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Imunohematologia Sistema ABO

Imunohematologia Sistema ABO

Curso Tcnico de Biotecnologia


Imunologia, Parasitologia e Hematologia
Prof. Juliana Coelho e Juliana Barbosa

INTRODUO- CONCEITOS IMPORTANTES


Imunohematologia:
compreende
classificao

estudo
dos

grupos

sanguneos e a ocorrncia de
reaes

transfusionais

entre

antgenos e anticorpos

Fonte: http://byoline.com.br/site/tag/imunohematologia acesso 13/03/2015

INTRODUO- CONCEITOS IMPORTANTES


Antgeno:

Toda

molcula

reconhecida como estranha pelo


organismo interage com Ac.
Anticorpos: imunoglobulinas, do
tipo

glicoprotenas

de

formato

globular secretadas por Linfcitos B


que conferem a caracterstica de
especificidade da Resposta Imune
Fonte: www.nlm.nih.gov, acesso 13/03/2015

INTRODUO- CONCEITOS IMPORTANTES


Anticorpos:
o

Anticorpos naturais: anticorpos formados


contra

antgenos

no

presentes

no

organismo e sem necessidade de contato


prvio.
Ex: ac sistema ABO

o Anticorpos

irregulares:

anticorpos

formados a partir da exposio a um


antgeno . Ocorrncia no esperada.
Ex: aloimunizao pelo sistema Rh
Fonte: www.nlm.nih.gov, acesso 13/03/2015

INTRODUO- CONCEITOS IMPORTANTES


Interao

Antgeno-Anticorpo:

tradicionalmente

classificada em primria, secundria e terciria.


o PRIMRIA: ligao ag-ac.
o SECUNDRIA:

efeitos imediatos desta ligao, como a

precipitao ou a aglutinao dos complexos.


o TERCIRIA: compreende-se os efeitos biolgicos gerados,
como o processo inflamatrio iniciado pela ativao do
sistema complemento ou pela degranulao de mastcitos e
basfilos.
Fonte: LABIMUNO UFBA, acesso 13/03/2015

INTRODUO- CONCEITOS IMPORTANTES


Ligao do Antgeno ao Anticorpo

A ligao entre Ag e Ac resultado da conformao do Ag e do stio receptor


do Ac e das interaes qumicas entre eles
Fonte: LABIMUNO UFBA, acesso 13/03/2015

INTRODUO- CONCEITOS IMPORTANTES


Ligao do Antgeno ao Anticorpo- Reao de aglutinao

o agrupamento de partculas, usualmente por


molculas de Ac que se ligam a Ag na superfcie de
partculas adjacentes.

Fonte: Prof. Dr. Luiz Carlos de Mattos, Laboratrio de Imunogentica Molecular, Hemocentro de So Jos do Rio Preto

MEMBRANA PLASMTICA
Definio: filme muito fino, composto de lipdeos e
protenas que permanecem unidos por interaes no
covalentes.
A membrana plasmtica importante para a vida da clula,
pois, alm de englobar e definir seus limites, ela mantm as
diferenas essenciais entre os meios intra e extracelular.

Fonte: Jali Santos, Curso de Imunohematologia, 2009. Figura: http://pt.wikipedia.org/wiki/Membrana_plasm%C3%A1tica acesso 13/03/2015

Fonte: Jali Santos, Curso de Imunohematologia, 2009.

Fonte: Jali Santos, Curso de Imunohematologia, 2009.

Fonte: Jali Santos, Curso de Imunohematologia, 2009.

MEMBRANA ERITROCITRIA
Os eritrcitos so altamente deformveis a fim de poderem circular atravs
de vasos capilares cuja luz bem inferior ao seu prprio dimetro. Eles
passam apertados por esses capilares, mas readquirem depois nos maiores
vasos seu dimetro inicial (7m).
A capacidade de deformao dos ER decorrem da estrutura anatmica muito
especial de sua membrana complexa, que contm:
o

39,5% de protenas

35,1% de lipdeos

5,8% de carboidratos esses ltimos presentes no lado extracelular da


bicamada lipdica.

Fonte: Julianan Barbosa, Hematopoese, 2014

ANTGENOS ERITROCITRIOS
As protenas e glicoprotenas da superfcie dos ER funcionam
como antgenos, sendo conhecido mais de 250 tipos diferentes.
Estes antgenos se agrupam em 29 sistemas, sendo os mais
importantes o ABO, Rhesus e o MNS.
So aloantgenos e so transmitidos hereditariamente e
independentes uns dos outros, de acordo com as leis
mendelianas e os genes que os transmitem so dominantes,
logo, quando um gene est presente, o antgeno se expressa.
Fonte: Julianan Barbosa, Hematopoese, 2014

GRUPO- ABO
O sistema ABO foi descoberto em 1900 por Landsteiner.
Em 1902, Von de Castello e Sturli descobriram o grupo AB.
Nesses

experimentos,

verificou-se

que

ocorria

uma

aglutinao dos glbulos vermelhos devido fixao de


anticorpos

aos

membrana.

Fonte: Julianan Barbosa, Hematopoese, 2014

antgenos

especficos

localizados

na

GRUPO- ABO

Fonte: Aula do Professor Herlei Ribeiro, Sistema ABO.

GRUPO- ABO
Os antgenos A e B podem aparecer
isolados ou juntos e definem os tipos
sanguneos.
Relao de codominncia: A e B.
Os

dois

genes

herdados

se

expressam igualmente
Gene O considerado silencioso pois
no expressa nenhum Ag detectvel
pois a enzima produzida no
funcional
Fonte: Julianan Barbosa, Hematopoese, 2014

GRUPO- ABO
No sistema ABO existem 2 tipos de

protenas atuando como antgenos


conhecidos como Aglutinognio e

Aglutinognio
Tipo
Gentipo (na membrana
sanguneo
das hemcias)

IA IA ou IA i

IB IB ou IB i

AB

IA IB

AB

ii

Ausncia

so determinados por um alelo.


o Aglutinognio (Antgeno) A

determinado por alelo IA .


o Aglutinognio (Antgeno) B

determinado por alelo IB .


o O alelo i no produz antgeno.
Fonte: Julianan Barbosa, Hematopoese, 2014

Tipo O

Tipo A

Tipo B
Fonte: Jali Santos, Curso de Imunohematologia, 2009.

GRUPO- ABO

Os anticorpos dos indivduos que


expressam os aglutinognios so
denominadas Aglutininas.
Anticorpos anti-A e anti-B dos
indivduos B e A, respectivamente,
so em sua maioria de classe IgM .

Os anticorpos anti-AB de
indivduos do grupo O so de
classe

IgG

podem

presentes em altos ttulos.


Fonte: Aula do Professor Herlei Ribeiro, Sistema ABO. Figura: http://byoline.com.br/site/tag/imunohematologia acesso 13/03/2015

estar

GRUPO- ABO

AGLUTININAS

Os gentipos so manifestados por


trs alelos: IA , IB , i.

I deve-se palavra Isoaglutinao.

Quando um individuo recebe uma


transfuso de sangue de um tipo
diferente do seu no compatvel
ele produzir anticorpo contra o
antgeno
que

eritrocitrio
dar

uma

estranho,
reao

antgeno/anticorpo violenta.
Fonte: http://byoline.com.br/site/tag/imunohematologia acesso 13/03/2015

TIPAGEM SANGUNEA - ABO

Esse teste feito para se descobrir qual o tipo sanguneo de uma


pessoa.
O teste consiste em colocar em uma lmina um pouco de amostra de
sangue da pessoa, depois acrescentado um pouco de soro Anti-A e um
pouco de soro Anti-B sem misturar os dois.
Sendo assim, pessoas com antgeno A apresentaro reao de
aglutinao quando acrescentado soro Anti-A. J nas pessoas com
antgeno B, o inverso, reagiro ao soro Anti-B. Pessoas com os dois
antgenos A e B reagiro aos dois soros e aqueles sem nenhum antgeno
no apresentaro qualquer reao.

GRUPO- ABO

GRUPO- ABO

FonteJuliana Barbosa, Hematopoiese, 2014

GRUPO- ABO

GRUPO Rh

Esse sistema sanguneo recebeu esse nome


por ter sido o resultado de pesquisas feitas
com uma espcie de macacos, a MACACA
Rhesus (macaca reso).

Pesquisadores verificaram que ao injetar


sangue

do

macaco

em

cobaias,

essas

produziam anticorpos.

Esses anticorpos foram devolvidos ao sangue


do macaco e ocorreu a coagulao.

Chegaram concluso que no sangue do


macaco

existia

um

fator

(antgeno)

chamaram de fator Rh. O anticorpo criado na


cobaia foi denominado Anti-Rh.
Fonte: Pontifcia Universidade Catlica de Gois Departamento de Biologia

GRUPO Rh

Fonte: Pontifcia Universidade Catlica de Gois Departamento de Biologia

GRUPO Rh

Existem

seis

tipos

comuns

de

Rh,

classificados como C, D, E, c, d, e.

O indivduo que apresenta o antgeno C


no tem o antgeno c e vice-versa.

Fentipos Gentipos

O antgeno D o mais prevalente na


populao

considerado

mais

antignico dentre todos os fatores Rh.

O fator Rh encontrado nas hemcias,


verificando esses pesquisadores que ele
obedece s leis da hereditariedade, sendo
o Rh

positivo um fator dominante em

relao ao Rh negativo.
Fonte: Pontifcia Universidade Catlica de Gois Departamento de Biologia

Rh+

RR, Rr

Rh-

rr

GRUPO Rh
Em caucasides, nos indivduos Rh negativos, o gene RHD
deletado. Em negros e outras populaes, foram descritas
mutaes pontuais, delees parciais e recombinaes.
Em indivduos Rh negativos necessria a pesquisa da variante
fraca do antgeno Rh(D), chamada variante DU, atravs de reao
de Coombs para DU.
No antgeno D fraco (DU) h uma reduo quantitativa do nmero
de stios antignicos.

ERTROBLASTOSE FETAL
Uma doena provocada pelo fator Rh a eritroblastose fetal
ou

doena

hemoltica

do

recm-nascido

(DHRN),

caracterizada pela destruio das hemcias do feto ou do


recm-nascido
A me Rh-negativa e o pai Rh-positivo, tendo o feto herdado o
Rh-positivo do pai. O organismo materno inicia a produo
de aglutininas anti-Rh pela exposio ao Rh do feto.

ERTROBLASTOSE FETAL
As aglutininas atravessam a placenta, o que tem como
consequncia a aglutinao das hemcias do feto, as quais em
seguida se hemolisam.
Na maioria dos casos a anemia da DHRN resulta em morte do
feto, porm as crianas que sobrevivem podem apresentar
retardo mental permanente ou leses nas reas motoras do
crebro em razo da deposio da bilirrubina convertida
atravs da hemoglobina liberada pelas hemcias hemolisadas.

Fonte: www.lookfordiagnosis.com acesso em 03/03/2015

ERTROBLASTOSE FETAL
As mes Rh-negativas na primeira gravidez geralmente no
desenvolvem aglutininas anti-Rh suficientes para causar
danos ao feto.
Aproximadamente 3% dos segundos filhos apresentam sinais
de DHRN, e esta proporo aumenta de forma progressiva
com as gestaes subseqentes.
Na preservao pode ser utilizado o antissoro anti-Rh (+).
Assim, sempre que a me apresentar sangue Rh,
fundamental saber o tipo sanguneo do pai.

ERTROBLASTOSE FETAL
Para preveno numa segunda gestao recomenda-se a
administrao endovenosa de gamaglobulina anti-Rh, logo
aps o nascimento do primeiro beb.
Essa substncia provocar o bloqueio do processo de sntese
de anticorpos contra o sangue Rh+ do feto. A me recebe uma
dose passiva temporria de anticorpos que destruir as
clulas encontradas na corrente sangunea que sejam Rh+,
impossibilitando, deste modo, que me produza anticorpos
permanentes.

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Importncia do estudo dos antgenos
o Incompatibilidades transfusionais
o Incompatibilidades Materno fetal
o Transplantes

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Tipagem ABO doador e receptor
o Direta
o Prova reversa
Tipagem Rh
o Pesquisa de D fraco
Pesquisa de anticorpos irregulares
o Teste de coombs direto- TAD
o Teste de coombs indireto TAI
Painel de hemcias
Prova cruzada maior e menor

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


ABO

Testes diretos ABO e Rh


o Verificam a presena do antgeno eritrocitrio
o Utilizao das hemcias do doador e receptor
Podem ser realizados em :
Tubo
Lmina
Gel de centrifugao

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


ABO

Tipagem direta hemcias (paciente) x soro comercial (anti-A;


anti-B): pesquisa a presena de antgenos

na membrana de

eritrcitos.
Tipagem reversa plasma ou soro (paciente) x hemcias a 5%
fenotipadas (A1 e B): pesquisa a presena de anticorpos.

A) Em lmina
1. Com o auxlio de uma lanceta fure o dedo do colega e pingue uma gota de
sangue em trs reas sobre a lmina;

2. Pingue uma gota de aglutinina em cada gota de sangue na seguinte


ordem: Anti-A, Anti-D e Anti-B.

3. Com ajuda do aglutinoscpio ilumine abaixo da lmina;


4. Observe a presena ou no de aglutinao.

Preparao da soluo de
hemcias

B) Em tubo
1. Identificar 3 tubos de hemlise e colocar uma gota do reagente
anti-A no 1 tubo, anti-B no 2 tubo e anti-D no 3 tubo;

2. Adicionar uma gota da suspenso de hemcias 5% a cada


tubo.
3. Centrifugar por 15 segundos a 3.400 r.p.m.
4. Ressuspender delicadamente o boto de hemcias e
examinar a presena ou no de aglutinao.

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Rh

Mtodo direto
o Verificao da presena de antgeno Rh.
o Pode ser realizado em lmina, tubos e carto de gel.
o

As tcnicas so as mesmas utilizadas para verificao do


sistema ABO.

o A reao de aglutinao positiva indica a presena do antgeno


D na membrana.
o A reao de aglutinao negativa nem sempre indica ausncia
de antgeno D na membrana teste da presena de D fraco

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Rh teste do D fraco

Incubar os dois tubos da reao anterior por 30 minutos em banho


maria a 37C

Centrifugar a 3.400 rpm 15

Ressuspender delicadamente e proceder a leitura


o Teste + para aglutinao no tubo D terminar o teste
o Teste para aglutinao no tubo D- continuar o teste

Lavar as hemcias com sol fisiolgica por 3 vx 3.500 rpm por 15.

Adicionar duas gotas do soro de Coombs a cada um dos tubos e


homogeneizar.

Centrifugar e proceder a leitura.

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Soro de coombs

Anticorpo anti-imunoglobulina humana monoespecfico


o Anti-gama: anti-IgG

Dirigidos contra imunoglobulinas humanas

Preparado a partir de soro de coelhos e/ou cabras imunizados frao


IgG (gamaglobulina) do soro humano.

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Identificao de ac. irregulares

Identificao de ac irregulares realizado atravs do teste de


Coombs, que pode ser:
o Coombs direto ou TAD: pesquisa de anticorpos fixos a
membrana eritrocitria.
Ex: DHRN, anemias autoimunes, transfuses incompatveis.
o

Coombs indireto ou TAI: detecta a presena de anticorpos


livres no soro.

Ex: sensibilizao materna por gravidez e prova cruzada de


transfuso e doao de orgos

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Coombs direto (TCD)

Coleta com Edta lavar as hemcias.


Realizar suspenso de hemcias a 5%.
Pingar em um tubo 2 gotas da suspenso.
Lavar mais uma vez, decantando o sobrenadante.

Adicionar 2 gotas de soro de Coombs e homogeneizar.

Centrifugar por 15 a 3.400 rpm.

Proceder a leitura.

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Coombs direto (TCD) - Interpretao

Resultado negativo: ausncia de aglutinao.


o As hemcias no esto sensibilizadas.

Resultado positivo: presena de aglutinao


o As hemcias esto sensibilizadas com anticorpos.
o Para identificao do ac, realizar eluio.

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Coombs direto (TCD)

Fonte: http://www.profbio.com.br/aulas/hemato2_07.pdf acesso 13/03/2015

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Coombs Indireto

Pesquisa de anticorpos irregulares livres no plasma

Tcnica:
1.

Preparar uma suspenso salina a 5% de hemcias conhecidas quanto


ao antgeno e cujo anticorpo correspondente se deseja detectar

2. Colocar 2 gotas da suspenso em um tubo e lavar 3x com soluo


salina.
3. Adicionar 2 gota do soro a ser detectado
4. Misturar e incubar em banho a 37
5.

Lavar 3x com soluo salina e adicionar 2 gotas de soro de Coombs.


Proceder a leitura

Coombs Indireto

Fonte: http://adamogama.blogspot.com.br/2011/05/teste-de-coombs-indireto.html acesso 13/03/2015

TESTES LABORATORIAIS DA IMUNOHEMATOLOGIA


Prova Cruzada

Utilizada para transfuses sanguneas ou transplante de rgos

Finalidade de determinar a presena de anticorpos pr-formados no


sangue do receptor contra as clulas do possvel doador

Homogeneizar e submeter os tubos ao teste de Coombs indireto

Verificar a presena ou no de aglutinao

FORA NA PERUCA!!!!!!!
BONS ESTUDOS!!!!