POP - Setor de Imunohematologia PDF

AGNCIA TRANSFUSIONAL - HOSPITAL UNIVERSITRIO JLIO MULLER
Rua Luis Philippe Pereira Leite, S/N Jardim Alvorada

CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
TITULO: IMUNOHEMATOLOGIA
Verso: 05 Cdigo: ImunoHem 07 paginao: 1 de 21

PROCEDIMENTOS OPERACIONAIS PADRO

NO

SETOR DE IMUNOHEMATOLOGIA

CEP 78048-902 Fone: 3615-7391

Elaborado: Hildenete Monteiro Fortes Assinatura:

Data da Elaborao: 08.06.2004

Aprovado e liberado por: Hildenete Monteiro Fortes

Data da implantao:

Data da Reviso: 10/11/11

Periodicidade da Reviso: anual REVISADO: Hildenete Monteiro Fores

Tempo de arquivo: 05 anos

Setor: Setor de Imunohematologia

Cdigo do documento: Imunohem 07

Nmero da verso atual: 05

Nmero total de Pginas: 21

Nmero de cpias - distribuio: 02 Original para a direo arquivo
Setor de Imunohematologia da Agncia Transfusional

ESTE UM DOCUMENTO CONTROLADO No deve ser copiado ou distribudo
sem a autorizao da chefia da agncia transfusional do HUJM.

CEP 78048-902 Fone: 3615-7391

1. OBJETIVO E APLICAO:
O objetivo da padronizao o melhor aproveitamento tcnico dos reagentes, mais
agilidade e confiabilidade nos exames realizados no setor de imunohematologia da
agncia transfusional do HUJM, obedecendo a (Portaria N
o
1353 de 13 de Junho de
2011).

2. OBJETIVOS GERAIS:
Identificar o Grupo Sangneo, realizar Coombs dirteo e pesquisar anticorpos
irregulares dos pacientes do HUJM.

3. OBJETIVO ESPECFICO:
Apoio tcnico nas investigaes imunohematolgicas para pacientes do HUJM.

4. PRINCPIO:
Determinar o Grupo ABO: A tipagem sangnea direta pesquisa a presena de
antgenos ABO nas hemcias teste e a reversa seus anticorpos correspondentes
utilizando hemcias conhecidas A1 e B. Caso haja necessidade ser feita a pesquisa de
subgrupos de A e AB.

Determinar o Fator Rh: Na determinao do tipo Rho (D), obrigatrio o uso do soro
anti-D e do controle Rh da mesmo fabricante e marca do soro Anti-D em uso, este
ltimo pela possibilidade da presena de auto-anticorpos e /ou protenas sricas
anormais.

Pesquisar Anticorpos Irregulares: Visa detectar anticorpos irregulares clinicamente
significantes no soro/plasma dos recm nascidos ou de suas mes, bem como de
pacientes do HUJM, consiste em testar o soro teste com hemcias conhecidas
(TRIACEL). Nos casos positivos devero ser identificados os anticorpos atravs do uso
de painel.

5. TIPAGEM SANGNEA ABO/ Fator Rh/Subgrupos

AMOSTRAS: Hemcias / soro ou plasma do doador

O tcnico do servio de Hemoterapia - SETOR DE COLETA dever colher s amostras
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
Identificao dos tubos de hemlise da amostra do doador ser feita na triagem
clnica com etiqueta de cdigo de barra, constando iniciais, nmero do doador e data
coleta.
Colher em tubo de hemlise 120x100 mm com EDTA - de 04 ml de sangue (ABO, Rh,
CRh)
Colher em tubo de hemlise seco 150x100 mm - 10 ml de sangue sem anticoagulante
para realizao de PAI.
As amostras hemolisadas ou lipmicas devem ser desprezadas.

MATERIAIS:

Equipamentos / Outros:

Centrfuga sorolgica de mesa
Estante porta tubos
Banho Maria 37C
Micropipetas: 50 l, 100 l e 1000 ul.
Tubos de hemlise 120x100 mm e 150x100 mm.
Negatoscpio ou aglutinoscpio

REAGENTES:

Soro mono ou policlonais anti-A, anti-B, anti-A,B. Caso seja utilizado anti-soros
MONOCLONAIS, a utilizao do soro anti-A,B no necessria.
Soro anti-D albuminoso (Rh), mono ou policlonais
Soro anti-D salino
Soro anti gama globulina = Coombs = Monoespecfico.
Soro poliespecfico = Anti Humano.
Controle de Rh, da mesma procedncia do soro anti-D.
Hemcias conhecidas de grupo A
1
e B em suspenso salina 3 5%.
Hemcias comerciais para triagem de anticorpos.
Controle de Coombs
Lecitinas anti-A
1
e anti-H.

PROCEDIMENTOS:

Antes de iniciar o trabalho de o dia fazer o controle interno de todos os reagentes que
sero utilizados na rotina para testes em tubo modelo anexo.
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391

MTODO EM TUBO

PREPARAR SUSPENSO HEMCIAS:
Identificar um tubo de hemlise 120x100 mm com nmero do Doador
Hemcias suspensa em SALINA 3 a 5%
Identificar 01 tubo de hemlise 120x100 nmero do doador
Colocar - 1000 l Salina soro fisiolgico
Colocar - 75 l Hemcias do Doador no tubo identificado

SEPARAO DO SORO

Centrifugar o tubo sem anticoagulante 3 min / 3400 rpm.
Separar o soro do doador em um tubo de hemlise j identificado.

CLASSIFICAO SANGUNEA ABO/Rh

O sistema ABO primeiro sistema de grupo sangneo descoberto, o nico onde
anticorpos estaro certamente presentes no soro de indivduos que no possuam o(s)
antgeno(s) correspondente(s). o sistema mais importante para a prtica
transfusional. A classificao direta pesquisa a presena dos antgenos ABO nas
hemcias testes, usando anti-soros, enquanto a reversa pesquisa seus anticorpos
correspondentes no soro, utilizando hemcias comerciais.

Identificar os tubos 120 x 100 mm com caneta de retro projetor

1. Colocar

A

B

AB

Rh

CR
h

HA

HB
DIRETA REVERSA
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
50 ul Soro Anti A no tubo A
50 ul Soro Anti B no tubo B
50 ul Soro Anti A,B no tubo AB
50 ul Soro Anti Rh (D) no tubo Rh
50 ul Controle Rh no tubo CRh - Controle de Rh
100 ul Soro teste (doador) nos tubos de HA e HB

2. Colocar

50 ul hemcias A1 no tubo HA
50 ul hemcias B no tubo HB
50 ul Suspenso Hemcias do doador nos tubos de A a CRh

3. Homogeneizar bem os tubos
4. Colocar para centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos ou 1000 rpm por 1 minuto
5. Ressuspender o boto de hemcias formado agitando levemente
6. Ler para aglutinao e hemlise, usando auxiliar tico.
7. Anotar os resultados em cruzes ou escore de acordo com a graduao apropriada

INTERPRETAO:

DIRETA REVERSA
Reagentes / Grupo
ABO
Soro
Anti-A
Soro
Anti-B
Soro
Anti-AB
Hemcias
A
1

Hemcias
B
A + - + - +
B - + + + -
AB + + + - -
O - - - + +

A presena de aglutinao nos tubos de hemcias teste e presena de hemlise nos
tubos de soro teste indicam reaes positivas.
Hemcias suspensas, aps leitura do boto de hemcias, correspondem a resultado
negativo.
Discrepncias entre a classificao direta e reversa devem ser resolvidas antes da
interpretao do grupo sanguneo da amostra teste. No devero ser liberados antes
da realizao de testes adicionais necessrios, incluindo-se testes com lecitinas anti-
A
1
e anti-H.
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
Qualquer discrepncia entre a tipagem DIRETA e REVERSA dever ser resolvida pelo
responsvel tcnico do servio que ser informado imediatamente.

Rh Positivo e Rh Negativo

O termo Rh positivo e Rh negativo, refere-se a presena (Rh positivo) ou
ausncia (Rh negativo) na membrana da hemcia do antgeno D, que , aps os antgenos
A e B, o mais importante em transfuso de sangue.
O anticorpo anti-D no esta normalmente presente no soro/plasma dos pacientes
Rh negativos. Seu desenvolvimento depende de uma exposio prvia ao antgeno, 80 %
das pessoas Rh negativo que recebem pelo menos uma transfuso Rh positivo, poder
desenvolver o anticorpo anti-D. O antgeno muito imunognico determinando que
grandes partes das pessoas expostas ao antgeno desenvolvam o anticorpo. Os
mecanismos comuns de imunizao gestao e/ou transfuso anterior.
Outros antgenos do sistema Rh tem tambm importncia clnica, entre eles C
(grande) e c (pequeno), E (grande) e e (pequeno). A combinao dos 05 principais
antgenos do sistema Rh, avaliando-se a partir da nomenclatura de Fisher e Race
oferece ferramentas para a resoluo de problemas dirios.

INTERPRETAO para tipagem Rh e Pesquisa de D-fraco:

Quando a tipagem para D ou D-fraco resultar positivo o sangue ser rotulado como Rh
POSITIVO.

Quando a tipagem para ambos resultar negativo o sangue ser rotulado como Rh
NEGATIVO.

Para que a tipagem do fator Rh possa ser considerado como vlido o resultado do
controle de Rh sempre NEGATIVO.

Caso o controle de Rh (tubo CRh) seja POSITIVO no considerar o seu Rh e proceder
da seguinte maneira:

Considerar INVLIDA a tipagem Rh.
Chamar o responsvel para resolver o caso.
Nestes casos dever ser utilizado o soro anti-D salino

Todos os resultados Rh Negativo fazer a pesquisa de D-fraco
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391

PESQUISA de D-fraco:

Pegar os 02 tubos de hemlise identificados Rh e CRh que deram negativos
Incubar os 02 tubos - Rh e CRh em Banho Maria a 37C durante 15 minutos
Retirar os tubos do BM e centrifuga-los a 3400 rpm por 15 segundos
Fazer a leitura para presena ou ausncia de aglutinao
Quando negativo realizar a lavagem 3 x com soro fisiolgico
Desprezar o sobrenadante e secar bem os tubos
Adicionar soro de Coombs (Anti IgG) 100 ul, homogeneizar bem os tubos
Centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos
Fazer a leitura
Se houver ausncia de aglutinao nos 02 tubos:
Pingar Controle de Coombs 50 ul cada tubo
Homogeneizar, centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos e fazer a leitura.
Para que o teste seja validado os tubos devem dar positivos, caso contrrio reiniciar
todos os procedimentos.

D fraco
A caracterstica de reagir de modo atpico com anti-D apresentada por algumas clulas
foi descrita por Stratton, em 1946, como sendo tais clulas portadoras do fentipo
D-fracas. De acordo com a descrio original, esse fentipo no reagia ao mtodo de
aglutinao direta, mas podiam ser expressos com o uso da tcnica de AGH indireto
(Coombs Indireto). Atualmente sabemos que a diferena entre D Positivo e D-fraco
quantitativa, no qualitativa. A maioria dos soros monoclonais utilizados regularmente
nas rotinas capaz de detectar a maioria das amostras que foram at ento
classificadas como D-fraco.

D Parcial
As hemcias que ao ser testado com antisoros monoclonais apresentarem resultados
negativos para o antgeno D, ou seja, Rh negativo devero ser testadas novamente
utilizando-se reagentes de origem humana, policlonais para determinao da
possibilidade de tratar-se de um D categoria. Sabe-se que a presena de epitopos de
um antgeno D parcial capaz de determinar a formao de um anticorpo
correspondente.
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
Os D parciais, fentipos raros de antgeno D positivos, foram divididos em categorias
numeradas de I a VII. As categorias III, IV e V, em face de algumas outras evidencias
sorolgicas foram subdivididas.

RECOMENDAES:
1. Utilizar um antissoro monoclonal que detecta o antgeno D parcial categoria VI
(DVI- ou IgG) e um antissoro que no detecta o antgeno D parcial categoria VI
(DVI- ou Ig M), quando houver discrepncia nos resultados entre os dois
antissoros utilizados deve-se investigar a presena de D fraco e D parcial na
amostra.
2. Em pacientes RhD-negativo recomenda-se a pesquisa de antgeno C e E

6. PESQUISA DE ANTICORPOS IRREGULARES

PRINCPIO:

Anticorpos ditos irregulares so aqueles formados por imunizao devido a
transfuses, gestao ou ingesto constante de material imunognico, sendo de classe
IgG ou IgM. um teste de triagem onde em casos de pesquisa positiva, deve-se
identificar a classe e especificidade do anticorpo. O teste emprega um KIT contendo
no mnimo duas suspenses de hemcias O (hemcias de triagem), as quais possuem a
maioria dos antgenos estudados em rotina de banco de sangue.
Havendo presena de anticorpos irregulares no soro a ser testado, estes reagiram com
os antgenos correspondentes, presentes nas hemcias de triagem.
Anticorpos da classe IgM so normalmente detectados em meio salino e temperatura
ambiente, enquanto que anticorpos da classe IgG so detectados atravs da utilizao
do soro antiglobulina humana aps a incubao a 37C. Quanto s enzimas
proteolticas, sabe-se que modificam os antgenos presentes na membrana
eritrocitria, podendo retir-los ou torn-los aglutinveis em suspenses salinas. Os
antgenos sensveis ao enzimtica so os dos sistemas MNS Duffy Xg
a
. Os
anticorpos cuja reatividade aumentada pela ao de enzimas so os dos sistemas Rh,
Kidd, Lewis e P. A ao enzimtica inclui ainda modificaes nas propriedades fsicas
da suspenso de hemcias, podendo causar auto-aglutinao sem presena de processos
auto-imunes.
As tcnicas enzimticas podem ser associadas ao soro anti-gama globulina humana
(soro anti IgG) e podem ser utilizadas em tcnicas de 1 ou 2 estgios. Na primeira
adiciona-se a enzima diretamente mistura soro + hemcias, sendo mais bem indicada
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
para testes de triagem enquanto que no segundo procedimento as hemcias so
previamente tratadas com enzimas e depois misturadas ao soro teste, sendo mais bem
indicado para identificao de anticorpos. As principais enzimas utilizadas em testes
imunohematolgicos so: BROMELINA (abacaxi), PAPAINA (mamo), TRIPSINA
(estmago de porco) e FICINA (ficus). As alquotas de soluo enzimticas devem ser
mantidas em freezer, devendo-se desprez-las aps o descongelamento e utilizao.

PESQUISA de ANTICORPOS: SALINA / ALBUMINA / A.G.H.

Identificar 2 Tubos

Soro desconhecido Pingar 100 ul cada tubo
Hemcias Triacel I Pingar 50 ul no tubo I
Hemcias Triacel II Pingar 50 ul no tubo II
Centrifugar 3400 rpm por 15 segundos ou 1000 rpm por 1 minuto
Ressuspender o boto de hemcias formado agitando levemente
Ler para aglutinao e hemlise, usando um auxiliar tico. Interpretar
Anotar os resultados em cruzes ou escore de acordo com a graduao apropriad

CASO os tubos I e II seja:

A. Negativo

Albumina Bovina 22% acrescentar 100 ul cada tubo
Incubar em Banho-maria 37C por perodo variando entre 15 minutos e 1 hora
de acordo com a orientao do fabricante.
Centrifugar 3400 rmp por 15 segundos, ler e anotar os resultados.

I II

I II

CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
Lavar 03 vezes com soro fisiolgico, desprezar o sobrenadante e secar os tubos.
Soro Anti Humano (Poli especfico) acrescentar 100 ul em cada tubo
Homogeneizar e centrifugar 3400 rpm por 15 segundos, ler e anotar os
resultados.

POSITIVO = presena de anticorpos irregulares encaminharem amostra ao MT
HEMOCENTRO para identificao de anticorpos e comunicar ao responsvel pelo
Servio.
NEGATIVO = Ausncia de anticorpos irregulares neste caso:
Acrescentar Controle Coombs 1 gota em cada tubo,
Homogeneizar e centrifugar os tubos a 3400 rpm por 15 segundos e ler, o resultado
dever ser POSITIVO com intensidade de 3 / 4+.

Esta ltima etapa permite avaliar:

Se as hemcias testes foram corretamente lavadas, caso contrrio haver
neutralizao dos anticorpos do reagente AGH pelas globulinas residuais presentes no
soro do paciente, que no foram totalmente retiradas com a lavagem das hemcias,
apresentando resultado falso-negativo, devendo-se assim repetir a pesquisa.
Se o soro AGH que est sendo utilizado esta funcionando. Repetir a pesquisa caso no
se observe aglutinao, utilizando um frasco novo de soro AGH.

B. Positivo: Fazer a identificao de anticorpos

7. IDENTIFICAO DE ANTICORPOS IRREGULARES:

OBJETIVO: Identificar e caracterizar o anticorpo, para fins de pesquisa de reaes
transfusionais e doena Hemoltica Peri-Natal. Seleo de sangue compatvel antgeno
negativo.

PRINCPIO: Anticorpos ditos irregulares so aqueles formados por imunizao devido
a transfuses, gestaes ou ingesto constante de material imunognico, sendo de
classe IgM ou IgG, Em testes pr-transfusionais, alm da determinao ABO e Rh e
prova de compatibilidade, obrigatria tambm a realizao da pesquisa de anticorpos
irregulares em receptores de hemocomponentes (RDC N
o
153 de 14/06/04). Quando
observada positividade no teste de triagem, deve-se identificar a classe e
especificidade do anticorpo responsvel e selecionar sangue compatvel, antgeno
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
negativo para a transfuso. A identificao de anticorpos emprega um kit contendo no
mnimo 10 suspenses de hemcias de adulto O e 01 suspenso de hemcia de cordo O.
A determinao da especificidade se d por comparao do resultado obtido com o
soro teste e um diagrama listando os fentipos das 11 hemcias, as quais possuem a
maioria dos antgenos estudados em rotinas de banco de sangue. Anticorpos de classe
IgM so normalmente detectados em meio salino e temperatura ambiente, enquanto
que anticorpos IgG so detectados atravs da utilizao do soro anti-humano
(POLIESPECIFICO) aps incubao a 37C.

AMOSTRAS: 10 ml de sangue sem anticoagulante. Encaminhada ao MT-
HEMOCENTRO, no fazemos identificao de anticorpos.

REAGENTES:

Estojo contendo no mnimo 10 hemcias de adultos em pool de hemcias de cordo de
grupo O, contendo a maior combinao de 3/5%, obtidas comercialmente ou preparadas
diariamente no laboratrio a partir de uma populao de doadores locais (no
aconselhvel).
Soluo fisiolgica.
Soro anti-humano (poli especfico).
Reagente comercial de hemcias controle, recobertas por anticorpos IgG
Albumina bovina a 22% (opcional).

MATERIAIS:

Centrfuga sorolgica de mesa.
Estante de metal, porta tubos.
Pipeta automtica 50 l e 100 l e 1000 l.
Tubos de ensaio 10 x 75 mm.
Negatoscpio para leitura.

PROCEDIMENTO:

1. Identificao de Anticorpos Irregulares (mtodo tubo)
2. Identificar 11 tubos de 10x75 mm, dispensar 50 ul das hemcias de painel
correspondente. Incluir tambm 01 tubo de autocontrole, dispensando 1 gota das
hemcias testes, em suspenso de 3-5%.
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
3. Adicionar 100 ul do soro a ser testados aos tubos.
4. Incubar por 20 minutos em temperatura ambiente.
5. Centrifugar por 15 segundos a 3400 R.P.M.. ou 1 minuto a 1000 R.P.M..
6. Realizar leitura e anotar os resultados.
7. No observando positividade, incubar os tubos a 37C por 60 minutos ou adicionar 2
gotas de albumina bovina a 22%, reduzindo o perodo de incubao para 20 minutos.
Em caso de presena de positividade nesta fase, resfriar os tubos a temperatura
de 16C tambm por 60 minutos (no utilizar albumina bovina aqui, evitando-se
resultados falsos positivos).
10. Lavar 03 vezes o contedo dos tubos com salina, decantando e secando bem as
bordas destes na ultima lavada.
11. Adicionar 100 ul de soro anti-humano (poli especfico).
13. Realizar leitura, anotar e interpretar os resultados.
14. Adicionar 50 ul de hemcias controle comercial (controcel), aos tubos onde se
observou reao negativa.
16. Realizar leitura o resultado dever ser positivo com intensidade de 3+/4+.


Se o soro AGH que est sendo utilizada esta funcionando. Repetir a pesquisa caso no
se observe aglutinao, utilizando um frasco novo de soro AGH.

INTERPRETAO:

Ausncia de aglutinao em todas as etapas do teste indica ausncia de anticorpos
irregulares contra os antgenos presentes nas hemcias de triagem.
Presena de aglutinao em incubao em temperatura ambiente indica presena de
anticorpos de classe IgM.
Presena de aglutinao em incubao a 37C indica presena de anticorpo de classe
IgM reativo e/ou anticorpo classe IgG. Anticorpos de classe IgM so considerados de
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
importncia clinica quando so reativos a partir de temperaturas de 30C, devendo-se
nesses casos selecionar sangue antgeno negativo para transfuso.
Presena de aglutinao em fase de anti-gamaglobulina humana indica presena de
anticorpos de classe IgG, os quais possuem importncia transfusional, devendo-se
sempre selecionar sangue antgeno negativo para transfuso.
Casos inconclusivos ou com presena de mltiplos anticorpos devero ser testados em
outras tcnicas descritas neste manual (P.E.G., D.T.T. enzimas), comparando-se os
resultados da(s) tcnica(s) apropriada(s) com o primeiro teste de identificao de
anticorpos realizados.
8. SELEO DE DOADORES DO GRUPO O COM BAIXO TTULO DE
AGLUTININAS O PERIGOSO

OBJETIVO: Seleo de sangue total ou plasma do tipo O em transfuses
heterologa. Este procedimento est sendo realizado no MT-HEMOCENTRO.

PRINCPIO: O sangue total de grupo O pode ser usado em pacientes com outros
grupos sangneos, em uma quantidade que no exceda um litro e nas emergncias.
Nestes casos devem ser testados em salina e ter um ttulo de aglutininas anti-A e anti-
B menor que 100.

AMOSTRAS: 05 ml de sangue sem anticoagulante.

MATERIAIS:

REAGENTES:
Soluo fisiolgica.
Suspenso de hemcias A
1
e B, a 3-5%.

PROCEDIMENTO:

1. Em tubo de ensaio 10x75 mm, limpo preparar uma diluio do soro a ser testado a
1/100 (diluio em soluo fisiolgica).
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
2. Transferir 100 l da diluio para dois tubos de ensaio 10x75mm, previamente
identificados como, A
1
e B.
3. Adicionar aos tubos 50 ul das hemcias A
1
e B, em seus respectivos tubos.
5. Realizar leitura e interpretar os resultados.

INTERPRETAO: Aglutinao em um dos dois tubos, A
1
e B indica presena de
aglutininas salinas a um ttulo maior que 1/100.
Os soros que no aglutinarem considerado de baixo titulo e este sangue pode ser
usado para transfuso heterloga.
Os soros que aglutinarem para uma ou ambas as hemcias, devero ser consideradas de
alto ttulo e no devem ser usados em transfuso Heterloga.

9. TITULAO DE ISOHEMAGLUTININAS

OBJETIVO: Exame imunohematolgico de auxilio no diagnstico de incompatibilidade
ABO materno-fetal. Este procedimento est sendo realizado no MT-
HEMOCENTRO.

PRINCPIO: A titulao de isohemaglutininas anti-A e anti-B realizada a fim de se
obter a quantidade relativa de anticorpos presentes no soro ou plasma a ser testado. O
titulo de um anticorpo dado pela realizao de diluies seriadas do soro contra
hemcias contendo o antgeno correspondente. O resultado obtido considerando-se a
maior diluio do soro onde observada a aglutinao.

AMOSTRAS: 04 ml de sangue sem anticoagulante.

MATERIAIS:

REAGENTES:
Soluo fisiolgica.
Hemcias de grupo A
1
e B em suspenso de 2 a 5%, as quais podem ser obtidas
comercialmente ou preparadas diariamente no laboratrio.
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391

PROCEDIMENTO:

1. Preparar uma bateria de tubo 10x75 mm identificando-os como: 1/1, 1/2, 1/4, 1/8,
1/16, 1/32, 1/64, 1/128, 1/256, 1/512, 1/1024, 1/2048 e 1/4096, para uma titulao
seriada.
2. Com exceo do tubo 1/1, adicionar 100 l de salina em todos.
3. Adicionar 100 l do soro a ser testado aos tubos 1/1 e 1/2.
4. A partir do tubo 1/2 transferir 100 l da mistura para o tubo seguinte
sucessivamente.
5. Reservar a ponteira no tubo 1/4096, caso seja necessrio continuar as diluies.
6. Com exceo do tubo 1/4096, adicionar 50 ul da suspenso de hemcias contendo o
antgeno correspondente a tipagem reserva do soro teste.
7. Incubar em temperatura ambiente por 20 minutos.

INTERPRETAO: Considerar como titulo a maior diluio do soro onde se observa
aglutinao fidedigna. Em caso de soro teste O, efetuar uma bateria para Anti-A e
outra para Anti-B. Soros de grupo AB, no tero titulo de isohemaglutininas.

10. DIFERENCIAO ENTRE AGLUTINAO E FNOMENO DE ROLEAUX

OBJETIVO: Descartar uma reao de falsa aglutinao

PRINCPIO: O fenmeno de Roleaux, confundido com o de aglutinao, pode ser
identificado microscopicamente e caracterizam-se por aderncia das hemcias umas as
outras se assemelhando uma pilha de moedas. importante tambm conhecer o
diagnstico do paciente e o meio diluente dos reagentes usados (protico ou salino).
Pois, sabe-se que as globulinas normalmente esto aumentadas quando a proporo 2:1
de albumina: globulina est invertida.

MATERIAIS:
Tubos de ensaio 10 x 75 mm e Negatoscpio para leitura.
REAGENTES: Soluo fisiolgica.
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391

PROCEDIMENTO (mtodo tubo)

1. Realizada a leitura do teste e detectado o fenmeno de Roleaux
2. Recentrifugar o contedo do tubo por 15 segundos a 3400 R.P.M.. ou 1 minuto a
1000 R.P.M..
3. Remover o soro do tubo teste e adicionar a mesma quantidade de salina (100 l)
homogeneizar.
4. Centrifugar novamente por 15 segundos a 3400 R.P.M.. ou 1 minuto a 1000 R.P.M..
5. Ressuspender o boto formado, realizando leitura.
INTERPRETAO: Adicionando-se a salina o fenmeno de roleaux desaparece e
havendo realmente aglutinao, esta permanecer visvel.
Em caso de dvida, observar em microscpio.

11. TESTE DA ANTIGLOBULINA DIRETA (T.A.D.)

OBJETIVO: Pesquisar sensibilizao in vivo atravs de transfuso e gestao

PRINCPIO: utilizado para demonstrar-se a presena de hemcias recobertas por
anticorpos in vivo, principalmente IgG e C3d.

AMOSTRAS: 05 ml de sangue com anticoagulante.

MATERIAIS:

REAGENTES:
Soro anti-gama globulina humana poli especfico (soro anti-humano).
Soro anti-gama globulina humana mono especfico (soro anti-IgG). O uso deste
reagente importante na diferenciao do tipo de globulinas presentes na superfcie
das hemcias a serem testadas
Hemcias a serem testadas lavadas por no mnimo 03 vezes com soluo fisiolgica e
preparadas em suspenso de 3-5%.
Reagente comercial de hemcias controle, recobertas por anticorpos IgG.
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391

PROCEDIMENTO (mtodo tubo)

1. Identificar 2 tubos de 10x75 mm um TESTE e um P POSITIVO),
2. Pingar 1 gota das suspenso de hemcias (j lavada anteriormente) de 3-5% a ser
testada T e o controle (controcel) no tubo P
3. Pingar 2 gotas do soro de Coombs ou AGH em cada tubo
4. Centrifugar por 15 segundos a 3400 R.P.M ou 1 minuto a 1000 R.P.M, a fim de
observar-se reao por anticorpos classe IgG e C3d (AGH).
6. Observando-se ausncia de aglutinao.
7. Adicionar 1 gota de hemcias controle comerciais (controcel) no tubo T caso se
observou reao negativa.
8. Centrifugar por 15 segundos a 3400 R.P.M ou 1 minuto a 1000 R.P.M.
9. Realizar leitura, o resultado dever ser positivo com intensidade de 3+/4+.


Se o soro AGH que est sendo utilizada esta funcionando. Repetir a pesquisa caso no
se observe aglutinao, utilizando um frasco novo de AGH.

Interpretao
Hemcias testes sem aglutinao e o controle com aglutinao indicam resultado
negativo. Caso no seja observada aglutinao no tubo de hemcias controle devem-se
desconsiderar os resultados do T.A.D. e realizar-se um novo procedimento.
Em amostras com T.A.D. positivo, devero ser realizados testes adicionais, incluindo-se
eluio e pesquisa de fraes de complementos e IgA. No devero ser liberados
resultados antes da concluso de toda a pesquisa.
Reao Positiva: Presena de anticorpos. Presena de alo-anticorpos em casos de
Doena Hemoltica do Recm-Nascido (D.H.R.N.) ou Reaes Hemolticas Ps-
Transfusionais.

12. RESPONSABILIDADES: Dos colaboradores que executam as atividades neste
setor.
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391

Bioqumico
Tcnico de laboratrio.
Auxiliar de analises clinica.

13. COMENTRIOS: Este manual foi elaborado e implantado para ser seguido por
todos os profissionais envolvidos, padronizando todas as atividades desenvolvidas
neste setor.

14. NORMAS DE SEGURANA
Os profissionais da rea de sade que manipulam materiais biolgicos devem obedecer
aos procedimentos bsicos de biossegurana tambm devero estar fazendo a
segurana do meio ambiente.

GERAIS:
1. Descartar as lancetas, algodo e capilar dentro do descarpack.
2. Nunca recapar as lancetas.
3. No abrir a centrfuga de microhematcrito antes da sua parada completa.
4. No jogar material biolgico na pia.
5. Fazer desinfeco concorrente no trmino de cada perodo e desinfeco terminal
mensalmente.
6. Lixo comum acondicionar em sacos escuros
7. Lixo infectante acondicionar em sacos brancos leitoso
8. Em caso de derramamento de material biolgico, despeje hipoclorito de sdio 1% e
deixe agir por 20 minutos, limpar com papel toalha e descart-lo em recipiente
apropriado.
9. Todo material cortante, perfurante ou perfuro-cortante tais como ampolas, lminas
cortantes, agulhas e seringas, devem ser lacrados e enviados ao expurgo. No
despreze estes materiais em outros cestos de lixo.
10. Caso ocorra algum ferimento durante seu trabalho, procure imediatamente o
servio mdico dos funcionrios para comunicar a ocorrncia e receber orientao.
11. Todo material cortante, perfurante ou perfuro-cortante tais como ampolas, lminas
cortantes, agulhas e seringas, devem ser lacrados e enviados ao expurgo. No
despreze estes materiais em outros cestos de lixo.
12. As bolsas de hemocomponentes no devem ser colocadas diretamente nas latas ou
depsitos de lixo;
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
13. Toda bolsa de sangue e hemocomponentes a ser descartada deve ser submetida a
algum mtodo que elimine a infectividade de patgenos eventualmente presentes;
14. Depois de inativados as bolsas devem ser acondicionadas em sacos plsticos
destinados a resduos biolgicos;
15. permitido o transporte de bolsas para serem incineradas em outros locais desde
que, sejam transportados em recipientes rgidos, lacrados, identificados e em
veculos apropriados;
16. Os demais materiais que devero ser desprezados tais como frascos de soros,
seringas e equipos que no contenham sangue devem ser colocados em outro cesto
de lixo.

INDIVIDUAIS:
1. Lavar as mos antes e aps qualquer procedimento.
2. O papel utilizado para enxugar as mos aps a lavagem pode ser usado para fechar a
torneira, evitando uma eventual "recontaminao".
3. Troque as luvas imediatamente caso elas se contaminem com material biolgico ou
apresentem sinais de perfurao ou rompimento;
4. Ao remover as luvas inverta-as completamente, evitando, que sua poro exterior
entre em contato com qualquer superfcie;
5. Quando estiver utilizando luvas evitar tocar superfcies limpas, tais como
telefones, mesas ou maanetas de portas;
6. Ao manipular o paciente utilize uma nova luva desprezando a anterior em local
adequado.
7. Utilizar os equipamentos de proteo individual.
8. Trajar vestimentas totalmente brancas ou aventais longos brancos de mangas
compridas, caso estejam trajando roupas que no sejam brancas;
9. Troque o avental sempre que estiver sujo e/ou contaminado.
10. Evitar sentar nas macas ou nas camas dos pacientes, sentar no cho, sentar nas
mesas ou nos balces existentes no ambulatrio;
11. proibido comer, beber, fumar, cortar as unhas, passar cosmtico ou colocar
lentes de contato no setor;
12. Cabelos longos devem ser presos;

15. TREINAMENTO - Objetivo o aprimoramento contnuo

Ser dado treinamento a todos os colaboradores da AGNCIA
TRANSFUSIONAL, antes da implantao deste manual de procedimentos, so
responsabilidades dos colaboradores participarem dos treinamentos e implant-los na
CEP 78048-902 Fone: 3615-7391
prtica. A reciclagem ser feita anualmente ou quando novos colaboradores sejam
admitidos.

16. FORMULRIOS/DOCUMENTOS RELACIONADOS

Mapa para controle dirio dos reagentes utilizados.

17. CONTROLE DE REGISTRO: Deve-se ter registrado todos os exames
realizados no setor e arquivados por 20 anos.

18. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:

1. Issitt, Peter D. & Issitt, Charla H. Applied Blood Group Serology. Second Edition
Second Repriting, jully 1977. Editora Spectra Biologicals (Division of Becton,
Dickinson and Company B-D).
2. Biotest S/A Industria E Comrcio. Triacel Reagente de Glbulos Vermelhos
Humanos (bula). Mdico Resp. Dr Jacob Rosenblit CRM 4313.
3. Manual De Procedimentos Operacionais Padro. Fundao Pr-Sangue, So Paulo
SP.
4. Padronizao Laboratrio de Compatibilidade UNICAMP
5. Unidade de Pesquisa lmunohematolgica HEMOAM
6. Biotest s/a industria e comrcio. triacel reagente de glbulos vermelhos humanos
(bula). mdico resp. Dr Jacob Rosenblit CRM 4313.
7. Manual de procedimentos operacionais padro. Fundao Pr-Sangue, So Paulo
SP.
8. Marcelli. a. et alli. Techniques en Imuno-hmatologie. mdecine-sciences.
flamarion. 1981.
9. Lima, Callado Santos. Curso de imunohematologia. Faculdade de Medicina de
Botucatu. UNESP. 1992.
10. Technical Manual, American Association of Blood Banks 12 th edition, 1996.
11. Conselho Federal de Enfermagem - Resoluo COFEN N 200 de 15 de Abril de
1997
12. ABO Revista de MEDICINA Transfusional, Nmero 12 Dezembro de 2002
13. Ministrio de Estado da Sade Portaria N
o
1353 de 13 de Junho de 2011.

POP - Setor de Imunohematologia PDF

Enviado por

Dados do documento

Título original

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

POP - Setor de Imunohematologia PDF

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

AGNCIA TRANSFUSIONAL - HOSPITAL UNIVERSITRIO JLIO MULLER

Rua Luis Philippe Pereira Leite, S/N Jardim Alvorada

Você também pode gostar