Biologia Molecular

@Kalinesousabrito
Profa. Dra. Kaline Sousa

Graduação em Biomedicina
Aula 01
@JessicaJulioti Especialização em Saúde Coletiva com Ênfase em Saúde da Família
@EquipeMySete Mestrado em Biofotônica Aplicada às Ciências da Saúde
Doutorado em Biofotônica Aplicada às Ciências da Saúde
CERTIFICADO
@Kalinesousabrito
Aula 01
Aula 01: Introdução a Biologia Molecular
Aula 02: Organização Gênica e Dogma Central

da Biologia Molecular
Aula 03: Polimorfismos, Mutação e Epigenética
Aula 04: Técnicas e Aplicações Biomoleculares
Aula 05: Perguntas e Respostas

O QUE É BIOLOGIA MOLECULAR?
O QUE É BIOLOGIA MOLECULAR?
Ácidos Nucleicos:
DNA e RNA
O QUE ESTUDA A BIOLOGIA
MOLECULAR?
A Biologia Molecular é o estudo da Biologia em nível molecular, com
especial atenção ao estudo da estrutura e da função do material genético
e de seus produtos de expressão: as proteínas.
 Sequenciamento do genoma de alguns

organismos (incluindo o ser humano);
 Terapia gênica;
 Vacinas Recombinantes;
 Plantas e animais transgênicos.
O homem começou a fazer uso da genética (Biomol) antes
mesmo de compreender alguns de seus conceitos:
Os animais mais vigorosos eram escolhidos

para a reprodução, assim como as melhores
sementes eram selecionadas para o plantio.
O monge Gregor Mendel deduziu a presença

de fatores hereditários que eram propagados
de forma estável de geração a geração
(características individuais).
Mendel propôs a existência de partículas ou fatores hereditários
nas células sexuais e previu o comportamento especial desses
fatores (genes), que deveriam se separar durante a formação
de gametas.
O surgimento da Biologia Molecular está atrelado

às contribuições de Mendel (1854-1864).
Famoso experimento com ervilhas foi importante para compreender
que um organismo vivo transmite suas informações hereditárias através
de um par de unidades elementares da hereditariedade... os genes!.
Genes são fragmentos de DNA
que codificam proteínas do
nosso corpo responsáveis pelas
nossas características.
ESTRUTURA QUIMÍCA DO DNA
O DNA foi primeiramente

isolado a partir do núcleo
de leucócitos, por
Friedrich Miescher, em
1869.
A presença de DNA em
outros tipos de célula foi
comprovada nos anos
seguintes.
O DNA é formado a partir de subunidades simples, chamadas de nucleotídeos.

NUCLEOTÍDEO X NUCLEOSÍDEO
O Nucleotídeo é a unidade básica do DNA e RNA...

Então, o Nucleotídeo é formado por:
Grupo Fosfato + Pentose + Base Nitrogenada
A molécula formada pela união da pentose + a base
nitrogenada (sem o fosfato) é chamada de Nucleosídeo!
O GRUPO FOSFATO
Um íon poliatômico constituído de um átomo de fósforo
(P) e quatro átomos de oxigênio (O).
Nucleotídeo
Tipos: Ribose Desoxirribose (Carboidrato ou Açúcar com 05 Carbonos).
RIBOSE
RNA
DESOXIRRIBOSE
DNA
 Diferem uma da outra pela presença ou ausência do

grupo hidroxila (OH) no Carbono 2' da pentose.
 É baseado nesta característica que os ácidos nucléicos
recebem o nome RNA (ribose) ou DNA (desoxirribose).
A Desoxirribose é derivada de uma ribose que sofre a
substituição do grupo hidroxila na posição 2 por hidrogênio,
resultando na perda de um átomo de oxigênio.
BASES NITROGENADAS
 Purinas (púricas) são bases nitrogenadas compostas por dois anéis
heterocíclicos (de átomos de carbono e nitrogênio): um anel
pirimidínico, o qual encontra-se em fusão com um anel imidazólico.
 Pirimidinas (pirimídicas) são bases nitrogenadas compostas de

apenas um único anel heterocíclico pirimidínico.
BASES NITROGENADAS
 Adenina e Guanina são púricas! Formadas por dois anéis.
 Citosina , Timina e Uracila são pirimídicas! Formadas por

um anel. Atenção: Uracila existe apenas no RNA!!!
BASES NITROGENADAS
C5’ – Liga a pentose ao grupo fosfato

C1’ – Liga a pentose a base nitrogenada
LIGAÇÕES DOS NUCLEOTÍDEOS
 Ligação entre a pentose e a base nitrogenada:

A ligação de uma base e o Carbono 1 (C 1') da pentose
é uma ligação covalente - LIGAÇÃO GLICOSÍDICA
 Ligação entre a pentose e o grupo fosfato:

LIGAÇÃO FOSFODIÉSTER
com a hidroxila ligada
ao C 5' da pentose
GLICOSÍDICA
CADEIA POLINUCLEOTÍDICA
 A molécula de DNA é, na verdade, formada por duas cadeias
polinucleotídicas, dispostas lado a lado...
Nucleotídeos são unidos por ligações fosfodiéster entre:

- Grupo fosfato (ligado ao carbono 5' da desoxirribose)
- Grupo hidroxila (OH), do carbono 3' da desoxirribose adjacente.
Novos nucleotídeos são adicionados no terminal no 3'OH …

O SENTIDO DA FORMAÇÃO DO DNA
 O SENTIDO DA FORMAÇÃO DO DNA é 5' → 3'
O grupo hidroxila do carbono-3 da

pentose do primeiro nucleotídeo
se liga ao grupo fosfato ligado a
hidroxila do carbono-5 da pentose
do segundo nucleotídeo.
3' OH
5’ -> 3’
COMPLEMENTARIEDADE DAS
BASES
Ligações DNA
 Os nucleotídeos de uma cadeia polinucleotídica do
DNA se unem através de ligações de hidrogênio, com
nucleotídeos de outra cadeia polinucleotídica, dando
forma à famosa estrutura de dupla hélice!
Complementariedade de bases:
 As ligações de hidrogênio se estabelecem

entre bases nitrogenadas complementares...
Guanina se liga a Citosina através de 3 ligações de H.

 G=C
Adenina se liga a Timina através de 2 ligações de H.
 A=T
FORMAÇÃO DO DNA
 As cadeias polinucleotídicas na molécula de DNA são ANTIPARALELAS : 5’-3’ e 3’-5’
Uma das fitas tem a direção exata

da sua síntese (5'---3') enquanto
que a outra está invertida (3'----5')
As ligações de hidrogênio entre

bases complementares são
Estabelecidas de maneira estável
e precisa, por isso as fitas do DNA
ficarem em sentidos contrários.
BASES
• Regra de Chargaff
BASES
 Pirimidinas são menores que Purinas!
Porém, como a combinação é AT e CG

O tamanho é muito semelhante...
Isso dá uma dimensão proporcional

ao longo da molécula de DNA!
FORMAÇÃO DO DNA
FORMAÇÃO DO DNA
Duas cadeias helicoidais de DNA,

enroladas ao longo de um mesmo eixo
Dupla hélice com rotação à direita
As duas fitas de DNA antiparalelas.
BASES
O DNA de um indivíduo contém

22% de GUANINA. Com base
nesta informação determine
qual o percentual de cada uma
das outras bases:
G = 22% C= 22%
Somando 22%+22% = 44%
Resta 56% para 100%

Logo 56% dividido entre A-T.
A= 28% T= 28%
E O QUE É RNA?
Também é um ácido nucleico, conhecido como “cópia”

do DNA, são bem semelhantes. Defere-se do DNA em:
 O RNA é constituído de apenas uma única cadeia polinucleotídica, fita

simples (não dupla);
 O RNA apresenta a pentose ribose (em vez de desoxirribose);
 O RNA não possui o nucleotídeo composto pela base timina. Em seu
lugar há o nucleotídeo formado pela base uracila.
DNA RNA
Pentose Desoxirribose Ribose
(Açúcar)
Bases Guanina Guanina
Nitrogenadas Citosina Citosina
Adenina Adenina
Timina Uracila
Fita Dupla Simples


ESTUDO DIRIGIDO
 O que estuda a Biologia Molecular e quais suas principais aplicações?
 Qual a diferença entre Nucleosídeo e Nucleotídeo?
 Como Gregor Mendel contribuiu para o desenvolvimento da Biologia
Molecular?
 O que é Gene?
 Quais as unidades básicas formadoras do DNA?
 Como são formados os nucleotídeos?
 Qual a diferença entre a ribose e a desoxirribose? Qual dessas pentoses
corresponde o DNA e qual corresponde o RNA?
 Qual a diferença entre as bases purinas e pirimidinas?
 Se a soma das bases nitrogenadas AT em uma molécula de DNA é de 36%,
quais são as quantidade dos conteúdos de todas as bases?
 Quais são as bases purinas do DNA e do RNA?
 Quais são as bases pirimidinas do DNA e do RNA?
 Onde são realizadas as ligações glicosídicas, fosfodiéster e ligações de
Centro Educacional
hidrogênio na estrutura do DNA?
Sete de Setembro  Sobre as ligações de hidrogênio no DNA responda quantas existem entre a
Profa. Dra. Kaline Sousa citosina e a guanina e quantas existem entre adenina e timina?
 Qual o sentido da formação do DNA e como ocorre?
 Qual a diferença entre DNA e RNA?
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ORGANIZAÇÃO GÊNICA
Forma como os genes estão dispostos na célula.
A organização
gênica de
Eucariotos é
diferente dos
Procariotos.
Kaline mas o que é

Procarioto e Eucarioto?
EUCARIOTO X PROCARIOTO
Procariotos
Eucariotos Bactérias
Animal
Plantas
Fungos
Protozoários
PROCARIOTOS
Os procariotos apresentam apenas um cromossomo circular que consiste de

uma molécula de DNA associado a proteínas. Quando condensada, essa
estrutura forma uma massa que se localiza aderida a membrana em alguns
pontos, o nucleóide.
E COMO É A ORGANIZAÇÃO
GÊNICA DOS EUCARIOTOS?
EUCARIOTOS
• Dupla Hélice:
Estrutura molecular do DNA: duas fitas ligadas por meio de ligações de hidrogênio e em forma de hélice
• Cromatina:
Formada por DNA e proteínas
denominadas HISTONAS
Nos Eucariotos o
• Cromossomo: DNA encontra-se
no núcleo da
Estado mais condensado célula.
do material genético
EUCARIOTOS
A associação de DNA com histonas
constitui a unidade estrutural básica
da cromatina eucariótica,
o nucleossomo!
O DNA fica associados a proteínas

denominadas histonas, que são ricas
em aminoácidos básicos (carga
positiva) com alta afinidade por DNA.
8 histonas + o DNA (forma de

octâmero). O enovelamento de
nucleossomos produz fibras de 30 nm
de espessura.
EUCARIOTOS
Cariótipo Humano 2n (46 cromossomos)
Macaco = 48
Galo = 78
Borboleta = 380
Homo sapiens
• Número de genes estimado: 20.000-25.000
• Densidade gênica (reflete a distância entre os genes): um gene a
cada 127.900 pb.
Genomas grandes, lineares, muitos genes! Eucariotos apresentam genomas mais
complexos que os procariotos!
Escherichia coli
• Número de genes estimado: 4.300
• Densidade gênica: um gene a cada 1.000 pb.
Genomas pequenos, circulares, poucos genes!

DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA
MOLECULAR
Agora que já sabemos como é a

organização gênica nos seres vivos,
vamos descobrir o que é o famoso
Dogma Central da Biologia Molecular.
MOLECULAR
MOLECULAR
TRADUÇÃO: Permite a síntese
de proteínas específicas, com
base na informação contida no
mRNA.
TRANSCRIÇÃO: Permite a
passagem de Informação
do DNA para o RNA.
REPLICAÇÃO: Necessária à
conservação da informação
genética da célula.
REPLICAÇÃO DO DNA
A velocidade de síntese de um novo

filamento de DNA em humanos é de cerca de
3.000 nucleotídeos por minuto!
 Em bactérias cerca de 30.000 nucleotídeos

são adicionados a uma cadeia de DNA nascente
por minuto!
 Diante desses fatos, fica claro que a

maquinaria de replicação do DNA deve
funcionar de forma rápida e precisa.
REPLICAÇÃO DO DNA
SENTIDO DA REPLICAÇÃO → SEMPRE no

sentido 5’→ 3’. A enzima que adiciona
nucleotídeos precisa de um terminal 3’OH
livre para adicionar novos nucleotídeos.
Estima-se que ocorra um erro por bilhão

de nucleotídeos incorporados após a
síntese e correção dos erros durante e logo
após o processo de replicação do DNA.
REPLICAÇÃO DO DNA
Nosso DNA contém mais de 3 bilhões de pares de bases nitrogenadas.
Por ser muito extenso o DNA é aberto em locais específicos chamados Origens de replicação.
As origens de replicação formam “bolhas de replicação” que avançam para os dois lados
simultaneamente, as aberturas laterais destas “bolhas” chamam-se forquilhas de replicação.
REPLICAÇÃO DO DNA
Pode-se dizer que a replicação do

DNA é bidirecional... A medida
que vão avançando elas vão se
encontrando até duplicar o DNA
inteiro.
A REPLICAÇÃO É SEMICONSERVATIVA
REPLICAÇÃO DO DNA
Durante a divisão celular é preciso que a replicação do material genético ocorra de forma
precisa de fidedigna, para isso, um conjunto de proteínas denominado Replissomo, participam
diretamente do processo de replicação facilitando este processo.
REPLICAÇÃO DO DNA
REPLICAÇÃO DO DNA
A REPLICAÇÃO É SEMI-DESCONTÍNUA
Uma fita de DNA é formada continuamente no sentido da abertura da forquilha de
replicação.
A outra fita (oposta à abertura da forquilha) é formada por fragmentos, os fragmentos de
Okazaki.
Os comprimentos dos fragmentos de

Okazaki são entre 1.000 a 2.000
nucleótidios de comprimento em E. coli e
entre 100 a 200 em eucariontes.
É um relativamente pequeno fragmento de DNA (com um primer de RNA

no termino 5') criado na cadeia atrasada durante a replicação do DNA.
REPLICAÇÃO DO DNA
O sentido da síntese do DNA será sempre no sentido 5’→ 3’
Fita contínua ou
líder
Fita descontínua
ou tardia
Fragmentos
de Okazaki
REPLICAÇÃO DO DNA
A região Beta, logo acima, orienta a

Principais Eventos da Replicação do DNA enzima quanto a direção da replicação!
Abertura (forquilha) e desenrolamento da fita dupla
Logo abaixo temos a região que faz
Síntese da fita contínua (ou fita líder) Correção de possíveis erros!
Síntese da fita descontínua (ou fita atrasada)
REPLICAÇÃO DO DNA
FASES DA REPLICAÇÃO
Didaticamente, o processo de replicação do DNA pode ser dividido em três etapas:
Iniciação, Alongamento e Terminação.
 TELÔMERO – São regiões terminais dos cromossomos de eucariotos formadas por sequências bastante
conservadas e repetitivas (5’ TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG 3’).
 Para evitar o encurtamento dos telômeros a cada divisão celular os segmentos de DNA
perdidos são recuperados,
o que depende de um
complexo enzimático
chamado TELOMERASE.
TRANSCRIÇÃO E TRADUÇÃO DE
PROTEÍNAS
TRANSCRIÇÃO DO DNA
DNA - Fita codificadora ou senso (5’-3’)
DNA - Fita molde para RNA ou anti-senso (3’-5’)
RNA – (5’-3’)
Região Promotora
Procarioto
A transcrição finaliza quando a RNA Pol encontra as regiões terminadoras

(códon de parada UAA, UAG, ou UGA), a RNA pol paralisa a transcrição mas
permanece ligada à fita dupla do DNA.
Para haver o término da transcrição, haverá a formação do grampo de

terminação e a ligação ao fator Rho (proteína que está logo atrás da RNA Pol,
na presença dos códons de parada finaliza a transcrição se ligando a enzima e
a desligando do DNA).
Após a síntese do RNAm, o mesmo sofre algumas alterações para que seja funcional
Guanosina (CH3) modificada
no terminal 5’P (Cap 5‘P)
Cauda Poli A - Estabiliza a molécula de

RNA; facilita transporte e tradução.
CAP5’ - Proteger o RNA da

degradação enzimática; auxilia o
transporte do RNA do núcleo para o
citoplasma.
TRANSCRIÇÃO
Basicamente, a transcrição é o evento no qual o DNA sintetiza RNA!

Transcrição do DNA
https://www.youtube.com/watch?v=fynGKohVYHw
Fator Sigma: Habilita a enzima

reconhecer a região promotora
dos genes.
TRADUÇÃO DE PROTEÍNAS
https://www.youtube.com/watch?v=i4C0OUXeIgE
Transcrição e Tradução - Vida e Morte do RNA Mensageiro

ESTUDO DIRIGIDO
 Como é a organização gênica dos organismos procariotos e
eucariotos?
 Quantos cromossomos tem o ser humano?
 O que é cromossomo?
 O que é cromatina?
 O que consta o Dogma central da Biologia Molecular?
 Descreva o processo de Replicação Celular, apontando os principais
participantes desse processo.
 Cite duas diferenças entre a replicação de DNA entre seres humanos
(eucarioto) e bactérias (procarioto).
 Descreva o processo de transcrição de DNA, apontando os principais
participantes desse processo.
 Cite uma diferença na transcrição de DNA entre seres humanos
Centro Educacional
(eucarioto) e bactérias (procarioto).
Sete de Setembro
 Descreva o processo de tradução de proteínas, apontando os
principais participantes desse processo.
Profa. Dra. Kaline Sousa  Qual a importância da Telomerase?


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Iniciado formalmente em 1990, O Projeto Genoma
Humano foi coordenado por 13 anos pelo Departamento
de Energia do Instituto Nacional de Saúde dos Estados
Unidos junto com outros 18 Países.
O projeto originalmente foi planejado para ser completado

em 15 anos, mas o desenvolvimento da tecnologia
acelerou seu final para 2003.
A data coincidiu com o aniversário de 50 anos da

publicação da estrutura do DNA por Watson e Crick que
deu início a era da biologia molecular.
Foram sequenciados todos os genes e descrita a
sequência completa de todos os nucleotídeos que formam
o DNA dos 23 pares de cromossomos humanos.
Por limitações tecnológicas, cerca de 1% do genoma não

pode ser sequenciado por possuir muitas repetições de
bases nitrogenadas (centrómeros e telômeros).
A maior parte do genoma humano parece não ser

codificante e existe provavelmente por razões estruturais
e regulatórias.
As principais metas do Projeto Genoma Humano
foram:
• Identificar todos os genes humanos;
• Determinar a sequência dos cerca de 3,2 bilhões de

pares de bases que compõem o genoma do Homo
sapiens;
• Armazenar a informação em bancos de dados;
• Desenvolver ferramentas de análise dos dados;
• Transferir a tecnologia relacionada ao Projeto para o

setor privado.
Resultados Obtidos:
• O genoma humano contem 3,2 bilhões de nucleotídeos;

• O tamanho médio dos genes é de 3.000 bases, mas varia muito,
sendo o maior deles o gene da distrofina com 2,4 milhões de pares
de bases;
• A função de cerca de 50% dos genes descobertos é desconhecida;
• Sequências repetidas que não codificam proteínas constituem
mais do que 50% do genoma humano;
• Não são conhecidas as funções para as sequências repetidas,
mas elas ajudam a entender a estrutura e a dinâmica dos
cromossomos;
• Genes estão concentrados em áreas, ao acaso, ao longo do
genoma, com vastas sequências sem código para proteínas entre
eles;
Resultados Obtidos:
• O cromossomo 1 (o maior do genoma humano) tem o maior

número de genes - 3.168 – e o cromossomo Y, o menor -344;
• Algumas sequências gênicas específicas foram associadas

com numerosas doenças e disfunções, incluindo câncer de
mama, doenças musculares, surdez e cegueira;
• Os cientistas localizaram, no genoma humano, milhares de

locais nos quais há diferença de apenas uma base. Essa
informação promete revolucionar o processo de encontrar
sequências de DNA associadas com doenças muito comuns
tais como disfunções cardiovasculares, diabetes, artrite e
câncer.
VARIABILIDADE GENÉTICA
MAPEAMENTO DA
VARIABILIDADE HUMANA
Pequenas variações nas sequências de nosso DNA podem ter o maior impacto na suscetibilidade
de desenvolver ou não uma doença e em nossas respostas a fatores ambientais como infecção
por micróbios, toxinas e drogas. Um dos tipos mais comuns de variação de sequência é o
polimorfismo de nucleotídeos únicos (SNP – single nucleotide polymorphism).
ESTÃO RELACIONADOS:
Traços como cor da pele,
Tipo sanguíneo
Susceptibilidade a algumas doenças
Diferentes respostas a agentes farmacológicos.
SH - 99,9% dos genes são idênticos

CONCEITO de POLIMORFISMO GENÉTICO:
É variação genética (sequência de nucleotídeos) que ocorrem na população de forma
estável (não causa doença letal) encontrada em pelo menos 1% da população.
 Alelos múltiplos em um mesmo locus =

POLIMORFISMO GENÉTICO.
 Diferentes versões de um gene em um

determinado locus gênico (cromossomos
homólogos).
Tipos de Polimorfismo:
- Polimorfismo de nucleotídeo único (SNP);
- Polimorfismos de Inserção ou Deleção (Indels);
- Polimorfismos de Microssatélites (STR);
- Polimorfismos de Minissatélites (VNTR).
Os cientistas acreditam que o genoma humano tem pelo menos 10 milhões
de SNPs, e eles geram diferentes tipos de mapas desses sítios, os quais
podem ocorrer em regiões gênicas ou não gênicas.
De fato, qualquer segmento de DNA humano de aproximadamente 1.000

pb de comprimento, escolhido ao acaso, contém, em média, apenas um par
de bases que é diferente entre os dois cromossomos homólogos herdados
dos pais (assumindo que os pais não tenham parentesco).
SH - 99,9% dos genes são idênticos
A variação de 1% ocorre quase

totalmente nos SNPs (90%).
Single nucleotide polymorphism
POLIMORFISMOS DE
INSERÇÃO E DELEÇÃO
Origem:
 SUBSTITUIÇÃO: (Cerca de 66% são mutações por
substituições de uma citosina (C) por uma timina (T).
 DELEÇÃO
 ADIÇÃO
Sequência original ATC GAT CGC TCG ATC GAT CGA TCG ...
SUBSTITUIÇÃO ATC GAT CGT TCG ATC GAT CGA TCG ...
Indel DELEÇÃO ATC GAT CG_ T CGA TCG ATC GAT CGA TCG ...
Indel ADIÇÃO ATC GAT CGT CTC GAT CGA TCG ATC G...
POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
(tanden = fragmentos idênticos que se repetem um

atrás do outro por centenas a milhares de vezes).
POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
DNA REPETIDO em TANDEM ou em SÉRIES
 Apresenta um padrão no qual as sequências de 2 ou mais
nucleotídeos adjacentes se repetem.
 O número de repetições é variável o que causa densidades
diferentes;
Portanto, há três tipos de repetições em tandem:
Exemplo de repetição em TANDEM:
 DNA Satélite
 DNA Mini satélite - VNTRs
 DNA Micro satélite - STRs
POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
Telômero
Repetições Longas
Repetições Variáveis
Eucromatina
Repetições Curtas Eucromatina

POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
Conhecidos como “short tandem repeat” (STR) = Repetições Curtas em séries

POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
 São "impressões digitais" do DNA do ser humano (DNA fingerprints);
usados para determinação de vínculo genético e em perícia criminal.
DNA fingerprints
Impressão genética
(DNA FINGERPRINT)
Atualmente Microssatélites (STR) são as regiões do DNA mais usadas na técnica de DNA fingerprinting.
Alta Sensibilidade e Necessidade de Pouca Amostra.
POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
MINISSATÉLITES: Repetições em série de número variável
O número de repetições em sequência pode variar, sendo chamadas de VNTRs (Variable Number of Tandem
Repeats = Número Variável de Repetições em Sequência).
Repetição de GC
Repetição de AGCT
POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
TÉCNICA MINISSATÉLITES (VNTRs):

Repetições em série de número variável
De acordo o perfil apresentado na

figura ao lado, relacione os
suspeitos às cenas de crime e/ou à
vítima.
POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
Teste de Paternidade
POLIMORFISMOS NO
GENOMA HUMANO
O DNA NÃO É ESTÁTICO
 Mutações são a base da evolução, a fonte de toda

variabilidade genética.
 Criam os novos elementos (alelos) que irão ou não

fazer parte do conjunto genético de uma população.
 Diferentes da recombinação genética - que organiza a

variação previamente existente.
Dois Tipos de Mutações:

Mutações Gênicas (altera a sequência no gene).
Mutações Cromossômicas (altera a estrutura ou número de cromossomos).
QUALQUER ALTERAÇÃO NA SEQÜÊNCIA DE DNA
Mutações: Modificações na informação

genética que resultam em células ou
indivíduos com alterações fenotípicas
ou não.
A maioria das mutações são deletérias, sendo normalmente eliminadas pela seleção
natural. Portanto, nem todas as mutações se manifestam em um indivíduo.
Classificação das mutações quanto à origem:
Mutações espontâneas - baixa frequência.

• Pareamentos errados durante a replicação entre timina e guanina e entre
citosina e adenina;
Mutações induzidas – maior frequência

• exposição a agentes mutagênicos; maior frequência.
MUTAÇÃO GÊNICA PONTUAL
DELEÇÃO
Anemia Falciforme Síndrome de X Frágil
MUTAÇÕES CROMOSSÔMICAS
Durante a divisão celular, o material

genético deve se dividir de maneira precisa
e fidedigna, para que as células filhas
possuam o mesmo material genético!
Alterações Cromossômicas Numéricas

Agora que já sabemos o que é
Polimorfismo e quais os tipos de
Mutações nos Organismos Vivos, vamos
aprender o que é Epigenética.
O termo “epigenética” tem origem do grego, onde

“epi” significa “acima, perto, a seguir”, e estuda as
mudanças nas funções dos genes, sem alterar as
sequências de bases da molécula de DNA.
– Síndrome do X frágil;
– Síndrome ICF (Imunodeficiências, Instabilidade
centromérica e Anomalias Faciais) (Mutações na DNA
metiltransferase 3B (DNMT3B));
– Genes de supressão tumoral em tumores;
– Deficiências de Imprinting genético;
– Envelhecimento;
– Doenças cardíacas;
– Diabetes;
– Hipercolesterolemia.
O silenciamento dos genes através de
fenômenos epigenéticos nem sempre
acarreta problemas.
Exemplos de eventos em que isso

ocorre:
1. Regulação da expressão gênica;

2. Proteção do genoma contra invasão
de seqüências de fora do organismo,
por exemplo DNA viral;
3. Processos neoplásicos.
ESTUDO DIRIGIDO
 O que foi o projeto Genoma e quais os seus principais marcos para a
biologia molecular?
 O que é Polimorfismo e quais os principais tipos?
 Quais características podem ser alteradas pela sequencia variante de DNA
Polimorfismo entre os indivíduos?
 O que é o Polimorfismo de nucleotídeo único (SNP)?
 O que é o Polimorfismos de Inserção ou Deleção (Indels)?
 O que é o Polimorfismos de Microssatélites (STR)?
 O que é o Polimorfismos de Minissatélites (VNTR)?
 O que é mutação e quais os dois principais tipos de mutações?
 Quais alterações podem ocorrer na estrutura das mutações gênicas?
 Quais alterações podem ocorrer na estrutura das mutações cromossômicas
estruturais?
 Como são classificadas as mutações cromossômicas numéricas?
Centro Educacional  O que é epigenética?
Sete de Setembro
 Quais as principais alterações epigenéticas no material genético?
 Como a epigenética contribui nas aplicações biomoleculares?


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 Fins de identificação pessoal -> Avanços do século na área de genética;
 Determinar paternidade com confiabilidade;
 Disputas legais para fins de pensão alimentícia;
 Casos criminais;
 Casos médicos;
 Aconselhamento genético;
 Detecção de infecções.
TÉCNICAS DE BIOLOGIA
MOLECULAR
• Amostras de tecidos (p.ex. animais) devem ser

colocadas em álcool absoluto imediatamente após
a coleta, e trocado após 24h;
• Amostras de partes vegetais devem ser lavadas

e secadas com sílica;
• Para todas amostras congeladas em estoque, é

preferível o fracionamento em pequenas alíquotas
para que o material não sofra descongelamentos
sucessivos, que poderiam contribuir para a
oxidação do tecido e para a degradação do DNA.
MOLECULAR
Extração de DNA/RNA
Importância Uso de DNA para estudos de natureza variada:
• Diagnóstico (sensível e específico);

• Medicina (estudo do câncer; identificação doenças);
• Processos evolutivos (filogenias, estudos populacionais);
• Genoma;
• Investigações de perícia, paternidade...
Uso de RNA para estudos de natureza variada:

• Transcrição Reversa do RNA (cDNA);
• Análises de expressão gênica;
• Northern (RNA), RT-PCR, construção de bibliotecas de cDNA.
MOLECULAR
Extração de DNA/RNA
MOLECULAR
Extração de DNA da Banana https://www.youtube.com/watch?v=DJ8Iffv6ZOM&t=26s
MOLECULAR
Extração de DNA do Morango
1 - Selecionar 3 Morangos Maduros;
2 – Colocar os Morangos dentro de um saco plástico e macerá-los pressionando os morangos com os dedos
até obter uma pasta quase homogênea. Transferir a pasta de morango para um Becker;
3 – Em outro Becker, misturar 150 mL de água quente (65 ºC), uma colher de sopa de detergente e uma
colher de chá de sal de cozinha. Mexer bem com o bastão de vidro, porém devagar para não formar
espuma;
4 - Colocar cerca de 1/3 da mistura de água, sal e detergente sobre o macerado de morango. Misturar
levemente com o bastão de vidro;
5 - Incubar em temperatura ambiente por 30 minutos. Mexer de vez em quando com o mesmo bastão;
6 - Colocar uma peneira sobre um recipiente limpo e passar a mistura pela peneira para retirar os pedaços
de morango que restaram;
7 - Colocar metade do líquido peneirado em um tubo de ensaio. Colocar apenas cerca de 3 dedos no fundo
do tubo;
8 – Despejar delicadamente no tubo (pela parede do mesmo) , sobre a solução, dois volumes de álcool.
NÃO MISTURAR COM A SOLUÇÃO. Aguardar cerca de 3 minutos para o DNA começar a precipitar.
MOLECULAR
Após obtenção do DNA o que fazer?
- O DNA possui leitura de absorbância em um

comprimento de onda na faixa de 260nm;
- Proteínas à Absorbância em comprimento de
onda na faixa de 280nm;
- Razão 260/280nm mostra a pureza do DNA.
TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR)
Amplificação in vitro de uma sequência específica de DNA (* replicação in vitro)
MOLECULAR
03 Etapas:
1- Desnaturação
2- Anelamento
3- Extensão
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
Essa bactéria produz uma enzima DNA polimerase, a

qual amplifica o DNA a partir do anelamento com os
primers em altas temperaturas.
MOLECULAR
MOLECULAR
• A alta sensibilidade do método de

PCR, bem como a sua
especificidade, nos permite amplificar
uma sequência-alvo mesmo a partir
de amostras com baixo grau de
pureza e de quantidades mínimas de
DNA, o que torna o método viável
não só para a pesquisa básica mas
também para a pesquisa aplicada.
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
Técnica de Eletroforese
MOLECULAR
Neurotóxico
Brometo de etídio = Cancerígeno

MOLECULAR
Técnica de Eletroforese
MOLECULAR
MOLECULAR
Descoberta 1980
MOLECULAR
Engenharia genética= Tecnologia de

manipulação do DNA, com alteração
Qualquer aplicação tecnológica que utilize organismos vivos ou genética de seres vivos.
derivados destes para a obtenção ou modificação de processos e
produtos de interesse para a humanidade.
MOLECULAR
Disponível para os cientistas de todo o mundo,
as sequências do genoma humano constituem
uma magnífica fonte de informação biológica
que serve de base para a pesquisa científica e
descoberta de inúmeras aplicações práticas.
 Testes Genéticos;
 Farmacogênomica (vacinas e diagnóstico);
 Genômica Microbiana;
 Avaliações de Risco;
 Terapia Gênica;
 Agropecuária (animais e plantas transgênicos);
 Aplicações Ambientais;
 Bio-arqueologia, antropologia, evolução e migração humana;
 Aspectos políticos e éticos.
MOLECULAR
MOLECULAR
Esta tecnologia permite estudar os genes e os seus produtos,

obter organismos transgénicos e realizar terapia génica.
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
TÉCNICAS DE
BIOLOGIA
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
MOLECULAR
Adenovírus modificado (vírus que carrega
um pedaço do material genético do Sars-
CoV-2) instiga células do nosso corpo a
produzirem as chamadas espículas.
ATUAÇÃO EM BIOMOL
Linhas de Pesquisa
1.Citogenômica Humana
2.Genética Evolutiva e de populações humanas
3.Identificação de genes e mutações relacionadas a doenças
geneticamente heterogêneas
4.Genética do Câncer
5.Aspectos psicológicos do Aconselhamento Genético
https://www.youtube.com/watch?v=65kkggIUwXQ
ESTUDO DIRIGIDO
 Como os exames de DNA podem contribuir para as
investigações cientificas?
 Como é feita a extração de DNA ou RNA?
 Como é feita a quantificação de DNA ou RNA?
 O que é PCR?
 Quais as etapas da reação em cadeia de polimerase?
 Quais as aplicações do PCR?
 O que é o teste de Eletroforese?
 Como atuam as enzimas de restrição?
 Como a biotecnologia genética pode contribuir para a
ciência?
 Como acontece o processo de Edição genômica?
Centro Educacional
 Como acontece o processo de Clonagem molecular?
Sete de Setembro
 Quais as principais áreas de aplicação de ´tecnologias
biomoleculares?


@Kalinesousabrito
Aula 04
foi oferecido pelo
de Setembro
em parceria com o
Professor(a)
KALINE BRITO SOUSA

Biologia Molecular

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Profa. Dra. Kaline Sousa

Aula 02: Organização Gênica e Dogma Central

Aula 03: Polimorfismos, Mutação e Epigenética

Aula 04: Técnicas e Aplicações Biomoleculares

Aula 05: Perguntas e Respostas

 Sequenciamento do genoma de alguns

Os animais mais vigorosos eram escolhidos

O monge Gregor Mendel deduziu a presença

O surgimento da Biologia Molecular está atrelado

O DNA foi primeiramente

O DNA é formado a partir de subunidades simples, chamadas de nucleotídeos.

O Nucleotídeo é a unidade básica do DNA e RNA...

 Diferem uma da outra pela presença ou ausência do

 Pirimidinas (pirimídicas) são bases nitrogenadas compostas de

 Adenina e Guanina são púricas! Formadas por dois anéis.

 Citosina , Timina e Uracila são pirimídicas! Formadas por

C5’ – Liga a pentose ao grupo fosfato

 Ligação entre a pentose e a base nitrogenada:

 Ligação entre a pentose e o grupo fosfato:

Nucleotídeos são unidos por ligações fosfodiéster entre:

Novos nucleotídeos são adicionados no terminal no 3'OH …

 O SENTIDO DA FORMAÇÃO DO DNA é 5' → 3'

O grupo hidroxila do carbono-3 da

 As ligações de hidrogênio se estabelecem

Guanina se liga a Citosina através de 3 ligações de H.

Uma das fitas tem a direção exata

As ligações de hidrogênio entre

 Pirimidinas são menores que Purinas!

Porém, como a combinação é AT e CG

Isso dá uma dimensão proporcional

Duas cadeias helicoidais de DNA,

O DNA de um indivíduo contém

Resta 56% para 100%

Também é um ácido nucleico, conhecido como “cópia”

 O RNA é constituído de apenas uma única cadeia polinucleotídica, fita

Aula 02: Organização Gênica e Dogma Central

Aula 03: Polimorfismos, Mutação e Epigenética

Aula 04: Técnicas e Aplicações Biomoleculares

Aula 05: Perguntas e Respostas

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Aula 05: Perguntas e Respostas

Kaline mas o que é

Os procariotos apresentam apenas um cromossomo circular que consiste de

O DNA fica associados a proteínas

8 histonas + o DNA (forma de

Genomas pequenos, circulares, poucos genes!

Agora que já sabemos como é a

A velocidade de síntese de um novo

 Em bactérias cerca de 30.000 nucleotídeos

 Diante desses fatos, fica claro que a

SENTIDO DA REPLICAÇÃO → SEMPRE no

Estima-se que ocorra um erro por bilhão

Pode-se dizer que a replicação do

Os comprimentos dos fragmentos de

É um relativamente pequeno fragmento de DNA (com um primer de RNA

A região Beta, logo acima, orienta a

A transcrição finaliza quando a RNA Pol encontra as regiões terminadoras

Para haver o término da transcrição, haverá a formação do grampo de

Cauda Poli A - Estabiliza a molécula de

CAP5’ - Proteger o RNA da

Basicamente, a transcrição é o evento no qual o DNA sintetiza RNA!