eram muito pastosos, também foram dessolventizados usando uma bomba de palhetas com aquecimento (≈60◦
C) por 15 minutos. Os extratos secos resultantes foram pesados para calcular o rendimento bruto da extração e finalmente
armazenados a -20◦C antes da análise. Cada extração foi feita em triplicata.

3.5. Extração de Soxhlet

Para calcular o rendimento máximo de extração para ambos os solventes, os pellets de lúpulo foram extraídos
usando um aparelho Soxhlet nas seguintes condições: cerca de 30 g de pellets de lúpulo foram introduzidos em
cartuchos de celulose e colocados nas câmaras de extração (200 mL). Cerca de 200 mL de solvente foram introduzidos
no frasco de solvente inferior e aquecidos para que a duração do ciclo fosse de cerca de 6,5 +/- 0,5 min. A duração
total foi fixada em 6 horas. Os extratos resultantes foram dessolventizados usando o mesmo protocolo descrito
anteriormente.

3.6. Produção de óleo essencial

Óleos essenciais de lúpulo também foram produzidos para obter uma base de comparação da
composição química e análise sensorial, utilizando o seguinte procedimento: 250 g de pellets de lúpulo foram
embebidos em 2,5 L de água e hidrodestilados em aparelho tipo Clevenger por 4 h (3500 C). O óleo essencial
foi então recolhido e seco sob sulfato de sódio anidro. A extração foi feita em duplicata.
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3.7. Identificação de Aroma por GC-MS

A composição química de cada extrato foi determinada por análise GC-MS para a caracterização e GC-FID
para estimar as quantidades relativas de cada analito. As amostras foram diluídas a 10% em etanol. A injeção
de líquido foi realizada com um amostrador automático instalado em um Agilent 7890GC. O volume de injeção
foi definido como 1,6µL usando uma proporção de divisão de 100:1. Os seguintes parâmetros foram usados
para análises GC-MS: temperatura do injetor 250◦C, coluna SLB®-5ms (30m×0,25 milímetros×0,25 mm);
temperatura, de 40◦C a 300◦C em 5◦C/min e mantida por 5 min; gás de arraste, hélio; taxa de fluxo, 1 mL/min.
Um espectrômetro de massa quadrupolo simples 5977 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA) foi usado
para identificação. Os espectros de massa foram registrados no modo de ionização eletrônica a 70 eV. A linha
de transferência e a fonte de íons foram fixadas em 250◦C. Os espectros de massa foram escaneados no
intervalo m/z30-400 Da. A identificação do composto foi realizada por comparação de espectros de massa
registrados e espectros de massa de várias bibliotecas (Adams, Institut Supérieur International du Parfum, de
la Cosmétique et de l'Aromatique alimentarire (ISIPCA) e NIST - Instituto Nacional de Padrões e Tecnologia).
Para pseudo-quantificação foi utilizado um divisor após a coluna e antes do FID (1/3 do sinal foi enviado para
MS e 2/3 para FID).
Cada análise foi realizada em triplicata e tridecano foi adicionado a 0,1% como padrão interno. As
proporções de cada analito encontrado na fração volátil são dadas na Tabela2, após subtração dos sinais
do solvente (hexano ou 2-metiloxolano) e do inibidor de peróxidos (BHT).

3.8. Análise Sensorial

O perfil sensorial foi usado para discriminar as principais características aromáticas dos extratos de
lúpulo. O painel de olfato sensorial da ISIPCA, composto por oito mulheres altamente treinadas (45-70 anos),
participou deste estudo. A geração de atributos foi realizada durante seis sessões de treinamento. Após a
eliminação dos descritores não relevantes e a seleção dos termos mais representativos, o vocabulário final foi
composto por doze atributos (Figura2).
Três amostras foram analisadas: óleo essencial de lúpulo, concreto hexano e concreto 2-metiloxolano. Os
extratos foram diluídos a 10% em etanol, filtrados e armazenados a 4◦C antes do teste. Cartões de aroma foram
mergulhados 2 cm em cada extrato por 2 s e então colocados em frascos fechados para gerar um espaço livre
2 h antes da avaliação. As amostras foram apresentadas de forma monádica e distribuídas usando um desenho
quadrado latino de Williams para cada sujeito. Para avaliar a intensidade de cada descritor olfativo, o painel
utilizou uma escala linear de 0 (sem cheiro) a 10 (cheiro muito intenso). Os resultados da avaliação sensorial
são expressos como valor médio de intensidade para cada descritor e para cada extrato. A análise de variância
(ANOVA) foi realizada nos dados sensoriais descritivos para revelar diferenças sensoriais significativas entre as
amostras.

4. Conclusões

O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial do 2-metiloxolano como solvente verde, não tóxico e
biodegradável para substituir o hexano na extração de aromas de cones de esperança. Foi utilizada uma
abordagem multifatorial, incluindo previsão de solubilidade usando o modelo COSMO-RS, extrações em
escala laboratorial, análise GC-MS dos extratos, análise sensorial e estudo técnico-econômico.
As simulações do COSMO-RS mostraram que as principais moléculas responsáveis pelos aromas de lúpulo são
mais solúveis em 2-metiloxolano do que emn-hexano, em particular compostos oxigenados. No entanto, as previsões
de solubilidade nem sempre estavam de acordo com as composições químicas determinadas por GC-MS. Os extratos
solventes eram compostos principalmente de α- e β-ácidos (principalmente lupulona e humulona), mas com algumas
diferenças. Em particular, o extrato de 2-metiloxolano tem uma proporção maior de lupulona do que hexano (60% vs.
41%), mas produtos de degradação mais baixos, em particular, hulupona encontrado no extrato de hexano (9,3%). A
avaliação sensorial dos dois extratos de lúpulo por um painel de especialistas olfativos resultou nos mesmos perfis
olfativos com uma pequena diferença (nota “Nozes” mais intensa). Ainda, como extração
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traz poucas modificações em termos de percepções olfativas, a substituição de solventes por produtores de
aromas e perfumes provavelmente não será imediata e deverá exigir a criação de um novo produto.
Quantitativamente, as extrações usando 2-metiloxolano resultaram em maiores rendimentos de extração (20,2% vs.
16,6% para hexano) com uma cinética mais rápida (17,9% de rendimento após 2 h de maceração vs. 12,7% com hexano). Essas
diferenças provavelmente são causadas pelo próprio solvente, pela temperatura de extração mais alta e pelos espectros de
extração maiores.
Além desses resultados, também mostramos que o 2-metiloxolano possui propriedades muito interessantes em
adequação com os conceitos de extração verde (de base biológica, baixa toxicidade, baixo CO2emissões, etc). Além
disso, o 2-metiloxolano pode ser facilmente transposto para unidades de extração existentes usando hexano sem
grandes modificações e sem custo excessivo excessivo, apesar de seu custo mais alto. Portanto, concluímos que o 2-
metiloxolano é um solvente verde muito promissor para substituir o hexano para a produção de aromas verdes e
também é uma oportunidade para a indústria criar produtos limpos e inovadores.

Materiais Complementares:Os seguintes estão disponíveis online, Figura S1: cromatogramas GC-MS dos extratos de óleo
essencial, maceração com hexano e maceração com 2-metiloxolano.

Contribuições do autor:Conceituação, VR, NV e A.-SF-T.; metodologia, VR, AC, CS, JB e FH; software, A.-SF-T.;
validação, VR, CS, FH, LJ e A.-SF-T.; análise formal, VR, AC, CS, JB e FH; investigação, VR, AC, CS, JB e FH; recursos,
NV, LJ e A.-SF-T.; curadoria de dados, VR, CS, JB e FH; redação—preparação do rascunho original, VR, CS, JB e FH;
redação — revisão e edição, VR, CS, FH, LJ e A.-SF-T.; visualização, VR, AC, CS, JB, FH, NV, LJ e A.-SF-T.; supervisão,
VR e A.-SF-T.; administração de projetos, A.-SF-T.; aquisição de financiamento, LJ e A.-SF-T. Todos os autores
leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.

Financiamento:Esta pesquisa não recebeu financiamento externo. Conflitos de

interesse:Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

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Disponibilidade da amostra:Amostras dos compostos não estão disponíveis com os autores.

©2020 pelos autores. Licenciado MDPI, Basileia, Suíça. Este artigo é um artigo de acesso
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