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 O QUE É BIOLOGIA MOLECULAR?

O QUE ESTUDA A BIOLOGIA

MOLECULAR?
A Biologia Molecular é o estudo da Biologia em nível
molecular, com especial atenção ao estudo da estrutura e da
função do material genético e de seus produtos de expressão:
as proteínas.
 Sequenciamento do genoma de alguns organismos
(incluindo o ser humano);
 Terapia gênica;
 Vacinas Recombinantes;
 Plantas e animais transgênicos.

O homem começou a fazer uso da genética (Biomol) antes

mesmo de compreender alguns de seus conceitos:

Os animais mais vigorosos eram escolhidos para a reprodução,

assim como as melhores sementes eram selecionadas para o
plantio.

O monge Gregor Mendel deduziu a presença de fatores

hereditários que eram propagados de forma estável de geração
a geração (características individuais).
Mendel propôs a existência de partículas ou fatores
hereditários nas células sexuais e previu o comportamento
especial desses fatores (genes), que deveriam se separar
durante a formação de gametas.

O surgimento da Biologia Molecular está atrelado às

contribuições de Mendel (1854-1864).

Famoso experimento com ervilhas foi importante para

compreender que um organismo vivo transmite suas
informações hereditárias através de um par de unidades
elementares da hereditariedade... os genes!.
 O que são os GENES?

Genes são fragmentos de DNA que codificam proteínas do

nosso corpo responsáveis pelas nossas características.

O DNA foi primeiramente isolado a partir do núcleo de

leucócitos, por Friedrich Miescher, em 1869.

A presença de DNA em outros tipos de célula foi comprovada

nos anos seguintes.
O DNA é formado a partir de subunidades simples, chamadas
de nucleotídeos.

NUCLEOTÍDEO X NUCLEOSÍDEO
O Nucleotídeo é a unidade básica do DNA e RNA...
Então, o Nucleotídeo é formado por:
Grupo Fosfato + Pentose + Base Nitrogenada
A molécula formada pela união da pentose + a base
nitrogenada (sem o fosfato) é chamada de
Nucleosídeo!
 O GRUPO FOSFATO
Um íon poliatômico constituído de um átomo de fósforo (P)
e quatro átomos de oxigênio (O).

AS PENTOSES

Tipos: Ribose Desoxirribose (Carboidrato ou Açúcar com 05

Carbonos).
 Diferem uma da outra pela presença ou ausência
do grupo hidroxila (OH) no Carbono 2' da pentose.
É baseado nesta característica que os ácidos
nucléicos recebem o nome RNA (ribose) ou DNA
(desoxirribose).

A Desoxirribose é derivada de uma ribose que sofre a

substituição do grupo hidroxila na posição 2 por
hidrogênio, resultando na perda de um átomo de
oxigênio.
 BASES NITROGENADAS
Purinas (púricas) são bases nitrogenadas compostas por dois
anéis heterocíclicos (de átomos de carbono e nitrogênio): um
anel pirimidínico, o qual encontra-se em fusão com um anel
imidazólico.

Pirimidinas (pirimídicas) são bases nitrogenadas compostas de

apenas um único anel heterocíclico pirimidínico.

Adenina e Guanina são púricas! Formadas por dois anéis.

Citosina , Timina e Uracila são pirimídicas! Formadas por

um anel. Atenção: Uracila existe apenas no RNA!!!
C5’ – Liga a pentose ao grupo fosfato
C1’ – Liga a pentose a base nitrogenada
 LIGAÇÕES DOS NUCLEOTÍDEOS
Ligação entre a pentose e a base nitrogenada:
A ligação de uma base e o Carbono 1 (C 1') da pentose é
uma ligação covalente - LIGAÇÃO GLICOSÍDICA

Ligação entre a pentose e o grupo fosfato:

LIGAÇÃO FOSFODIÉSTER com a hidroxila ligada ao C 5' da
pentose

CADEIA POLINUCLEOTÍDICA
A molécula de DNA é, na verdade, formada por duas cadeias
polinucleotídicas, dispostas lado a lado...

Nucleotídeos são unidos por ligações fosfodiéster entre:

- Grupo fosfato (ligado ao carbono 5' da desoxirribose)
- Grupo hidroxila (OH), do carbono 3' da desoxirribose
adjacente.
O SENTIDO DA FORMAÇÃO DO DNA
O SENTIDO DA FORMAÇÃO DO DNA é 5' → 3'
O grupo hidroxila do carbono-3 da pentose do primeiro
nucleotídeo se liga ao grupo fosfato ligado a hidroxila do
carbono-5 da pentose do segundo nucleotídeo.
 COMPLEMENTARIEDADE DAS BASES
Os nucleotídeos de uma cadeia polinucleotídica do DNA
se unem através de ligações de hidrogênio, com
nucleotídeos de outra cadeia polinucleotídica, dando
forma à famosa estrutura de dupla hélice!

Complementariedade de bases:

As ligações de hidrogênio se estabelecem entre bases

nitrogenadas complementares...

Guanina se liga a Citosina através de 3 ligações de H.

Adenina se liga a Timina através de 2 ligações de H.
 FORMAÇÃO DO DNA
As cadeias polinucleotídicas na molécula de DNA são
ANTIPARALELAS : 5’-3’ e 3’-5’

Uma das fitas tem a direção exata da sua síntese (5'---3')

enquanto que a outra está invertida (3'----5')

As ligações de hidrogênio entre bases complementares são

Estabelecidas de maneira estável e precisa, por isso as fitas do
DNA ficarem em sentidos contrários.
 COMPLEMENTARIEDADE DAS BASES
• Regra de Chargaff

 Pirimidinas são menores que Purinas!

Porém, como a combinação é AT e CG. O tamanho é muito

semelhante...

Isso dá uma dimensão proporcional ao longo da molécula de

DNA!
 FORMAÇÃO DO DNA
Duas cadeias helicoidais de DNA, enroladas ao longo de
um mesmo eixo
Dupla hélice com rotação à direita As duas fitas de DNA
antiparalelas.

COMPLEMENTARIEDADE DAS BASES

O DNA de um indivíduo contém 22% de GUANINA. Com
base nesta informação determine qual o percentual de
cada uma das outras bases
G = 22% ----------- C= 22%
Somando 22%+22% = 44%
Resta 56% ---------- para 100%
Logo 56% dividido entre A-T.
A= 28% T= 28%
 E O QUE É RNA?
Também é um ácido nucleico, conhecido como “cópia” do
DNA, são bem semelhantes. Defere-se do DNA em:

O RNA é constituído de apenas uma única cadeia

polinucleotídica, fita simples (não dupla);

O RNA apresenta a pentose ribose (em vez de

desoxirribose);

O RNA não possui o nucleotídeo composto pela base timina.

Em seu lugar há o nucleotídeo formado pela base uracila.
DNA X RNA
 ORGANIZAÇÃO GÊNICA
Forma como os genes estão dispostos na célula.

A organização gênica de Eucariotos é diferente dos Procariotos.

 Eucariotos Procariotos
Animal Bactérias
Plantas
Fungos
Protozoários

PROCARIOTOS
Os procariotos apresentam apenas um cromossomo
circular que consiste de uma molécula de DNA associado
a proteínas. Quando condensada, essa estrutura forma
uma massa que se localiza aderida a membrana em
alguns pontos, o nucleóide.
 EUCARIOTOS
• Dupla Hélice:
Estrutura molecular do DNA: duas fitas ligadas por
meio de ligações de hidrogênio e em forma de
hélice

• Cromatina:
Formada por DNA e proteínas denominadas
HISTONAS

• Cromossomo:
Estado mais condensado do material genético

Nos Eucariotos o DNA encontra-se no núcleo da

célula.
A associação de DNA com histonas constitui a unidade
estrutural básica da cromatina eucariótica,
o nucleossomo!

O DNA fica associados a proteínas denominadas

histonas, que são ricas em aminoácidos básicos (carga
positiva) com alta afinidade por DNA.

8 histonas + o DNA (forma de octâmero). O

enovelamento de nucleossomos produz fibras de 30 nm
de espessura.
 ORGANIZAÇÃO GÊNICA EUCARIOTO X
PROCARIOTO
Homo sapiens
Eucariotos apresentam genomas mais complexos que
os procariotos!

• Número de genes estimado: 20.000-25.000

• Densidade gênica (reflete a distância entre os genes):
um gene a cada 127.900 pb.
Escherichia coli
• Número de genes estimado: 4.300
• Densidade gênica: um gene a cada 1.000 pb.
Genomas grandes, lineares, muitos genes!
Genomas pequenos, circulares, poucos genes!
DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR
 REPLICAÇÃO DO DNA

A velocidade de síntese de um novo filamento de DNA

em humanos é de cerca de 3.000 nucleotídeos por
minuto!

Em bactérias cerca de 30.000 nucleotídeos são
adicionados a uma cadeia de DNA nascente por minuto!

Diante desses fatos, fica claro que a maquinaria de

replicação do DNA deve funcionar de forma rápida e
precisa.

SENTIDO DA REPLICAÇÃO → SEMPRE no sentido 5’→

3’. A enzima que adiciona nucleotídeos precisa de um
terminal 3’OH livre para adicionar novos nucleotídeos.

Estima-se que ocorra um erro por bilhão de

nucleotídeos incorporados após a síntese e correção
dos erros durante e logo após o processo de replicação
do DNA.
Nosso DNA contém mais de 3 bilhões de pares de bases
nitrogenadas.
Por ser muito extenso o DNA é aberto em locais
específicos chamados Origens de replicação.

As origens de replicação formam “bolhas de replicação”

que avançam para os dois lados simultaneamente, as
aberturas laterais destas “bolhas” chamam-se forquilhas
de replicação.

Pode-se dizer que a replicação do DNA é bidirecional... A

medida que vão avançando elas vão se encontrando até
duplicar o DNA inteiro.

A REPLICAÇÃO É SEMICONSERVATIVA
Durante a divisão celular é preciso que a replicação do
material genético ocorra de forma precisa de fidedigna,
para isso, um conjunto de proteínas denominado
Replissomo, participam diretamente do processo de
replicação facilitando este processo.
A REPLICAÇÃO É SEMI-DESCONTÍNUA
Uma fita de DNA é formada continuamente no sentido da
abertura da forquilha de replicação.
A outra fita (oposta à abertura da forquilha) é formada por
fragmentos, os fragmentos de Okazaki.

Os comprimentos dos fragmentos de Okazaki são entre

1.000 a 2.000 nucleótidios de comprimento em E. coli e
entre 100 a 200 em eucariontes.

É um relativamente pequeno fragmento de

DNA (com um primer de RNA no termino
5') criado na cadeia atrasada durante a
replicação do DNA.
 O sentido da síntese do DNA será sempre no
→
sentido 5’ 3'

Principais Eventos da Replicação do DNA

Abertura (forquilha) e desenrolamento da fita
dupla
Síntese da fita contínua (ou fita líder)
Síntese da fita descontínua (ou fita atrasada)
 A região Beta, logo acima, orienta aenzima quanto a
direção da replicação!
Logo abaixo temos a região que faz Correção de possíveis
erros!

FASES DA REPLICAÇÃO
Didaticamente, o processo de replicação do DNA pode ser
dividido em três etapas:
Iniciação, Alongamento e Terminação.

TELÔMERO – São regiões terminais dos cromossomos de

eucariotos formadas por sequências bastante
conservadas e repetitivas (5’ TTAGGG TTAGGG TTAGGG
TTAGGG TTAGGG 3’).

Para evitar o encurtamento dos telômeros a cada divisão

celular os segmentos de DNA perdidos são recuperados, o
que depende de um complexo enzimático chamado
TELOMERASE
TRANSCRIÇÃO E TRADUÇÃO DE PROTEÍNAS

TRANSCRIÇÃO DO DNA
A transcrição finaliza quando a RNA Pol encontra as
regiões terminadoras (códon de parada UAA, UAG, ou
UGA), a RNA pol paralisa a transcrição mas permanece
ligada à fita dupla do DNA.
Para haver o término da transcrição, haverá a formação
do grampo de terminação e a ligação ao fator Rho
(proteína que está logo atrás da RNA Pol, na presença
dos códons de parada finaliza a transcrição se ligando a
enzima e a desligando do DNA).
Após a síntese do RNAm, o mesmo sofre algumas
alterações para que seja funcional

Cauda Poli A - Estabiliza a molécula de RNA; facilita

transporte e tradução.

CAP5’ - Proteger o RNA da degradação enzimática; auxilia

o transporte do RNA do núcleo para o citoplasma.
 TRANSCRIÇÃO
EUCARIOTO X PROCARIOTO
Basicamente, a transcrição é o evento no qual o DNA
sintetiza RNA!
Fator Sigma: Habilita a enzima reconhecer a região
promotora dos genes.

Transcrição do DNA: https://www.youtube.com/watch?

v=fynGKohVYHw

3 TRADUÇÃO DE PROTEÍNAS
 PROJETO GENOMA
Iniciado formalmente em 1990, O Projeto Genoma Humano
foi coordenado por 13 anos pelo Departamento de Energia
do Instituto Nacional de Saúde dos Estados Unidos junto
com outros 18 Países.

O projeto originalmente foi planejado para ser completado

em 15 anos, mas o desenvolvimento da tecnologia acelerou
seu final para 2003.

A data coincidiu com o aniversário de 50 anos da

publicação da estrutura do DNA por Watson e Crick que
deu início a era da biologia molecular.

Foram sequenciados todos os genes e descrita a sequência

completa de todos os nucleotídeos que formam o DNA dos
23 pares de cromossomos humanos.

Por limitações tecnológicas, cerca de 1% do genoma não

pode ser sequenciado por possuir muitas repetições de
bases nitrogenadas (centrômeros e telômeros).

A maior parte do genoma humano parece não ser

codificante e existe provavelmente por razões estruturais
e regulatórias.
 As principais metas do Projeto Genoma Humano
foram:
• Identificar todos os genes humanos;
• Determinar a sequência dos cerca de 3,2 bilhões de
pares de bases que compõem o genoma do Homo
sapiens;
• Armazenar a informação em bancos de dados;
• Desenvolver ferramentas de análise dos dados;
• Transferir a tecnologia relacionada ao Projeto para o
setor privado.

Resultados Obtidos:
• O genoma humano contem 3,2 bilhões de nucleotídeos;
• O tamanho médio dos genes é de 3.000 bases, mas varia
muito,
sendo o maior deles o gene da distrofina com 2,4 milhões
de pares de bases;
• A função de cerca de 50% dos genes descobertos é
desconhecida;
• Sequências repetidas que não codificam proteínas
constituem
mais do que 50% do genoma humano;
• Não são conhecidas as funções para as sequências
repetidas,
mas elas ajudam a entender a estrutura e a dinâmica dos
cromossomos;
• Genes estão concentrados em áreas, ao acaso, ao longo
do genoma, com vastas sequências sem código para
proteínas entre eles;
• O cromossomo 1 (o maior do genoma humano) tem o
maior número de genes - 3.168 – e o cromossomo Y, o
menor -344;
• Algumas sequências gênicas específicas foram
associadas com numerosas doenças e disfunções,
incluindo câncer de mama, doenças musculares, surdez e
cegueira;
• Os cientistas localizaram, no genoma humano, milhares
de locais nos quais há diferença de apenas uma base. Essa
informação promete revolucionar o processo de
encontrar sequências de DNA associadas com doenças
muito comuns tais como disfunções cardiovasculares,
diabetes, artrite e câncer.
 VARIABILIDADE GENÉTICA

MAPEAMENTO DA VARIABILIDADE HUMANA

Pequenas variações nas sequências de nosso DNA podem

ter o maior impacto na suscetibilidade de desenvolver ou
não uma doença e em nossas respostas a fatores
ambientais como infecção por micróbios, toxinas e drogas.
Um dos tipos mais comuns de variação de sequência é o
polimorfismo de nucleotídeos únicos (SNP – single
nucleotide polymorphism).

ESTÃO RELACIONADOS:
Traços como cor da pele,
Tipo sanguíneo
Susceptibilidade a algumas doenças
Diferentes respostas a agentes
farmacológicos.
SH - 99,9% dos genes são idênticos
 POLIMORFISMO
Conceito de polimorfismo genético:É variação genética
(sequência de nucleotídeos) que ocorrem na população de
forma estável (não causa doença letal) encontrada em pelo
menos 1% da população.:

Alelos múltiplos em um mesmo locus = POLIMORFISMO

GENÉTICO.
Diferentes versões de um gene em um determinado locus
gênico (cromossomos homólogos).

Tipos de Polimorfismo:
Polimorfismo de nucleotídeo único
(SNP);
Polimorfismos de Inserção ou Deleção
(Indels);
Polimorfismos de Microssatélites (STR);
Polimorfismos de Minissatélites (VNTR).

POLIMORFISMO SNP
Os cientistas acreditam que o genoma humano tem pelo
menos 10 milhões de SNPs (Single nucleotide
polymorphism), e eles geram diferentes tipos de mapas
desses sítios, os quais podem ocorrer em regiões gênicas ou
não gênicas.
De fato, qualquer segmento de DNA humano de
aproximadamente 1.000 pb de comprimento, escolhido ao
acaso, contém, em média, apenas um par de bases que é
diferente entre os dois cromossomos homólogos herdados
dos pais (assumindo que os pais não tenham parentesco).

SH - 99,9% dos genes são idênticos

A variação de 1% ocorre quase totalmente
nos SNPs (90%).

POLIMORFISMOS DE INSERÇÃO E DELEÇÃO

Origem:
SUBSTITUIÇÃO: (Cerca de 66% são mutações
por substituições de uma citosina (C) por uma
timina (T).
DELEÇÃO
ADIÇÃO
 POLIMORFISMOS NO GENOMA HUMANO

(tanden = fragmentos idênticos que se repetem um atrás

do outro por centenas a milhares de vezes).
DNA REPETIDO em TANDEM ou em SÉRIES
Apresenta um padrão no qual as sequências de 2 ou mais
nucleotídeos adjacentes se repetem.
O número de repetições é variável o que causa
densidades diferentes;
Portanto, há três tipos de repetições em tandem:

- DNA Satélite
- DNA Mini satélite - VNTRs
- DNA Micro satélite - STRs

Exemplo de repetição em TANDEM:

 MICROSSATÉLITES
Conhecidos como “short tandem repeat”
(STR) = Repetições Curtas em séries

São "impressões digitais" do DNA do ser humano (DNA

fingerprints); usados para determinação de vínculo
genético e em perícia criminal.

Atualmente Microssatélites (STR) são as regiões do DNA

mais usadas na técnica de DNA fingerprinting.
Alta Sensibilidade e Necessidade de Pouca Amostra.
MINISSATÉLITES: Repetições em série de número variável
O número de repetições em sequência pode variar, sendo
chamadas de VNTRs (Variable Number of Tandem
Repeats = Número Variável de Repetições em Sequência).

teste de paternidade:
 MUTAÇÕES
O DNA NÃO É ESTÁTICO
- Mutações são a base da evolução, a fonte de toda
variabilidade genética.
- Criam os novos elementos (alelos) que irão ou não fazer
parte do conjunto genético de uma população.
- Diferentes da recombinação genética - que organiza a
variação previamente existente.
Dois Tipos de Mutações:
- Mutações Gênicas (altera a sequência no gene).
- Mutações Cromossômicas (altera a estrutura ou número
de cromossomos).

Mutações: Modificações na informação genética que

resultam em células ou indivíduos com alterações
fenotípicas ou não.

- A maioria das mutações são deletérias, sendo

normalmente eliminadas pela seleção natural. Portanto,
nem todas as mutações se manifestam em um indivíduo.
Classificação das mutações quanto à origem:
Mutações espontâneas - baixa frequência.
• Pareamentos errados durante a replicação entre timina
e guanina e entre citosina e adenina;
Mutações induzidas – maior frequência
• exposição a agentes mutagênicos; maior frequência.

MUTAÇÃO GÊNICA PONTUAL

 Anemia Falciforme:

Síndrome de X Frágil:
 MUTAÇÕES CROMOSSÔMICAS

Durante a divisão celular, o material genético deve se

dividir de maneira precisa e fidedigna, para que as células
filhas possuam o mesmo material genético!

Alterações cromossômicas estruturais

 Alterações Cromossômicas Numéricas

EPIGENÉTICA

Agora que já sabemos o que é Polimorfismo e quais os

tipos de Mutações nos Organismos Vivos, vamos aprender
o que é Epigenética.

O termo “epigenética” tem origem do grego, onde “epi”

significa “acima, perto, a seguir”, e estuda as mudanças
nas funções dos genes, sem alterar as sequências de bases
da molécula de DNA.
O que é epigenética? São alterações na mudança de
expressão de um gene sem modificações na sequência de
bases do DNA.
Metilação do DNA
Modificação das histonas
Metilação
Acetilação
Fosforilação
Silenciamento de RNA
RNA interference (RNAi)

–Síndrome do X frágil;
–Síndrome ICF (Imunodeficiências, Instabilidade
centromérica e Anomalias Faciais) (Mutações na DNA
metiltransferase 3B (DNMT3B));
– Genes de supressão tumoral em tumores;
– Deficiências de Imprinting genético;
– Envelhecimento;
– Doenças cardíacas;
– Diabetes;
– Hipercolesterolemia.
O silenciamento dos genes através de fenômenos
epigenéticos nem sempre acarreta problemas.
Exemplos de eventos em que isso ocorre:
1. Regulação da expressão gênica;
2. Proteção do genoma contra invasão de sequências de
fora do organismo, por exemplo DNA viral;
3. Processos neoplásicos.

TÉCNICAS E APLICAÇÕES BIOMOLECULARES

EXAMES DE DNA

- Fins de identificação pessoal -> Avanços do século na

área de genética;
- Determinar paternidade com confiabilidade;
- Disputas legais para fins de pensão alimentícia;
- Casos criminais;
- Casos médicos;
- Aconselhamento genético;
- Detecção de infecções.

TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

• Amostras de tecidos (p.ex. animais) devem ser colocadas

em álcool absoluto imediatamente após a coleta, e trocado
após 24h;
• Amostras de partes vegetais devem ser lavadas e secadas
com sílica;
 • Para todas amostras congeladas em estoque, é preferível
o fracionamento em pequenas alíquotas para que o
material não sofra descongelamentos sucessivos, que
poderiam contribuir para a oxidação do tecido e para a
degradação do DNA.

Extração de DNA/RNA

Importância Uso de DNA para estudos de natureza variada:

• Diagnóstico (sensível e específico);
• Medicina (estudo do câncer; identificação doenças);
• Processos evolutivos (filogenias, estudos populacionais);
• Genoma;
• Investigações de perícia, paternidade...
- Uso de RNA para estudos de natureza variada:
• Transcrição Reversa do RNA (cDNA);
• Análises de expressão gênica;
• Northern (RNA), RT-PCR, construção de bibliotecas de cDNA.

Extração de DNA/RNA:
 - Extração de DNA do Morango
1 - Selecionar 3 Morangos Maduros;
2 – Colocar os Morangos dentro de um saco plástico e
macerá-los pressionando os morangos com os dedos
até obter uma pasta quase homogênea. Transferir a pasta
de morango para um Becker;
3 – Em outro Becker, misturar 150 mL de água quente (65
oC), uma colher de sopa de detergente e uma
colher de chá de sal de cozinha. Mexer bem com o bastão
de vidro, porém devagar para não formar
espuma;
4 - Colocar cerca de 1/3 da mistura de água, sal e
detergente sobre o macerado de morango. Misturar
levemente com o bastão de vidro;
5 - Incubar em temperatura ambiente por 30 minutos.
Mexer de vez em quando com o mesmo bastão;
6 - Colocar uma peneira sobre um recipiente limpo e passar
a mistura pela peneira para retirar os pedaços
de morango que restaram;
7 - Colocar metade do líquido peneirado em um tubo de
ensaio. Colocar apenas cerca de 3 dedos no fundo
do tubo;
8 – Despejar delicadamente no tubo (pela parede do
mesmo) , sobre a solução, dois volumes de álcool.
NÃO MISTURAR COM A SOLUÇÃO. Aguardar cerca de 3
minutos para o DNA começar a precipitar.

Após obtenção do DNA o que fazer?

Quantificação do DNA
- O DNA possui leitura de absorbância em um
comprimento de onda na faixa de 260nm;
- Proteínas à Absorbância em comprimento de onda na
faixa de 280nm;
- Razão 260/280nm mostra a pureza do DNA.
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR)

Amplificação in vitro de uma sequência específica de

DNA (*replicação in vitro)
01.

02.
 03.

* PCR Taq DNA Polimerase

O nome Taq vem de Thermus aquaticus, a qual é uma
bactéria encontrada sobrevivendo a altas temperaturas
em geisers no Yellow Stone National Park.
Essa bactéria produz uma enzima DNA polimerase a qual
amplifica o DNA a partir do anelamento com os primers
em altas temperaturas.
 PCR em tempo real
- Aplicações:
Quantificação
Detecção de carga viral
Determinação do número de cópias de um gene
Análise da expressão gênica

Qual o princípio da PCR?

Amplificação enzimática de uma sequência de DNA,
explorando sua capacidade de duplicação
A alta sensibilidade do método de PCR, bem como a sua
especificidade, nos permite amplificar uma sequência-alvo
mesmo a partir de amostras com baixo grau de pureza e de
quantidades mínimas de DNA, o que torna o método viável
não só para a pesquisa básica mas também para a pesquisa
aplicada.

Aplicações da PCR

Os produtos amplificados por PCR podem ter as

seguintes utilidades/ aplicações:
01. Detecção de deleções/ inserções determinadas pela
geração de produtos amplificados que apresentam
alterações em seu tamanho.
02. Detecção de mutações pontuais (substituição de
bases), conhecidas ou não, que geram polimorfismos
genéticos podem ser determinadas pelas ações das
enzimas de restrição ou através do sequenciamento.
03. No diagnóstico pré-natal ou pré-implantacional
(particularmente para doenças herdadas).
04. Na tipagem para transplantes de órgãos e
susceptibilidade para doenças auto-imunes específicas
(detecção de polimorfismo para HLA).
05. No diagnóstico e prognóstico de doenças de ordem
genética, como câncer, através do estudo dos genes
relacionados a essas doenças.
06. Na medicina forense (DNA fingerprint)
07. No diagnóstico de doenças infecciosas por agentes
patogênicos diversos.
 Controle de contaminação
- Fluxo laminar
- Separação de áreas
- Desinfecção frequente e luz ultravioleta
- Autoclavagem do material biológico
- Acondicionamento como lixo hospitalar

Processamento:
Técnica de Eletroforese

Eletroforese em gel
Enzimas de restrição - Procedimento:
 Aplicações das técnicas

BIOTECNOLOGIA

Qualquer aplicação tecnológica que utilize organismos

vivos ou derivados destes para a obtenção ou modificação
de processos e produtos de interesse para a humanidade.
Engenharia genética= Tecnologia de manipulação do DNA,
com alteração genética de seres vivos.

Disponível para os cientistas de todo o mundo, as

sequências do genoma humano constituem uma magnífica
fonte de informação biológica que serve de base para a
pesquisa científica e descoberta de inúmeras aplicações
práticas.
- Testes Genéticos;
- Farmacogênomica (vacinas e diagnóstico);
- Genômica Microbiana;
- Avaliações de Risco;
- Terapia Gênica;
- Agropecuária (animais e plantas transgênicos);
- Aplicações Ambientais;
- Bio-arqueologia, antropologia, evolução e migração
humana;
- Aspectos políticos e éticos.
Esta tecnologia permite estudar os genes e os seus
produtos,obter organismos transgénicos e realizar
terapia génica.

Combate a Dengue usando a Biotecnologia

Etapas da produção da vacina:
 BIOBALÍSTICA
Técnica que consiste em disparar microprojéteis em alta
velocidade (1500 km/h), para introduzir DNA em tecidos in
vitro.
SONDAS DE DNA
São pedaços de fitas de DNA com sequência conhecida
marcadas com radiação com corante luminescente que
serve para localizar os genes de uma geneteca.
EDIÇÃO GENÔMICA

COVID - 19
 Testes para COVID - 19:

Adenovírus modificado (vírus que carrega um pedaço do

material genético do Sars-CoV-2) instiga células do nosso
corpo a produzirem as chamadas espículas.
 ATUAÇÃO EM BIOMOL
Aconselhamento Genético e Genômica Humana

- Linhas de Pesquisa
1.Citogenômica Humana
2.Genética Evolutiva e de populações humanas
3.Identificação de genes e mutações relacionadas a doenças
geneticamente heterogêneas
4.Genética do Câncer
5.Aspectos psicológicos do Aconselhamento Genético

https://www.youtube.com/watch?v=65kkggIUwXQ

OBRIGADA
 E-book oferecido pelo
Centro Educacional Sete de Setembro
em parceria com o Professora Kaline Sousa para
o curso de "Biologia Molecular".