Resumo – Uso do GS para tratamento da PIF

Os medicamentos que inibem a replicação do vírus tornaram-se a principal opção no

tratamento de infecções agudas e crônicas por vírus RNA e DNA em pessoas. No entanto, o
interesse em medicamentos antivirais para infecções em animais tem sido muito mais lento a
desenvolver. Isto é especialmente verdade para os gatos, que sofrem de várias infecções virais
crônicas semelhantes às das pessoas. Os agentes infecciosos incluem leucemia felina e vírus da
imunodeficiência (FeLV e FIV), herpesvírus felino. Calicivírus sistêmico virulento e um
coronavírus que causa peritonite infecciosa felina (FIPV). As infecções por FeLV e FIV foram
controladas com testes, isolamento e/ou vacinação. A doença associada ao FHV foi a primeira
infecção viral felina a incorporar um antiviral no tratamento. O calicivírus sistêmico altamente
fatal afeta apenas um pequeno número de gatos. A infecção por FIPV é a melhor candidata
para o desenvolvimento de medicamentos antivirais, pois as vacinas são ineficazes, os
ambientes com vários gatos tornam a prevenção extremamente difícil e mata 0,3–1,4% dos
gatos em todo o mundo. Um dos medicamentos antivirais mais promissores contra vírus de
RNA emergentes é o pró-fármaco GS-5734 de adenosina nucleosídeo monofosfato
(Remdesivir). O GS-5734 tem sido eficaz na prevenção do Ebola experimental em macacos
rhesus, e na inibição de coronavírus epidêmicos e zoonóticos em cultura de tecidos e em
modelos de infecção em camundongos. Essas descobertas promissoras levaram à pesquisa
inicial sobre o GS-5734 e seu nucleosídeo parental GS-441524. Contra infecção por FIPV em
gatos. Descobriu-se que GS-441524 e GS-5734 apresentam valores comparáveis de EC50 (1,0
µM) e CC50 (>100 µM) contra FIPV em células de gato. Portanto, decidiu-se concentrar-se no
GS-441524, menos complexo quimicamente, para testes adicionais com gatos de laboratório.
Um estudo farmacocinético em dois gatos de laboratório demonstrou níveis plasmáticos
sustentados e eficazes de GS-441524 durante 24 horas após uma dose única administrada por
via subcutânea (SC) ou intravenosa (IV). Esses resultados foram então estendidos a 10 gatos de
laboratório com peritonite infecciosa felina efusiva abdominal induzida experimentalmente
(PIF). Este estudo mostrou que o GS-441524 é altamente eficaz contra a PIF experimental.

Regime de tratamento
O regime de dosagem inicial para GS-441524 foi de 2,0 mg/kg SC a cada 24 horas, com base
em experimentos anteriores de cultura de tecidos e estudos farmacocinéticos em gatos de
laboratório.12 O período mínimo de tratamento foi de 12 semanas com base em experiências
com o inibidor de protease 3CL GC376 contra ocorrência natural FIP.6 O tratamento foi
prolongado por uma ou mais semanas em gatos que ainda apresentavam valores anormais de
proteína sérica. A dosagem foi aumentada durante as fases posteriores do ensaio de 2,0 para
4,0 mg/kg nos casos em que o tratamento teve de ser prolongado ou quando ocorreram
recidivas da doença. Os proprietários recebiam um novo suprimento de medicamento a cada 4
semanas na forma de seringas Luer lock pré-carregadas de 1 ou 3 ml com agulhas Luer hub 22
G de 1 polegada. As seringas foram armazenadas na geladeira e aquecidas à temperatura
ambiente antes da injeção. As injeções foram espaçadas ao longo do dorso, de 2 cm atrás das
omoplatas até a área lombar média e metade da distância até o tórax e flancos adjacentes.

Monitoramento durante o período inicial de tratamento

Os gatos foram retirados de todos os tratamentos não essenciais, como antibióticos,
corticosteróides, interferons, pentoxifilina, antiinflamatórios não esteróides ou medicamentos
para alívio da dor no momento da entrada no estudo. Eles foram então monitorados a cada 12
horas durante sua estadia na UC Davis quanto à temperatura, apetite, atividade, micção e
defecação. O sangue também foi coletado em intervalos de 1 a 3 dias para avaliar hematócrito,
proteína total, bilirrubina, contagem de leucócitos e contagem diferencial de leucócitos.
Amostras de ascite foram coletadas na entrada e em intervalos de um ou mais dias pelo maior
tempo possível e testadas quanto aos níveis de transcritos de RNA do FIPV 7b por RT-PCR
quantitativo (IDEXX Molecular Diagnostics). A imuno-histoquímica para a proteína do
nucleocapsídeo FIPV foi realizada em cortes de tecido fixados em formalina de cinco gatos que
foram necropsiados.

Monitoramento da resposta inicial e de longo prazo ao tratamento

Os gatos receberam alta para seus donos quando foi observada uma resposta favorável
significativa ao tratamento, geralmente dentro de 3 a 5 dias. Os proprietários foram instruídos
durante esse período sobre como administrar adequadamente as injeções subcutâneas da
droga e incentivados a continuar registros diários de temperatura corporal, atividade, apetite,
defecação e micção, e medições semanais de peso corporal. Um hemograma completo e um
painel de química sérica foram realizados em intervalos mensais por veterinários locais ou
durante visitas ao VMTH, e quaisquer sinais ou comportamentos anormais deveriam ser
anotados e prontamente relatados. A eutanásia, quando necessária, era geralmente realizada
pelo veterinário do proprietário ou, quando possível, na UC Davis. Os corpos foram selados em
sacos plásticos, imediatamente refrigerados e enviados dentro de 2 dias ou menos em
recipientes isolados com bolsas de gelo para a UC Davis por correio expresso noturno. As
necropsias foram realizado por um dos autores (ML) no Serviço de Anatomia Patológica da
Faculdade de Medicina Veterinária da UC Davis. O pedido do proprietário para a disposição
final do corpo foi atendido.

Resultado do tratamento
Quatro gatos foram sacrificados (CT62, CT72, CT75) ou morreram (CT56) nos primeiros 2–5
dias devido a doença grave e outras complicações, e um quinto gato foi sacrificado (CT54) após
26 dias devido à falta de resposta ao tratamento. Os períodos de tratamento não foram
interrompidos, exceto para três gatos que receberam pausas de 2 semanas na semana 4 (gato
CT80) ou na semana 8 (gatos CT53, CT71) devido a problemas com a administração de injeções
e reações cutâneas. Cat CT53 foi tratado após uma segunda recaída durante 8 em vez de 12
semanas devido a um aumento na ureia no sangue e nos níveis séricos de dimetilargi nove
simétrica (SDMA). A resposta clínica dos 26 gatos que completaram pelo menos 12 semanas de
tratamento foi dramática. A febre geralmente desaparece dentro de 12 a 36 horas,
concomitante com uma melhora diária acentuada no apetite, nos níveis de atividade e no
ganho de peso. Os derrames abdominais desapareceram rapidamente ao longo de um período
de 1 a 2 semanas, começando cerca de 10 a 14 dias após o tratamento. Gatos com derrame
torácico geralmente ficavam dispneicos ao serem apresentados a veterinários particulares, o
que levou à remoção dos derrames pleurais antes de chegarem à UC Davis. A dispneia residual
e o derrame torácico responderam rapidamente ao tratamento e não foram mais aparente
após 7 dias. A icterícia se resolveu lentamente ao longo de 2 a 4 semanas, paralelamente à
diminuição da hiperbilirrubina . Os sinais de doença ocular começaram a desaparecer dentro
de 24 a 48 horas e não eram mais aparentes externamente ou pelo exame oftalmoscópico em
7 a 14 dias. O aumento dos gânglios linfáticos mesentéricos e íleo/cecais/cólicas diminuiu
lentamente de tamanho ao longo do tratamento. Todos os 26 gatos pareciam aparentemente
normais ou quase normais na estimativa dos proprietários após 2 semanas de tratamento. A
ênfase do tratamento após 2 semanas foi no monitoramento de vários parâmetros de exames
de sangue. Os valores-chave incluíram hematócrito (PCV), glóbulos brancos totais, contagem
absoluta de linfócitos, proteína sérica total, globulina sérica, albumina sérica e relação
albumina:globulina (A:G). Dezoito dos 26 gatos que completaram pelo menos 12 semanas de
tratamento primário ininterrupto não necessitaram de tratamento adicional. No entanto,
outros oito gatos sofreram recaídas da doença no período de 3 a 84 dias (média de 23 dias).

Indicadores favoráveis de resposta ao tratamento

A medida mais simples da eficácia do tratamento a longo prazo foi o peso corporal. Ganhos de
peso de 20-120% ocorreram durante e após o tratamento, mesmo em gatos com 1 ano de
idade ou mais no início da doença. Os gatos mais jovens também pareciam crescer em
estatura a uma taxa maior, como observado independentemente pelos proprietários. Estes
picos de crescimento pós-tratamento indicaram que a PIF era subclínica em muitos dos gatos
durante algum tempo antes do diagnóstico e tinha afetado o crescimento. Os hemogramas
completos e um perfil químico também se mostraram úteis no monitoramento dos efeitos
posteriores do tratamento e na observação de possíveis toxicidades medicamentosas.

Conclusão
O GS-441524 é o segundo medicamento antiviral direcionado, depois do GC376, a ser avaliado
para o tratamento de gatos com PIF nos últimos dois a três anos.6,12,15 Esses dois
medicamentos inibiram a replicação viral de duas maneiras muito diferentes, seja por
terminação transcrição de RNA viral ou bloqueio da clivagem de poliproteínas virais. Ambos os
processos são alvos bem estabelecidos para diversas doenças virais em pessoas. Uma questão
fundamental é como o tratamento com um análogo de nucleósido se compara ao de um
inibidor da pró-provocação viral. Os dois medicamentos produziram resultados virtualmente
idênticos em culturas de tecidos e estudos experimentais de infecção em gatos. No entanto, a
eficácia contra a PIF de anel que ocorre naturalmente pareceu maior com o GS-441524 do que
com o GC376. Seis dos 20 gatos tratados com GC376 permanecem em remissão. Os resultados
obtidos nos 31 gatos tratados com GS-441524 superaram as expectativas e indicam que a PIF,
independentemente do sinal ou forma da doença, é uma doença tratável utilizando análogos
de nucleosídeos.