Imunologia - tipagem sanguínea

APRESENTAÇÃO

O estudo e a classificação dos grupos sanguíneos por meio de reações imunológicas entre
aglutinogênio e aglutinina têm um nome: imuno-hematologia. A partir desse princípio, se realiza
a tipagem sanguínea: teste que estabelece o tipo sanguíneo do sistema ABO (A, B, AB ou O) e
fator Rh (positivo ou negativo) de uma pessoa

Você sabe qual a importância dessa informação? Em uma transfusão de sangue, por exemplo,
pode ocorrer a incompatibilidade entre o doador e o receptor, considerando que, na maioria das
vezes, essas transfusões são de emergência. Se você sabe o seu tipo de sanguíneo, isso não
acontece. Nesta Unidade de Aprendizagem, você vai estudar as metodologias necessárias para a
realização da tipagem sanguínea, as quais são fundamentais para a acurácia do teste, tais como
Coombs direto, indireto, prova direta e reversa. Também vai aprender o que é eritroblastose
fetal.

Bons estudos.

Ao final desta Unidade de Aprendizagem, você deve apresentar os seguintes aprendizados:

• Diferenciar os grupos sanguíneos quanto ao sistema ABO e ao sistema Rh, considerando

aglutininas e aglutinogênios.
• Identificar os testes utilizados durante uma tipagem sanguínea.
• Justificar a importância da realização da tipagem sanguínea em caso de transfusão e/ou em
caso de eritroblastose fetal.

DESAFIO

Considere o cenário atual: aproximadamente 85% das pessoas, em geral, são Rh positivas, pois
elas possuem fator Rh em suas hemácias. Em geral, 15% das pessoas não possuem o fator Rh
em suas hemácias e são, por isso, classificadas de Rh negativas, produzindo anticorpos no
plasma somente quando são sensibilizadas.
Essa sensibilização pode ocorrer em pessoas que realizam transfusões e/ou em mulheres durante
a gravidez. A eritroblastose fetal é uma doença que deve ser investigada principalmente em uma
segunda gravidez de um filho(a) com o mesmo sistema Rh do filho(a) da primeira vez.

A atenção também deve ser direcionada para essa doença em mulheres que receberam
transfusões prévias a essa gravidez. Sobre a eritroblastose, que é caracterizada pela destruição
das hemácias do feto ou do recém-nascido, e fatores imuno-hematológicos envolvidos, explique:

1) Quais são os grupos sanguíneos da mãe e do feto, quanto ao sistema Rh, que poderiam
desenvolver a eritroblastose fetal? Explique a importância de investigar a eritroblastose fetal em
uma segunda gravidez e/ou em mulheres que realizaram transplante antes da primeira gravidez.

2) Por que a ocorrência da eritroblastose fetal é menor quando há incompatibilidade sanguínea

do sistema ABO entre mãe e feto?

3) Após uma gravidez de uma mãe Rh negativa e um filho Rh positivo, qual procedimento deve
ser realizado a fim de que a mãe não seja sensibilizada?

4) Cite um procedimento que deve ser executado em um recém-nascido com eritroblastose.

INFOGRÁFICO

Veja no infográfico os reagentes para a tipagem sanguínea e entenda como se forma o sistema
ABO (tipagem direta e tipagem reversa) e o sistema Rh (tipagem Rh).
 CONTEÚDO DO LIVRO

Você sabe o que aconteceu para que hoje uma transfusão sanguínea seja considerada segura? Os
estudos na área de imuno-hematologia eritrocitária propiciaram essa segurança e melhoraram o
diagnóstico laboratorial de quadros potencialmente graves e fatais, como a doença hemolítica do
feto e do recém-nascido e a anemia hemolítica autoimune. Entre os avanços científicos
observados desde o início do século passado, podem ser destacadas as descobertas do grupo
sanguíneo ABO, em 1900, do antígeno RhD, em 1939, e do teste de Coombs, em 1945.

O livro Técnicas básicas de laboratório clínico é a base teórica desta Unidade de Aprendizagem,
e, nos trechos selecionados para seu estudo, você vai conhecer mais detalhes sobre essas
descobertas e sua importância atualmente. Inicie sua leitura na Introdução da Lição 4-3 e vá até
o final da página 406. Mais adiante, na Lição 4-4, a partir da página 420, inicie sua leitura na
Introdução e termine na página 424.

Boa leitura.
BARBARA H. ESTRIDGE
ANNA P. REYNOLDS
 Tradução:
Ana Lucia Peixoto de Freitas
Professora Adjunta do Departamento de Análises da Faculdade de Farmácia da
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Mestre em Microbiologia pela Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre (UFCSPA)
Doutora em Ciências Médicas pela UFRGS
Beatriz A. Rosário
Graduada em Farmácia Industrial pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)
Ex-professora Substituta de Controle de Qualidade da Faculdade de Farmácia da UFRJ
Joiza Lins Camargo
Chefe da Unidade de Bioquímica e Imunoensaios do Serviço de Patologia Clínica do
Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Mestre em Bioquímica Clínica pela Universidade de Londres
Doutora em Ciências Médicas: Endocrinologia pela UFRGS
Simone Martins de Castro
Professora Adjunta do Departamento de Análises da Faculdade de Farmácia da UFRGS
Farmacêutica-Bioquímica Responsável Técnica do Laboratório de Referência em
Triagem Neonatal do RS – HMIPV – PMPA 
Mestre em Farmacologia pela Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Doutora em Ciências Biológicas (Bioquímica) pela UFRGS

E82t Estridge, Barbara H.

Técnicas básicas de laboratório clínico [recurso eletrônico] /
Barbara H. Estridge, Anna P. Reynolds ; tradução: Ana Lucia
Peixoto de Freitas ... [et al.] ; revisão técnica: Afonso Luis
Barth, Suzane Silbert. – 5. ed. – Dados eletrônicos. – Porto
Alegre : Artmed, 2011.

Editado também como livro impresso em 2011.

ISBN 978-85-363-2536-1

1. Farmacologia. 2. Laboratório farmacêutico. I. Reynolds,

Anna P. II. Título.

CDU 615.12

Catalogação na publicação: Ana Paula M. Magnus – CRB-10/Prov-009/10

 LIÇÃO 4-3 Imunoematologia: Determinação do Grupo ABO 401

determinação direta – uso de antissoros conhecidos (anticorpos) para identificar antígenos desconheci-
dos nas células de um paciente, tipagem direta, grupamento direto.
determinação reversa – uso de células conhecidas (antígenos) para identificar anticorpos desconhecidos
no sangue ou no plasma do paciente.
genes – segmentos de DNA que codificam proteínas específicas ou enzimas, unidades estruturais da here-
ditariedade.
teste de histocompatibilidade – realização de ensaios para determinar se o tecido do doador e o do recep-
tor são compatíveis.

INTRODUÇÃO lulas vermelhas do sangue, assim como em plaquetas e leucócitos.

O principal sistema de grupo sanguíneo é o sistema ABO, que
agrupa os indivíduos em um dos quatro principais tipos sanguí-
neos: A, B, AB ou O. Os testes de determinação do grupo ABO
são baseados no princípio da aglutinação, realizados pelos méto-
dos de lâmina, tubo ou gel. O método por lâmina é rápido e fácil e
não precisa de equipamento especial. Entretanto, os métodos de
tubo e gel são mais sensíveis do que o teste de lâmina e são usados
em laboratórios clínicos.
O grupo ABO do paciente e do doador deve ser determi-
nado antes de fazer a transfusão de sangue. A determinação do
grupo sanguíneo também deve ser feita antes do transplante de
órgãos e em questões de paternidade, investigações forenses e es-
tudos genéticos. Esta lição apresenta informações sobre o sistema
de grupo sanguíneo ABO e os métodos em lâmina, tubo e gel uti-
lizados para a determinação do grupo ABO.
O SISTEMA ABO
O sistema de grupo sanguíneo ABO foi descoberto por Karl Lan-
dsteiner em 1900. Todas as pessoas podem ser alocadas em um
dos quatro principais grupos: A, B, AB ou O. Nos Estados Uni-
dos, aproximadamente 45% da população é do grupo O e 40%
é do grupo A. Apenas 11% da população é do grupo B e 4% é
do grupo AB (Tab. 4-10). A distribuição difere muito de acordo
com os grupos raciais e étnicos. Em torno de 63% da população
mundial é do grupo O.
Antígenos do grupo sanguíneo
A determinação do grupo ABO é baseada na presença ou ausên-
cia de dois antígenos de grupo sanguíneo, chamados de A e B.
Esses antígenos são encontrados nas membranas celulares de cé-
Os antígenos do grupo sanguíneo são produto de genes alélicos
herdados. Cada pessoa herda um alelo de grupo sanguíneo do
pai e outro da mãe – o alelo A, B ou O. A e B são codominantes
em relação um ao outro. Portanto, as pessoas que herdam os ale-
los A e B expressarão ambos os antígenos. Uma pessoa que herda
um alelo O e um alelo A (ou B) vai expressar apenas o antígeno
A (ou B). As pessoas que herdam dois alelos O não possuem os
antígenos A e B expressos.
As pessoas são agrupadas de acordo com os antígenos pre-
sentes nas células do sangue: um indivíduo que é do grupo A
possui antígeno A; alguém que é do grupo B possui antígeno B;
uma pessoa que é do grupo AB possui os antígenos A e B, e quem
é do grupo O não apresenta o antígeno A e nem o antígeno B
(Tab. 4-11). Os procedimentos de determinação do grupo ABO
são os testes de aglutinação. Os antígenos A e B nas células ver-
melhas do sangue do paciente ou do doador são detectadas ao
reagir com anticorpos conhecidos (comerciais) em um procedi-
mento chamado determinação direta, ou agrupamento direto.
Anticorpos de grupo sanguíneo
A descoberta dos antígenos A e B foi acompanhada pela des-
coberta dos correspondentes anticorpos de grupo sanguíneo
ABO no sangue humano.
Os anticorpos do grupo sanguíneo são nomeados de acor-
do com o antígeno a que eles reagem: um anticorpo que reage
com antígeno A (células vermelhas A do sangue) é chamado de
anti-A; um anticorpo que reage com antígeno B (células verme-
lhas B do sangue) é chamado de anti-B. O grupo sanguíneo O é
chamado assim porque as células vermelhas do sangue não pos-
suem antígeno A nem antígeno B; portanto, não existe anticorpo
anti-O. Os anticorpos do grupo sanguíneo ABO ocorrem natu-
ralmente no soro e são da classe da imunoglobulina M (IgM).
Se um antígeno estiver faltando nas células de uma pessoa, o

TABELA 4-10 Frequências de grupos sanguíneos nos

Estados Unidos* TABELA 4-11 Antígenos e anticorpos do sistema ABO
GRUPO PORCENTAGEM DA POPULAÇÃO GRUPO ANTÍGENO NAS CÉLULAS ANTICORPO
ABO VERMELHAS DO SANGUE NO SORO
A 40%
A A Anti-B
B 11%
B B Anti-A
O 45%
AB AeB Nem anti-A nem anti-B
AB 4%
O Nem A nem B Anti-A e anti-B
*Website da American Association of Blood Banks (AABB), 2007.
 402 UNIDADE 4 Imunologia Básica e Imunoematologia
anticorpo específico para o antígeno ausente estará presente. Por
exemplo, indivíduos do grupo A possuem anticorpo anti-B no
soro. Alguém que seja do grupo O possui os anticorpos anti-A e
anti-B, pois as células O não possuem o antígeno A nem o antíge-
no B (Tab. 4-11). Testar o sangue do paciente quanto à presença
de anticorpos do grupo sanguíneo é chamado de determinação
reversa, determinação confirmatória ou determinação indireta.
Esse teste é feito ao testar o soro ou o plasma do paciente com
células vermelhas do sangue (comercial) que contenham antíge-
nos A e B conhecidos.
Ainda que os antígenos do grupo sanguíneo estejam presen-
tes nas células vermelhas do sangue de recém-nascidos, os anti-
corpos do grupo sanguíneo ainda não estão bem desenvolvidos
ao nascimento. Os anticorpos do grupo ABO podem ser difíceis
de detectar até os primeiros seis meses de idade. Por esse moti-
vo, apenas a determinação direta é confiável em recém-nascidos
e bebês.
Importância do sistema ABO
O grupo ABO deve ser determinado antes de fazer certos pro-
cedimentos, como transfusão de sangue. Uma pessoa deve ser
transfundida com sangue que seja do mesmo grupo sanguíneo
ABO. Por causa da presença de anticorpos que ocorrem natural-
mente para os antígenos A e B, graves reações podem resultar das
transfusões se o sangue não for adequadamente avaliado.
A regra para seguir a transfusão de sangue é evitar dar ao
paciente o antígeno que ele ainda não tenha. Em uma emergência,
o sangue O pode ser usado porque ele não contém o antígeno A
nem o antígeno B. Por esse motivo, o indivíduo com grupo san-
guíneo O é chamado de doador universal.
PRECAUÇÕES DE SEGURANÇA
As precauções-padrão devem ser seguidas
quando os procedimentos do banco de san-
gue forem realizados. Luvas e equipamentos
de proteção individual (EPI) adequados são indispensáveis
para proteger contra a exposição ao sangue ou a seus produtos.
Métodos de controle de exposição também devem ser usados
para proteger da exposição acidental ao sangue e aos reagentes
de tipagem sanguínea. Como a maioria dos reagentes de gru-
po sanguíneo é oriunda de sangue humano, todos os reagen-
tes devem ser manuseados como potencialmente infectantes.
O material de laboratório usado deve ser descartável e, após o
uso, colocado em recipientes adequados para risco biológico
ou material perfurocortante. As superfícies dos contadores de-
vem ser desinfetadas frequentemente com desinfetante de su-
perfície. Devem ser observadas as normas de segurança para
proteger contra riscos físicos e elétricos quando equipamentos
elétricos e instrumentos com partes móveis, como centrífugas,
forem usados.
AVALIAÇÃO DA QUALIDADE
Os procedimentos de avaliação da qualidade
são destacados no manual de procedimento
operacional-padrão (POP) do banco de san-
gue. Esse manual incorpora os padrões necessários para a boa
prática de bancos de sangue, desenvolvidos pela American Asso-
ciation of Blood Bank (AABB), agência que também acredita es-
ses estabelecimentos. O departamento de banco de sangue tam-
bém segue as diretrizes da FDA e está sujeito a suas inspeções.
As diretrizes obrigatórias de avaliação de qualidade incluem:
■ documentar a adequada condição de trabalho de refrigera-
dores, freezers, banhos-maria, centrífugas e qualquer outro
equipamento usado no preparo, na testagem e no armazena-
mento de componentes do sangue e reagentes;
■ monitorar as temperaturas em todos os momentos para ga-
rantir que os componentes sejam armazenados dentro de
faixas de temperatura aceitáveis;
■ inspecionar visualmente e testar os reagentes em intervalos
regulares; registrar os resultados;
■ observar as datas de vencimento do reagente;
■ executar controles adequados e verificar o desempenho do
reagente.
Deve-se ter atenção especial na identificação do paciente e
da amostra. Os pacientes com testes realizados pelo departamen-
to de banco de sangue possuem braçadeiras especiais, que são
codificadas com a amostra de sangue do paciente, evitando erros
de identificação.
As observações de reações devem ser interpretadas com cui-
dado e registradas. As instruções do fabricante devem ser segui-
das para os reagentes usados.
Na imunoematologia, a qualidade do teste laboratorial pode
ter impacto direto e imediato no paciente. A transfusão de san-
gue é um ato que salva vidas. Erros ou enganos ao identificar as
amostras, executar testes de grupo ou interpretar os resultados de
grupo causam consequências graves. É essencial que os tecnolo-
gistas que trabalham no banco de sangue sejam bem treinados,
conscientes e vigilantes.
PRINCÍPIO DA DETERMINAÇÃO DO
GRUPO ABO POR LÂMINA
O teste em lâmina detecta os antígenos A ou B nas células verme-
lhas ao combinar o sangue do paciente com um antissoro conhe-
cido em uma lâmina e observar a aglutinação. Se o antígeno pre-
sente nas células corresponde ao anticorpo presente no antissoro,
o anticorpo se ligará ao antígeno, provocando agrupamento das
células ou a aglutinação. Se o antígeno não estiver presente, não
será observada nenhuma aglutinação.
Determinação do grupo ABO por lâmina
A determinação do grupo ABO por lâmina é feita usando lâminas
de tipagem comerciais ou lâminas para microscópio. Uma gota de
soro anti-A comercial é adicionada a uma lâmina marcada e uma
gota de soro anti-B é adicionada a outra lâmina marcada separa-
damente. Uma gota de sangue capilar ou venoso bem misturado é
colocada ao lado de cada gota do antissoro (Fig. 4-14). O anti-A
é misturado com a gota de sangue usando um bastão descartável,
um agitador ou uma espátula. O procedimento é repetido com o
anti-B e outra gota de sangue usando um bastão limpo.
As lâminas são suavemente balançadas por dois minutos.
Com uma boa iluminação observa-se se ocorre a aglutinação. A
aglutinação, uma reação positiva, surge como um agrupamento
de células vermelhas (Fig. 4-15). A ausência de aglutinação é uma
reação negativa. As reações com cada antissoro devem ser regis-
tradas como positivas (+) ou negativas (0).
 LIÇÃO 4-3 Imunoematologia: Determinação do Grupo ABO
TÓPICOS ATUAIS
GRUPO ABO E TRANSPLANTES DE
ÓRGÃOS E TECIDOS
Tecidos ou órgãos que são transplantados incluem rins,
fígado, córneas, pele, pâncreas, medula óssea, coração,
pulmão, intestino e ossos. Os transplantes que ocorrem
de um local do corpo para outro na mesma pessoa são
chamados de transplantes autólogos, alogênicos ou auto-
enxertos. Um exemplo são os enxertos de pele que são
retirados de uma parte do corpo e transferidos para a área
queimada. Como os autoenxertos são do próprio indiví-
duo, o problema de possível rejeição é eliminado.
Os transplantes de um doador de mesma espécie são
chamados de transplantes homólogos, homoenxertos ou
aloenxertos. Os exemplos incluem uma irmã doando um
rim para seu irmão, ou alguém que recebe um transplan-
te de coração. De acordo com o Departamento de Saúde
e Serviços Humanos dos Estados Unidos, aproximada-
mente 27 mil pessoas receberam transplantes de órgãos
em 2004, uma média de 74 pessoas por dia. Cerca de 90
mil estão esperando para receber doação de órgãos.
Antes que um transplante possa ser feito, o tecido ou
órgão do doador deve ser compatível com o do receptor
(ver Fig. 4-16). No caso de transfusões de sangue, que são
transplantes de tecido, o grupo ABO e o tipo Rh do re-
ceptor são compatíveis com o grupo ABO e o tipo Rh do
sangue do doador. O grupo ABO também deve ser con-
siderado em outros transplantes de tecidos e órgãos, pois
os antígenos A e B não estão presentes apenas nas células
vermelhas do sangue, nas plaquetas e nos leucócitos, mas
também em muitas outras células do corpo, principal-
mente nas células endoteliais e epiteliais.
O segundo nível de compatibilidade de tecido en-
volve o teste de histocompatibilidade, para determinar
se o doador e o receptor possuem alguns antígenos de
FIGURA 4-14 Procedimento para determinação do grupo ABO por lâmi-
na: a lâmina superior contém sangue mais anti-A; a lâmina inferior contém
sangue mais anti-B.
403
tecido. O complexo principal de histocompatibilidade
(CPH) é um complexo de genes associados, muito pró-
ximos, que codificam antígenos variáveis expressos na
maioria das células do corpo. Os antígenos do CPH são
diferentes de um indivíduo para outro, sendo a barrei-
ra principal para a capacidade de transplantar tecidos
e órgãos de uma pessoa para outra. Vários antígenos
produzidos pelos genes do CPH são necessários para a
resposta imunológica. Alguns dos mais importantes são
chamados de antígenos leucocitários humano (HLA) e
possuem esse nome por terem sido descobertos primei-
ramente nos leucócitos. Entretanto, esses antígenos estão
em muitas células do corpo e em muitas formas diferen-
tes, com base na herança, podendo ser expressos pelo
CPH. Assim, é mais provável que membros da família
possuam alguns antígenos iguais e, por isso, sejam doa-
dores compatíveis. Em geral, é impossível encontrar um
HLA compatível perfeito, pois apenas gêmeos idênticos
possuem antígenos HLA idênticos. Entretanto, quanto
maior for o número de antígenos HLA compartilhados
pelo doador e pelo receptor, menores serão as chances de
rejeição ao transplante.
Rejeição ao transplante – a resposta normal do cor-
po à introdução de material estranho é criar uma resposta
imunológica e rejeitar o corpo estranho. Essa reação ocor-
re quando transplantes homólogos são feitos. Combinar
os antígenos de histocompatibilidade do doador com
os do receptor reduz as chances de rejeição. Entretanto,
também é necessário usar fármacos imunossupressores
para reduzir as chances de rejeição. A rejeição pode ser
um fenômeno agudo, crônico ou graduado, que muitas
vezes é tratada com sucesso, com o aumento da terapia
medicamentosa. Os indivíduos que recebem transplantes
homólogos em geral precisam receber fármacos imunos-
supressores pelo resto de suas vidas.
FIGURA 4-15 Ilustração de aglutinação de células do sangue pelo anti-A na
determinação do grupo ABO por lâmina. Aglutinação de células com anti-A
na lâmina superior e ausência de aglutinação com anti-B na lâmina inferior
indicam que o paciente pertence ao grupo A.
 404 UNIDADE 4 Imunologia Básica e Imunoematologia

Grupo ABO do
O A B AB
doador do órgão

Receptor
compatível O A B AB A AB B AB AB

FIGURA 4-16 Diagrama de compatibilidade do grupo ABO para transplante de tecidos e órgãos.

Interpretação dos resultados da determinação

do grupo ABO por lâmina
Se apenas o antígeno A estiver presente nas células vermelhas do
sangue, elas irão aglutinar com o soro anti-A, mas não com o soro
anti-B. Se apenas o antígeno B estiver presente, as células agluti-
nam com o soro anti-B, mas não com o anti-A. Células do sangue
do grupo O não aglutinam nem com o soro anti-A, nem com o
soro anti-B. O sangue do grupo AB aglutina com o soro anti-A e
com o soro anti-B (Tab. 4-12).

PRINCÍPIO DA DETERMINAÇÃO DO
GRUPO ABO POR TUBO
O teste do tubo é um método mais sensível e confiável do que o
teste da lâmina para determinar o grupo sanguíneo do paciente. É
usado em bancos de sangue e laboratórios clínicos, ao passo que
o da lâmina é mais usado em salas de aula. A determinação por
tubo requer a diluição do sangue com solução salina, para fazer
uma suspensão de células de 2 a 5%.
A determinação do grupo ABO por tubo consiste de (1) de-
terminação direta, que identifica os antígenos das células e (2) de- FIGURA 4-17 Centrífuga sorológica.
terminação reversa ou confirmatória, que identifica os anticorpos
do grupo sanguíneo presentes no soro. Uma centrífuga sorológi-
melhas para reagir com soros comerciais anti-A e anti-B. Depois,
ca pode ser usada para acelerar a reação (Fig. 4-17). A centrífuga
observa-se a aglutinação que deve acontecer após a centrifugação.
sorológica é um equipamento especializado, que gira pequenos
Se uma centrífuga não estiver disponível, as reações podem ser
tubos para testes.
observadas deixando os tubos em repouso, em temperatura am-
biente, por um período de 15 a 30 minutos.
Determinação direta Uma suspensão de células vermelhas do sangue de 2 a 5%
A identificação direta identifica os antígenos presentes nas célu- é feita adicionando 18 ou 19 gotas de solução salina a uma gota
las vermelhas do sangue colocando a suspensão de células ver- de sangue do paciente. Dois tubos marcados, A e B, são orga-
nizados: uma gota do soro anti-A é colocada no tubo A e uma
gota do soro anti-B no tubo B. Uma gota da suspensão de células
TABELA 4-12 Reações de grupos ABO com soros anti-A do paciente de 2 a 5% é adicionada a cada tubo, e o conteúdo
e anti-B é misturado. Os tubos são centrifugados por 30 segundos para
potencializar a reação.
REAÇÕES DE CÉLULAS COM

GRUPO SANGUÍNEO ANTI-A ANTI-B Interpretação da determinação direta

A +
B 0
AB + +
O 0
+ = aglutinação
0 = sem aglutinação
Os tubos são suavemente sacudidos para soltar as células do
0
fundo, sendo observadas para a aglutinação. O agrupamento das
+ células é uma reação positiva, indicando que o antígeno presen-
te corresponde ao anticorpo colocado no tubo para teste (Tabs.
4-12 e 4-13). As reações devem ser classificadas usando um siste-
0
ma extra: neg (sem aglutinação); w+ (reação fraca) e 1+, 2+, 3+ e
4+ (aglutinação mais forte). A Figura 4-18 mostra uma ilustração
e a descrição de cada nível da reação.
 LIÇÃO 4-3 Imunoematologia: Determinação do Grupo ABO 405

TABELA 4-13 Resultados das determinações direta e reversa do grupo ABO

GRUPO SANGUÍNEO DETERMINAÇÃO DIRETA DETERMINAÇÃO REVERSA

Reações de células com: Reações do plasma com:

Anti-A Anti-B Células A Células B Células O

O 0 0 + + 0
A + 0 0 + 0
B 0 + + 0 0
AB + + 0 0 0

+ = aglutinação
0 = sem aglutinação

Determinação reversa
Graduação da aglutinação
A determinação reversa (indireta ou confirmatória) identifica os O grau de aglutinação de células vermelhas observado em qualquer
anticorpos presentes no soro ou no plasma do paciente, reagindo procedimento de teste em banco de sangue é importante e deve
o plasma com uma suspensão comercial de 2 a 5% de células san- ser registrado. Um sistema de graduação está ilustrado a seguir.
guíneas A e com uma suspensão comercial de 2 a 5% de células B. Descrição Reação Grau
Depois, observa-se a aglutinação.
Duas gotas de plasma do paciente são adicionadas a cada um Gomo com uma ou duas 4 ()
dos três tubos, marcados como a, b e controle. Uma gota da sus- aglomerações grandes após
pensão de células do grupo A é adicionada ao tubo a, uma gota ser deslocado. Fundo claro.
da suspensão de células do grupo B é adicionada ao tubo b, e uma
gota da suspensão de 2 a 5% de células do paciente é colocada no
tubo-controle. O conteúdo dos tubos é misturado, e os tubos são Gomo quebrado em poucas 3 ()
centrifugados por 30 segundos. aglomerações grandes.
Fundo claro.

Interpretação da determinação reversa

Os tubos são levemente agitados, observam-se as células para ve-
rificar se aglutinam e classificam-se as reações (Fig. 4-18).Um tes- Gomo quebrado em muitas 2 ()
te positivo, aglutinado, indica que o anticorpo presente no plasma aglomerações de tamanho
médio. Fundo claro.
do paciente corresponde ao antígeno das células adicionadas ao
tubo. O tubo-controle deve sempre ser negativo para aglutinação,
pois contém apenas o plasma e as células do paciente. Os resul-
tados da determinação reversa devem confirmar os resultados da Gomo quebrado em várias 1 ()
determinação direta (Tab. 4-13). aglomerações pequenas.
Fundo turvo.

PRINCÍPIOS DA TIPAGEM EM GEL

São feitas melhorias constantes na tecnologia de teste de banco Poucas aglomerações finas são w
de sangue. Estão disponíveis sistemas automatizados e semiau- observadas a olho nu.
tomatizados para a determinação do grupo sanguíneo e da com-
patibilidade cruzada (crossmatching). Os métodos de tipagem em
fase sólida, gel ou coluna podem ser totalmente automatizados.
Isso é particularmente útil quando a equipe é pequena e os tec- Sem aglomerações visíveis 0 (Neg)
nologistas devem trabalhar em mais de um departamento durante ou aglutinação.
o mesmo turno.
A tipagem em gel é sensível e específica e o procedimento é
padronizado, verificado e validado. O teste é feito em um cartu-
cho preenchido com géis misturados com o reagente específico FIGURA 4-18 Ilustração da graduação das reações de aglutinação para ti-
(Fig. 4-19). Uma diluição de células do paciente é pipetada na pagem do grupo ABO por tubo.
coluna do gel e o cartucho é incubado. Após a incubação, o car-
tucho é centrifugado e os resultados são lidos. As células agluti-
nadas não atravessam o gel, permanecendo no topo da coluna.
Nesse caso, a reação positiva é observada. As células não agluti-
 406 UNIDADE 4 Imunologia Básica e Imunoematologia

nadas atravessam o gel para o fundo da coluna e, assim, a reação
negativa é observada (Figs. 4-19 e 4-20). Como algumas reações
de tipagem no gel são estáveis por muitas horas, os testes podem
ser guardados e lidos novamente, se necessário.
O manuseio mínimo de reagentes e amostras aumenta a
biossegurança. O uso de testes em gel elimina variáveis rela-
cionadas à técnica de cada profissional. Os resultados claros,
estáveis e bem-definidos facilitam a interpretação objetiva e re-
produtível do resultado do teste, assim como reduzem a neces-
sidade de repeti-lo. Ainda que a economia de gastos seja uma
questão importante no cuidado com a saúde, o banco de sangue
deve continuar mantendo padrões rígidos e o uso dos melho-
res métodos disponíveis, mesmo que isso aumente o custo dos
serviços.

Lembretes de SEGURANÇA

■ Revise a seção de avaliação da qualidade

antes de executar os procedimentos.
■ Observe as precauções-padrão quando
realizar procedimentos de determinação
de grupo sanguíneo.
■ Use jaleco de laboratório abotoado, resis-
tente a fluidos, e outros EPIs adequados.
■ Coloque toda a vidraria usada no recipiente para
descarte de material perfurocortante.
■ Observe as regras de segurança do equipamento
FIGURA 4-19 Cartucho de tipagem em gel com colunas (a partir da es-
querda) para determinação direta do grupo ABO, tipagem de Rh e controle
quando operar uma serofuge.
e determinação reversa do grupo ABO. A amostra apresentada é do tipo
“A positivo”.

Controle Célula
Identificação do Célula
A B D Rh
paciente A1 B
Grupo
Lembretes de PROCEDIMENTO
AZ 101 4  4  M 3 A Positivo

■ Revise a seção de avaliação da qualidade

antes de executar os procedimentos.
■ Siga as instruções do fabricante sobre o
AZ 212 4  4  M 4 A Positivo armazenamento e o uso de todos os rea-
gentes comerciais.
■ Não use reagentes vencidos.
■ Faça os procedimentos de controle de qualidade
regularmente e registre os resultados.
AZ 345 4  4   2 A Positivo ■ Observe o tempo com cuidado quando executar os
testes em lâmina.
■ Use uma suspensão de célula de 2 a 5% para a de-
terminação em tubo.
■ Use boa iluminação para observar as reações.
AZ 433   4  4 3 O Positivo ■ Não agite muito os tubos; reações de aglutinação
fracas podem ser desfeitas e mal-interpretadas.
■ Registre os resultados tão logo sejam observados.

FIGURA 4-20 Formulário de relatório da tipagem em gel. Apresentação

de relatórios da tipagem do grupo ABO e do Rh em quatro amostras de
pacientes usando o sistema de teste de imunoematologia automático Ortho
ProVue. Os testes a partir da esquerda são determinação direta (células do
paciente e anti-A e anti-B), Rh D e controle e determinação reversa (células
A e B e plasma do paciente). As células no fundo da coluna indicam ausência
de aglutinação, uma reação negativa. As células aglutinadas formam uma
camada no topo da coluna e indicam uma reação positiva.
 420 UNIDADE 4 Imunologia Básica e Imunoematologia

INTRODUÇÃO TABELA 4-14 Frequência de sangue Rh D-positivo e

O grupo sanguíneo Rh, descoberto nos anos 1940, é o segundo D-negativo em diferentes populações
mais importante sistema de grupo sanguíneo humano. Tem esse GRUPO ÉTNICO D-POSITIVO (%) D-NEGATIVO (%)
nome por causa dos macacos rhesus, que foram usados em expe-
rimentos quando o sistema foi descoberto. Branco 84 16
A tipagem do Rh pode ser feita pelos métodos em lâmina, Afro-americano 93 7
tubo ou gel. Os métodos em tubo ou gel são usados em bancos
Africano 99 1
de sangue. A tipagem do Rh deve ser feita no sangue do doador e
no do paciente antes de uma transfusão de sangue. Esse procedi- Asiático 99 1
mento também é parte da rotina dos exames pré-natais. Europeu ocidental 65 35
(Basco)

O SISTEMA DE GRUPO SANGUÍNEO Rh Nativo norte-americano 99 1

O sistema de grupo sanguíneo Rh é composto por vários antíge-

nos. O primeiro antígeno do sistema Rh reconhecido foi o tipo
D. Este é o mais importante, pois é o mais antigênico e o único
para o qual o sangue é testado de forma rotineira. Assim como das para o teste de D fraco. As células vermelhas do sangue são
os do sistema ABO, os antígenos do Rh são produtos de genes lavadas várias vezes para remover qualquer anti-D não ligado e,
herdados e estão presentes na superfície das células vermelhas do então, incubadas com anti-IgG humana. Esse anti-IgG reage com
sangue. Diferente do sistema ABO, outras células sanguíneas e qualquer IgG anti-D que esteja ligado às células, durante o teste
de tecidos não expressam os antígenos do Rh. Também de modo inicial de tipagem. As células são centrifugadas e observadas para
diverso do sistema ABO, os anticorpos para os antígenos do Rh aglutinação macroscopicamente. Se não for observada aglutina-
não ocorrem naturalmente no soro. ção, elas são observadas microscopicamente para aglutinados.
Apenas o sangue negativo macroscópica e microscopicamente no
Antígeno Rh D teste de D fraco é rotulado como D-negativo.
O principal antígeno no sistema Rh é o antígeno D. As células
vermelhas que possuem o antígeno D são chamadas de Rh D-po- Antígenos Rh diferentes de D
sitivas; as que não o possuem são chamadas de Rh D-negativas. Mais de três dúzias de antígenos foram identificadas no sistema
Tornou-se comum se referir ao antígeno Rh D como apenas an- Rh. Muitos desses antígenos são raros. Entretanto, quatro an-
tígeno D e ao sangue Rh D-positivo como sangue D-positivo ou tígenos Rh estão logo atrás do D em questão de relevância. Os
sangue Rh-positivo. nomes mais comuns para esses antígenos são C, c, E e e. Em
O antígeno D ocorre na maioria da população, mas a inci- alguns casos, o sangue é testado para esses antígenos Rh e para
dência difere de acordo com o grupo étnico (Tab. 4-14). O san- o antígeno D. Raras vezes uma pessoa negativa para esses antíge-
gue do doador, além de ser rotulado pelo grupo ABO, também nos (C, c, E, e), se exposta a sangue contendo o antígeno, produ-
deve sê-lo como Rh-positivo ou Rh-negativo (Fig. 4-21), referin- zirá anticorpos contra ele. As três formas de nomear os antígenos
do-se, assim, à presença ou à ausência do antígeno Rh D. Rh estão listadas na Tabela 4-15 e explicadas na seção Tópicos
Atuais (página 407).
Antígeno D fraco
Alguns indivíduos têm uma forma de antígeno D que reage pou-
co no procedimento de tipagem. O sangue que apresenta reação
fraca com anti-D é chamado D fraco ou DU, o que é considerado
D-positivo.
As células do sangue que expressam o antígeno D fraco tam-
bém podem apresentar reação negativa na tipagem Rh D de ro-
tina. Nesses casos, o teste D fraco deve ser feito antes de relatar
o tipo de Rh D. O sangue do doador só pode ser rotulado como
D-negativo após o teste D fraco confirmar que o antígeno D não
foi detectado. Os laboratórios permitem que apenas profissionais
especialmente qualificados executem o teste de D fraco.
O teste para detecção do D fraco usa os princípios do tes-
te de antiglobulina humana, um método sensível para detectar
os anticorpos ligados a células vermelhas do sangue, usando um
reagente comercial de anti-imunoglobulina (anti-IgG) humana
(AHG). As células vermelhas incubadas com anti-D comercial
da classe IgG e que inicialmente não mostram reação são testa- FIGURA 4-21 Bolsa de doador contendo sangue A positivo.

TABELA 4-15 Comparação de métodos de Fisher-Race,
Weiner e Rosenfield na nomenclatura de antígenos Rh
SISTEMA
MÉTODO MÉTODO ROSENFIELD
FISHER-RACE WEINER (ET AL.)
D Rho Rh 1
C rh' Rh 2
E rh" Rh 3
d* Hro — PROCEDIMENTOS PARA TIPAGEM DE Rh
c hr' Rh 4
e hr" Rh 5
*Não foi encontrado nenhum antígeno d. O d significa ausência do antígeno D.
Anticorpos Rh
Ainda que os anticorpos para os antígenos Rh não ocorram na-
turalmente no sangue, o anticorpo para o antígeno D (anti-D)
pode ser produzido por uma pessoa D-negativo que se torne
sensibilizada ou imunizada para o antígeno D. Isso pode ocorrer
durante a gravidez (ver informações sobre a doença hemolítica
do recém-nascido) ou após transfusão de sangue com sangue
D-positivo. O anti-D, quando produzido, é da classe de imuno-
globulina G (IgG).
TÓPICOS ATUAIS
NOMENCLATURA E HERANÇA DO
SISTEMA Rh
Foram sugeridas três nomenclaturas (sistemas de nome)
para o sistema Rh. Essas nomenclaturas foram sugeridas
por diferentes pesquisadores para correlacionar os no-
mes dos antígenos com o método de herança proposto.
Os três sistemas de nome são: Fisher-Race, Weiner e Ro-
senfield et al. Os fabricantes de reagentes para banco de
sangue usam um ou mais sistemas de nomenclatura em
seus produtos (Tab. 4-15).
A nomenclatura de Fisher-Race é empregada com
mais frequência, devido a sua simplicidade. Entretanto,
foi demonstrado que o método de herança dos genes Rh
sugerido por Fisher e Race está errado.
Três conjuntos de genes codificam os antígenos do
Rh, D, C, E, c e e. Os genes estão posicionados muito per-
to uns dos outros em um cromossomo, fazendo com que
os três genes em cada cromossomo sejam herdados como
um grupo. Os genes que codificam os antígenos C e c são
alelos do mesmo gene e codominantes.
LIÇÃO 4-4 Imunoematologia: Tipagem do Rh 421
Importância da tipagem do Rh
É importante testar o antígeno D em todos os pacientes que devem
receber transfusões, para que o tipo correto de sangue seja admi-
nistrado. Pacientes Rh D-negativos devem receber transfusão ape-
nas com sangue Rh D-negativo. O teste para o antígeno D também
é usado para identificar mulheres com risco de dar à luz um bebê
com doença hemolítica do recém-nascido (HDN), em estudos de
genética familiar e em casos legais para estabelecer paternidade.
O antígeno Rh D é identificado usando técnicas de aglutinação.
O sangue venoso anticoagulado é a amostra preferencial, mas o
sangue capilar também pode ser usado.
Precauções de segurança
As precauções de segurança devem ser segui-
das quando forem coletadas amostras de san-
gue e quando for realizada a tipagem. Luvas e
outros equipamentos de proteção individual (EPIs) devem ser
usados ao serem executados os procedimentos. As lâminas ou os
tubos usados devem ser colocados em recipiente de descarte de
material biológico e perfurocortantes. Todos os reagentes devem
ser vistos como potencialmente infectantes, pois muitos deles são
derivados do sangue humano. As regras de segurança da centrí-
fuga devem ser seguidas, incluindo sempre equilibrar os tubos no
rotor e deixar que ela pare antes de abrir a tampa.
Isso significa que, se uma pessoa herdar um alelo
para C e um alelo para c, ambos os antígenos (Cc) seriam
expressos. Os genes que codificam os antígenos E e e são
alelos de outro gene, também codominantes e localizados
perto dos alelos C/c. Os alelos D e d estão localizados no
terceiro local ligado mais próximo. O alelo D codifica o
antígeno D, mas ainda não foi econtrado nenhum antíge-
no para ser expresso pelo alelo d. Acredita-se que o alelo
D seja dominante sobre o alelo d.
Cada indivíduo herda três alelos do pai e três da mãe.
Por exemplo, se alguém herda os alelos CDe de um pai/
mãe e cDe do outro, o seu genótipo para esses genes seria
CDe/cDe. Seu fenótipo da célula vermelha, a expressão
detectável dos genes herdados, seria C+, c+, D+ e e+. A
combinação alélica mais comum encontrada em pessoas
com Rh D-negativo é cde/cde, significando que apenas os
antígenos detectáveis nas células vermelhas seriam c e e
(um fenótipo de c+ e e+). Uma pessoa de genótipo CDe/
cde expressaria os antígenos C, c, D e e (lembre-se de que
não existe antígeno d).
422 UNIDADE 4 Imunologia Básica e Imunoematologia
TÓPICOS ATUAIS
DOENÇA HEMOLÍTICA DO
RECÉM-NASCIDO CAUSADA POR Rh
A doença hemolítica do recém-nascido (HDN) é uma
condição na qual o anticorpo da mãe entra na circulação
fetal e destrói as células vermelhas fetais. No passado,
a HDN era causada, principalmente, pela reação anti-D
materna com o antígeno D das células vermelhas do feto.
Entretanto, por meio de teste pré-natal e do uso agressi-
vo de métodos para evitar a HDN causada pelo antígeno
D, os antígenos Rh não D (como C, c, E ou e) agora são
responsáveis pela maior proporção dessa condição.
A HDN pode ocorrer quando uma mãe D-negativo
engravida de um feto D-positivo. Durante a gravidez ou
no parto, um pouco das células vermelhas D-positivo do
feto pode alcançar o sistema circulatório da mãe, estimu-
lando suas defesas imunológicas a produzir anticorpos
– basicamente, ela se torna imune contra células D. Esse
anticorpo (anti-D) é da classe IgG e, portanto, pode atra-
vessar a placenta e alcançar a circulação fetal. O sangra-
mento do sangue fetal na mãe é chamado de hemorragia
feto-maternal (HFM). As situações que provocam a expo-
sição da mãe às células do feto incluem:
■ amniocentese ou outro procedimento invasivo;
■ aborto espontâneo ou induzido;
■ gravidez ectópica;
■ intenso sangramento durante a gravidez;
■ o processo do nascimento.
Na maioria dos casos, as mulheres não são expos-
tas ao sangue fetal até o momento do nascimento, o que
significa que o primeiro bebê não terá HDN. Entretanto,
grande quantidade de sangue do recém-nascido em geral
alcança a circulação sanguínea da mãe durante o parto. Se
uma mulher D-negativo é exposta ao sangue D-positivo
e produz anticorpos anti-D, eles podem atravessar a pla-
centa em uma gravidez subsequente. Se o próximo feto
também tiver células vermelhas D-positivas, o anti-D des-
truirá as células vermelhas do feto – por isso o nome de
doença hemolítica do recém-nascido.
Sintomas e consequências da HDN
A mãe de um feto com a doença geralmente não apresen-
ta sintomas durante a gravidez, exceto se a condição for
muito grave.
Por esse motivo, é muito importante que mães sob
risco façam o exame pré-natal no primeiro trimestre
da gestação, para determinar seu tipo de Rh D e testar
se já existem anticorpos anti-D. É comum essas mães
também terem frequente monitoramento do feto; assim,
qualquer sinal de estresse fetal será detectado preco-
cemente. O pai também pode ser testado – não existe
risco de HDN por Rh D quando ambos os pais são
D-negativo.
A HDN pode variar de leve a grave; o grau de gravi-
dade costuma estar relacionado à quantidade de anticor-
pos produzidos pela mãe e ao tempo durante a gestação
que ela produziu anticorpos. Em casos leves, os sinais de
HDN não podem ser detectados até o nascimento e in-
cluem anemia, icterícia ou problemas respiratórios. Em
casos mais graves, insuficiência cardíaca, dano cerebral
ou até parto de natimorto ou aborto espontâneo podem
ocorrer.
Prevenção da HDN pelo Rh D
Desde 1968, é possível evitar quase todos os casos de
HDN causados pelo antígeno D administrando imuno-
globulina (RhIG) Rh injetável (D) na mãe D-negativa.
O desenvolvimento desse tratamento foi um avanço
significativo na obstetrícia, estimando-se que tenha
salvado a vida de aproximadamente 10 mil bebês por
ano. RhIG é uma solução concentrada de anti-D pu-
rificado a partir do plasma humano. Quando RhIG é
administrada no momento correto, ela evitará que a mãe
produza seus próprios anticorpos para as células D. O
anti-D injetado se ligará a todas as células vermelhas do
sangue do feto que entrarem no sangue da mãe, fazendo
com que sejam eliminadas da circulação e evitando que
seu sistema imunológico seja estimulado. O regime de
tratamento atual é administrar imunoglobulina Rh na
vigésima oitava semana da gravidez e dentro de 72 ho-
ras após o nascimento de um bebê D-positivo. A RhIG
também é administrada após eventos como aborto,
aborto espontâneo ou amniocentese. Ao receber a in-
jeção na vigésima oitava semana e após o nascimento, a
sensibilização é evitada e a incompatibilidade Rh D não
será um problema durante a próxima gravidez. Esse tra-
tamento deve ser repetido em todas as gestações, exceto
quando se tem certeza que o feto/bebê é D-negativo. O
tratamento só tem sucesso com incompatibilidades de
antígeno D.

Avaliação da qualidade
A exatidão na tipagem do Rh e no relato de
resultados é essencial para o bem-estar dos
pacientes. Para evitar erros, as políticas de ava-
liação da qualidade devem ser seguidas. Elas estão descritas no
manual de procedimento operacional-padrão da instituição e in-
cluem práticas como:
■ identificar o paciente, a amostra, os reagentes e os frascos de
teste com exatidão;
■ inspecionar visualmente os antissoros de tipagem para evitar
a contaminação;
■ testar com os controles as células e os antissoros comerciais
em intervalos determinados;
■ usar e armazenar os reagentes de acordo com as instruções
do fabricante e observar a data de validade;
■
observar os rígidos limites de tempo para os testes de tipa-
gem em lâmina, de modo que a secagem das células não seja
confundida com a aglutinação;
■ interpretar e registrar os resultados com cuidado.
Tipagem de Rh em lâmina
Para executar a tipagem de Rh D em lâmina, uma gota de an-
tissoro comercial anti-D é adicionada à lâmina de microscópio
identificada. Em seguida, uma grande gota de sangue completo é
adicionada à lâmina. O sangue e o antissoro são misturados com
um agitador e espalhados em pelo menos metade da lâmina. Esta
é colocada em uma caixa iluminada, aquecida a 37°C. A caixa é
balançada para a frente e para trás por dois minutos, enquanto se
observa se a mistura aglutina (Fig. 4-22). A presença ou a ausên-
cia de aglutinação é registrada.
Vários tipos de anti-D comerciais estão disponíveis para
tipagem do Rh, incluindo anti-D de elevado teor de proteína,
anti-D quimicamente modificado, anti-D monoclonal e anti-D
em solução salina. Os procedimentos do controle de qualidade e
instruções para uso diferirem para cada tipo de antissoro. As re-
comendações na(s) bula(s) dos reagentes a serem usados devem
ser seguidas.
O controle negativo costuma ser preparado e testado junto
com a amostra do paciente quando for usado o anti-D de eleva-
do teor de proteína. Esse controle é preparado misturando uma
FIGURA 4-22 Caixa de visualização aquecida e iluminada, usada para tipa-
gem de Rh em lâmina. A amostra à direita é D-positiva.
LIÇÃO 4-4 Imunoematologia: Tipagem do Rh 423
solução de controle de proteína sem anticorpo com o sangue
do paciente.
Tipagem de Rh em tubo
A tipagem de Rh em tubo é mais sensível do que em lâmina. A ti-
pagem em tubo é feita como a determinação do grupo ABO. Uma
suspensão de 2 a 5% é preparada a partir das células do paciente.
Uma gota da suspensão é misturada com uma gota de anti-D e o
tubo é centrifugado. O pellet de célula é suavemente deslocado
e observado quanto à aglutinação. Em seguida, a reação é clas-
sificada. Como o soro do paciente não contém anticorpo anti-D
natural, a determinação reversa ou confirmatória não é realizada.
Anti-D comercial está disponível como antissoros monoclo-
nais, antissoros policlonais, antissoros de IgG purificada, antis-
soros de IgM purificada, combinações de IgG e IgM e antissoros
quimicamente modificados. Muitos laboratórios testam rotinei-
ramente cada amostra com dois tipos diferentes de anti-D para
aumentar as chances de detectar o antígeno D fraco. É importante
seguir com cuidado as instruções do fabricante para cada tipo de
antissoro.
Os laboratórios devem ter um procedimento claro por escri-
to sobre tipagem e identificação do antígeno D. É particularmente
vital que o sangue do doador D fraco positivo não seja confun-
dido com o sangue D-negativo. Se isso acontecer, uma pessoa
D-negativa pode receber sangue contendo o antígeno D. Alguns
laboratórios estabelecem a política de transfundir um paciente D
fraco com sangue D-negativo. Entretanto, o sangue dos doadores
D fraco é rotulado como D-positivo e deve ser transfundido ape-
nas em pacientes D-positivo.
Interpretação dos resultados da tipagem de Rh
Se um paciente for Rh D-positivo, suas células aglutinarão quando
reagirem com anti-D. Se o paciente for Rh D-negativo, não ocor-
rerá aglutinação (Tab. 4-16). Dependendo da política do laborató-
rio, os resultados da tipagem de Rh D-negativo devem ser confir-
mados com um teste de D fraco (DU) antes de serem registrados.
A lâmina ou o tubo do controle devem, sempre, ser negativos
para aglutinação. Se o controle for positivo, o teste é inválido e
deve ser repetido usando-se um outro método ou reagentes dife-
rentes. Os resultados de controle positivos ocorrem por causa de
contaminação no soro de controle ou anormalidades na amostra
de sangue do paciente.
TABELA 4-16 Interpretação dos resultados de tipagem
do Rh D
REAÇÕES DE
CÉLULAS COM:
Soro de
Anti-D controle Interpretação
+ 0 Rh (D) positivo
0 0 Possível Rh D-negativo; confirmar com teste
de D fraco (DU) antes de registrar
+ + Incapaz de interpretar; repetir o teste usando
outro método
+ = aglutinação
0 = sem aglutinação
 424 UNIDADE 4 Imunologia Básica e Imunoematologia

Tipagem em gel para Rh D Lembretes de PROCEDIMENTO

Os cartuchos de gel usados para tipagem ABO também contêm
colunas para tipagem D (ver Lição 4-3). Os testes são feitos e
interpretados como as determinações direta e reversa do gru-
po ABO. As suspensões diluídas de células vermelhas são adi-
cionadas às colunas que contêm uma matriz em gel, antissoro e
reagentes de controles. Sob centrifugação controlada, as células
são forçadas para a matriz de gel, onde entram em contato com
o reagente do anti-D ou do controle. Se o antígeno D não estiver
presente nas células vermelhas, elas irão para o fundo da colu-
na sem reagir com o antissoro. Anti-D no gel se ligará a células
D-positivas, provocando aglutinação e impedindo que as células
atravessem o gel. Uma camada de célula remanescente no topo da
coluna é um resultado positivo.
Lembretes de SEGURANÇA
■ Revise a seção de avaliação da qualidade
antes de executar o procedimento.
■ Sempre siga as instruções do fabricante
para o uso de reagentes.
■ Identifique o paciente e suas amostras cor-
retamente.
■ Marque as lâminas e os tubos com exatidão.
■ Realize uma lâmina para tipagem de Rh D a 37°C
usando uma caixa para visualização iluminada e
aquecida.
■ Observe as reações de tipagem de Rh em lâmina
dentro de dois minutos.
■ Confirme a tipagem negativa de Rh em lâmina com
U
um teste em tubo ou um teste para D fraco (D ).

■ Revise a seção de precauções de segurança

antes de iniciar o procedimento.
■ Observe as precauções-padrão quando rea-
lizar os testes de tipagem.
■ Use jaleco de laboratório abotoado, resis-
tente a fluidos, e outros EPIs adequados.
■ Descarte adequadamente todo material usado.
■ Limpe a área de trabalho com desinfetante de su-
perfície.
RESUMO
O sistema de grupo sanguíneo Rh é composto de antígenos de
células vermelhas que são produtos dos genes herdados. O D
é o principal antígeno do sistema, mas outros antígenos menos
importantes, C, c, E e e também são significativos no banco de
sangue. As unidades de sangue do doador e de potenciais recep-
tores de transfusão são rotineiramente testadas para antígeno D.
A tipagem do Rh pode ser feita pelos métodos em lâmina, tubo

ESTUDO DE CASO 1

Sr. Morris foi ao centro de doação para doar sangue. Quando o centro de processamento fez a tipagem inicial
do grupo ABO e Rh D do seu sangue, os resultados indicaram que ele era A negativo. A determinação do grupo
ABO foi feita pela tipagem em tubo, e a tipagem do Rh D foi feita pelo método em lâmina.

A próxima etapa para o centro de processamento deve ser:

a. Rotular o sangue como A negativo.
b. Repetir a determinação do grupo ABO pelo teste em lâmina, que é mais confiável.
c. Fazer outra tipagem para teste de D fraco antes de rotular a bolsa.

ESTUDO DE CASO 2

Sra. Rodriguez, que foi identificada como B negativo, precisava de uma transfusão. Os únicos sangues disponí-
veis eram B positivo e O negativo. Qual ela deve receber? Explique sua resposta.
 Encerra aqui o trecho do livro disponibilizado para
esta Unidade de Aprendizagem. Na Biblioteca Virtual
da Instituição, você encontra a obra na íntegra.
 DICA DO PROFESSOR

Na Dica do professor, você vai conhecer as diferenças no que se refere à produção de

aglutininas no sistema ABO e no sistema Rh.

Conteúdo interativo disponível na plataforma de ensino!

EXERCÍCIOS

1) Clara foi submetida a uma cirurgia de emergência e necessitou de transfusão de

sangue no momento da cirurgia. Antes da transfusão das bolsas de sangue, foi
realizada a tipagem sanguínea de Clara, bem como outros testes para confirmar o seu
grupo sanguíneo do sistema ABO e fator RH, a fim de evitar reações de
incompatibilidade entre o doador e o receptor. Sabendo que Clara é do grupo
sanguíneo O positivo, assinale a alternativa correta sobre os tipos sanguíneos que
Clara poderá receber.

A) Clara somente poderá receber sangue O positivo.

B) Clara poderá receber sangue AB positivo, AB negativo, A positivo, A negativo, B

positivo, B negativo, O positivo, O negativo.

C) Clara poderá somente receber sangue A positivo, A negativo, O positivo, O negativo.

D) Clara poderá receber somente sangue O positivo e O negativo.

E) Clara poderá receber sangue B positivo, B negativo, O positivo, O negativo.

2) No sistema ABO, há dois tipos de proteínas presentes nas hemácias que atuam como
antígenos e são chamados de aglutinogênios. Além desses, há no plasma proteínas
específicas denominadas aglutininas, que atuam como anticorpos e já se encontram
 sintetizadas no plasma. Sobre o sistema ABO, assinale a alternativa incorreta.

A) A reação antígeno-anticorpo é extremamente específica e, no caso dos grupos sanguíneos,

essa reação é denominada hemaglutinação.

B) Há dois tipos de aglutininas que podem ocorrer no sistema ABO: anti-A e anti-B.

C) Quando o indivíduo apresenta o aglutinogênio B em suas hemácias, ele não apresenta a

aglutinina anti-B em seu plasma.

D) Os indivíduos do grupo sanguíneo A, B, AB e O apresentam em suas hemácias,

respectivamente, aglutinogênio A, aglutinogênio B, aglutinogênio A e B e, finalmente, o
indivíduo que é o do grupo sanguíneo O não possui aglutinogênio.

E) Os indivíduos do grupo sanguíneo A possuem em seu plasma a aglutinina anti-A, enquanto

os indivíduos do grupo B possuem a aglutinina anti-B. Já os indivíduos do grupo AB
apresentam aglutininas anti-A e anti-B. Por fim, indivíduos do grupo O não possuem
aglutininas em seu plasma.

3) Carine é analista no setor de hematologia de um grande laboratório. Todos os dias,

ela realiza a tipagem sanguínea de um considerável número de pacientes. Para a
liberação do resultado do grupo do sistema ABO e do sistema Rh, é preciso que ela
realize algumas metodologias a fim de garantir maior acurácia no resultado emitido
no laudo. Assinale a opção incorreta sobre as metodologias utilizadas por Carine.

A) Para a determinação do sistema Rhesus de um indivíduo, é preciso identificar a presença

de antígenos D nas hemácias do paciente. Nesse teste não é necessário o uso de um
controle Rh.

B) Se no tubo que contém anti-D e na suspensão de hemácias houver a presença de

aglutinação, pode-se interpretar que o resultado é fator Rh positivo.
C) No mesmo momento em que se realiza o teste do fator Rh e sistema ABO por meio de
provas diretas, também se realiza a prova reversa, que funciona como uma contraprova
fundamental para a conclusão do exame e tem a finalidade de pesquisar anticorpo no soro
do paciente.

D) Quando o tubo da prova direta que contém anti-B aglutina, a interpretação do resultado
grupo sanguíneo B e a prova direta para a confirmação do resultado será com presença de
aglutinação no tubo A.

E) Teste em tubo de prova direta: suspender uma gota dos soros anti-A, anti-B, anti-AB, anti-
D e controle Rh nos respectivos tubos. Após isso, acrescentar uma parte da suspensão de
hemácias.

4) O teste de Coombs indireto, também chamado de pesquisa de anticorpos irregulares,

tem como objetivo pesquisar no soro do paciente a presença de aloanticorpos
irregulares voltados contra antígenos clinicamente significativos de importância
transfusional e/ou gestacional. Assinale a alternativa incorreta sobre o teste de
Coombs indireto.

A) Este teste é utilizado na pesquisa de anticorpos bloqueadores (incompletos), os quais se

fixam às hemácias in vitro, mas não as aglutinam. Para que a reação seja observada, é
necessária a adição do soro anti-IgG (soro de Coombs). Os anticorpos clinicamente
significativos são os anticorpos contra antígenos eritrocitários.

B) A interpretação de um teste de Coombs positivo pode ser descrita pela ausência de

aglutinação devido à ausência de anticorpos livres no soro do paciente, os quais
correspondem a um ou mais antígenos presentes nas hemácias usadas no teste.

C) O teste de Coombs indireto também pode ser usado para detectar anticorpos contra
fármacos que se ligam aos eritrócitos e causam a anemia hemolítica.

D) O soro de Coombs (soro anti-IgG) também é utilizado na pesquisa de formas fracas do

antígeno D (Du). O antígeno Du é uma variante do antígeno D e, embora se comporte de
 maneira diferente nas técnicas rotineiras de determinação do antígeno D, é tão antigênico
quanto este.

E) O teste de Coombs indireto permite que se detectem incompatibilidades de Rh que causam

doença hemolítica do recém-nascido, possibilitando, assim, a prevenção da doença.

5) O teste de Coombs direto é também chamado de teste da antiglobulina direto ou

pesquisa de anticorpo intravascular. Esse teste é usado, principalmente, para
determinar se a presença de uma anemia hemolítica está relacionada aos anticorpos
ligados às hemácias. Sobre o teste de Coombs direto, assinale a opção incorreta.

A) O teste de Coombs poderá identificar anticorpos ligados à membrana das hemácias, os

quais são produzidos em processos patológicos autoimunes, tais como o lúpus eritematoso
sistêmico.

B) O teste laboratorial tem como princípio o uso da hemácia do paciente com o soro de
Coombs ou o soro da antiglobulina humana (AGH), que se liga aos anticorpos fixados nas
hemácias.

C) O teste de Coombs direto e o teste de Coombs indireto adicionam o anticorpo anti-

imunoglobulina humana no soro materno na eritroblastose fetal.

D) A dificuldade de detectar os anticorpos IgG anti-Rh era uma realidade devido à reação
antígeno-anticorpo não desencadear uma aglutinação tal como ocorre no sistema ABO. A
detecção foi possível a partir do desenvolvimento do anticorpo anti-imunoglobulina
humana (soro de Coombs).

E) O teste de Coombs indireto e o teste de Coombs adicionam o anticorpo anti-

imunoglobulina humana no soro materno na eritroblastose fetal.

NA PRÁTICA
Observe os passos para as testagens ABO e Rh, incluindo a pesquisa do antígeno D fraco.
 SAIBA MAIS

Para ampliar o seu conhecimento a respeito desse assunto, veja abaixo as sugestões do
professor:

Imunobiologia de Janeway

MURPHY, Kenneth, Porto Alegre: Artmed, 2014. [Apêndice A7 ao A12]

Hematologia laboratorial

ILVA, Paulo Henrique; ALVES, Hemerson Bertassoni; COMAR, Samuel Ricardo;

HENNEBERG Railson; MERLIN, Júlio Cezar; STINGHEN, Sérvio Túlio. Porto Alegre:
Artmed, 2015. [Capítulo 14]