BCL 0308-15

Bioqumica: estrutura, propriedade e

funes de biomolculas

APOSTILA DE LABORATRIO

2017.3

Coordenador: Prof. Dr. Paulo de Avila Junior

Autores: Ncleo Docente da UFABC
1
 NDICE

CRONOGRAMA ............................................................................................................................... 3

SEGURANA E NORMAS DE TRABALHO NO LABORATRIO ............................................. 4

BIBLIOGRAFIA ................................................................................................................................ 5

CRITRIOS DE AVALIAO ........................................................................................................ 6

PRTICA 1: Propriedades da gua, solubilidade e uso de micropipetas ......................................... 8

PRTICA 2: Aminocidos: estudo da estrutura e propriedades cido-base .................................. 11

PRTICA 3: Espectrofotometria e dosagem de protenas pelo mtodo de Biureto ....................... 13

PRTICA 4: Atividade enzimtica e desnaturao de protenas ................................................... 18

PRTICA 5: Extrao e caracterizao de lipdios ........................................................................ 20

PRTICA 6: Carboidratos: estrutura e propriedades ..................................................................... 23

PRTICA 7: Extrao de DNA vegetal ......................................................................................... 25

Coordenador (2017)
Prof. Dr. Paulo de Avila Junior
paulo.avila@ufabc.edu.br
2
 CRONOGRAMA

SEMANA ATIVIDADES

1 (21/09) PRTICA 1: Propriedades da gua, solubilidade e uso de micropipetas.

2 (28/09) PRTICA 2: Aminocidos: estudo da estrutura e propriedades cido-base.

PRTICA 3: Espectrofotometria e dosagem de protenas pelo mtodo de

3 (05/10)
Biureto.

4 (12/10) FERIADO.

5 (19/10) Discusso dos experimentos e resultados experimentais.

1 Avaliao de laboratrio. Poder ser realizada em sala de aula a ser

6 (26/10)
reservada pelo(a) docente de laboratrio da turma.

7 (02/11) FERIADO.

8 (09/11) PRTICA 4: Atividade enzimtica e desnaturao de protenas.

9 (16/11) PRTICA 5: Extrao e caracterizao de lipdios.

10 (23/11) PRTICA 6: Carboidratos: estrutura e propriedades.

11 (30/11) PRTICA 7: Extrao de DNA vegetal.

2 Avaliao de laboratrio. Poder ser realizada em sala de aula a ser

12 (07/12)
reservada pelo(a) docente de laboratrio da turma.

13 (11/12)
*Avaliao substitutiva de laboratrio (prova escrita)
Reposio
*Vistas de Provas e Conceitos (Resoluo ConsEPE N.120)
de feriado
13 (15/12)
Reposio *Vistas de Provas e Conceitos
de feriado
*Somente em caso de falta justificada (Resoluo ConsEPE 181). O(A) docente de laboratrio
reservar o local de aplicao da prova e informar a(s) turma(s) com antecedncia.

As aulas prticas no sero repostas em caso de falta.

3
SEGURANA E NORMAS DE TRABALHO NO LABORATRIO

Leia integralmente o Guia de Segurana, Experimentos e Atividades (3ed.) da disciplina de Base

Experimental das Cincias Naturais. Destacam-se:

Segurana
Conhea a localizao dos chuveiros de emergncia, extintores e lavadores de olhos.
Use sempre avental, mantenha os cabelos presos e use calados fechados, mesmo na
aula reservada para o preparo da prtica seguinte;
Os culos so obrigatrios!
Usar a capela sempre que possvel;
Nunca pipete com a boca, no cheire, nem experimente os produtos qumicos;
Comes e bebes, s fora do laboratrio;
Consulte o professor cada vez que notar algo anormal ou imprevisto;
Comunique qualquer acidente, por menor que seja ao professor;
Se utilizar chama, mantenha longe de qualquer reagente!
Nunca brinque no laboratrio;
Evite o contato de qualquer substncia com a pele;
Nunca aquea o tubo de ensaio, apontando a extremidade aberta para um colega ou para
si mesmo.
Cuidado ao aquecer vidro em chama: o vidro quente tem exatamente a mesma aparncia
do frio.
Procedimentos gerais
Siga rigorosamente as instrues fornecidas pelo professor.
Pesquise sempre a toxicidade dos reagentes antes das prticas.
Nunca abra um recipiente de reagente antes de ler o rtulo.
Evite contaminar reagentes, nunca retorne o excedente aos frascos de origem.
Adicione sempre cidos gua, nunca gua a cidos.
No coloque nenhum material slido dentro da pia ou nos ralos.
No coloque resduos de solventes na pia ou ralo; h recipientes apropriados para isso.
No atire vidro quebrado no lixo comum. Deve haver um recipiente especfico para
fragmentos de vidro.
Verifique se as conexes e ligaes esto seguras antes de iniciar uma reao/destilao
Ao terminar a prtica, lave o material utilizado e deixe-o em ordem.

4
 BIBLIOGRAFIA
Bsica
LEHNINGER, A.L.; NELSON, D.L.; COX, M.M. Princpios de bioqumica. 4ed. SP: Sarvier,
2006. 1202 p.
VOET, D.; VOET, J.G. Bioqumica. 3 ed. Porto Alegre:Artmed, 2006, 1596 p.
BERG, J. M.; TYMOCZKO, J.L; STRYER, L. Bioqumica, 5 ed., Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2004.
KOOLMAN, J.; ROEHM, K. H. Color Atlas of Biochemistry 2012, 3rd Edition ISBN:
9783131003737

Complementar
BERG, J.M.; TYMOCZKO, J.L.; STRYER, L. Biochemistry. 6.ed. New Jersey: John Wiley, 2006.
1026 p.
MARZZOCO, A.; TORRES, B.B. Bioqumica Bsica. 3 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
2007. 386 p.
CHAMPE, P.C; Harvey, R.A.; Ferrier, D.R. Bioquimica ilustrada, 3 ed., Porto Alegre: Artmed,
2006. 533 p.
DEVLIN, T.M. Textbook of biochemistry with clinical correlations, 6.ed., New Jersey: WileyLiss,
2006. 1208p.
FERREIRA, C.P.; JARROUGE, M.G.; MARTIN, N.F. Bioqumica Bsica. 9 ed. SP: MNP Ltda,
2010. 356 p.
GARRETT, R.H.; GRISHAM, C.M. Biochemistry. 3.ed. Belmont: Thomson, 2005. 1086 p.
(International Student edition).
KAMOUN, P.; LAVOINNE, A.; VERNEUIL, H. Bioqumica e biologia molecular. RJ: Guanabara
Koogan, 2006. 420 p.
VOET, D.; VOET, J.G. Biochemistry. 3.ed. New Jersey: John Wiley, 2003. 1590 p.
VOET, D.; VOET, J.G.; Pratt, C.W. Fundamentals of biochemistry: life at the molecular level. 3ed.,
2008. 1099 p.

Informaes tcnicas (propriedades fsicas, toxicidade, preo, nomenclatura)

1. CRC Handbook of Chemistry and Physics
2. Sigma-Aldrich - www.sigmaaldrich.com
3. IUPAC Gold Book - http://goldbook.iupac.org/
4. Merck Index

Bases de Dados/Referncias
1. The Web os Science (www.isiknowledge.com)
2. SciELO - Scientific Electronic Library Online (www.scielo.org)

5
 CRITRIOS DE AVALIAO
Os conceitos a serem atribudos ao longo da disciplina estaro de acordo com os critrios contidos no
Sistema de Avaliao do Processo de Ensino e Aprendizagem, parte do Projeto Pedaggico do BC&T.

Conceito Desempenho
Desempenho excepcional, demonstrando excelente compreenso da disciplina e do uso do
A
contedo.
B Bom desempenho, demonstrando boa capacidade de uso dos conceitos da disciplina.
Desempenho mnimo satisfatrio, demonstrando capacidade de uso adequado dos conceitos
C da disciplina, habilidade para enfrentar problemas relativamente simples e prosseguir em
estudos avanados.
Aproveitamento mnimo no satisfatrio dos conceitos da disciplina, com familiaridade
parcial do assunto e alguma capacidade para resolver problemas simples, mas demonstrando
deficincias que exigem trabalho adicional para prosseguir em estudos avanados. Nesse caso,
D
o aluno aprovado na expectativa de que obtenha um conceito melhor em outra disciplina,
para compensar o conceito D no clculo do CR. Havendo vaga, o aluno poder cursar esta
disciplina novamente.
F Reprovado. A disciplina deve ser cursada novamente para obteno de crdito.
O Reprovado por falta. A disciplina deve ser cursada novamente para obteno de crdito.

Determinao do conceito final na disciplina

A determinao do conceito final na disciplina envolver a relao entre os desempenhos obtidos nas partes
prtica (Lab) e terica (Teo), conforme tabelas abaixo. Por exemplo,
- casoumalunoobtenhaconceitoAnaprimeiraavaliaonolaboratrio(coluna:LabP1)econceitoC
naprimeiraavaliaodateoria(linha:TeoriaP1),terconceitoparcial1(CP1)B(tabela 1).
- caso esse mesmo aluno obtenha conceito A na segunda avaliao no laboratrio (coluna: Lab P1) e
conceitoBnasegundaavaliaodateoria(linha:TeoriaP1),terconceitoparcial2(CP2)A(tabela 2).
- na tabela 3 sero relacionados os conceitos parciais 1 (CP1) e 2 (CP2) na determinao do conceito final do
aluno. Nesse exemplo: CP1 = B e CP2 = A. Logo, conceito final = A (tabela 3).

Tabela 1: Conceito parcial 1 (CP1) primeira avaliao de teoria e primeira avaliao de laboratrio:
Teoria
P1
Lab P1 Desempenho A B C D F
A A A B C D
B A B C C F
C B B C D F
D B C C D F
F C D F F F

Tabela 2: Conceito parcial 2 (CP2) segunda avaliao de teoria e segunda avaliao de laboratrio:
Teoria
P2
Lab P2 Desempenho A B C D F
A A A B C D
B A B C C F
C B B C D F
D B C C D F
F C D F F F
6
Tabela 3: Determinao do Conceito Final a partir dos conceitos parciais 1 (CP1) e 2 (CP2):
CP2
CP1 Desempenho A B C D F
A A B B C D
B A B C C D
C B B C D F
D B C C D F
F C D F F F

Ateno: para cada avaliao no realizada ser atribudo conceito F. Em caso de falta justificada, o
aluno realizar uma prova escrita substitutiva com o mesmo contedo da avaliao no realizada
(Resoluo ConsEPE UFABC n. 181, de 23/10/14).

4.2 Para ser considerado aprovado na disciplina, o aluno dever cumprir, simultaneamente, as seguintes
condies:
1) ter comparecido, no mnimo, a 75% do total das aulas da disciplina (teoria e laboratrio);
2) obter,nomnimo,oconceitofinalDnadisciplina.

O(A) docente de teoria e o(a) docente de laboratrio da respectiva turma informaro aos alunos na
primeira aula quais sero as datas das provas que aplicaro.

4.4 Recuperao
A avaliao de recuperao (exame) ser uma prova escrita a ser realizada na primeira semana de
2018.1 em data, local e horrio a serem combinados com o(a) professor(a) da teoria (Resoluo
ConsEPE n.182 a qual regulamenta a aplicao de mecanismos de recuperao nos cursos de graduao da
UFABC).
A avaliao de recuperao (exame) poder envolver todos os conhecimentos explorados na disciplina (aulas
tericas e de laboratrio) e destinado ao discente que for aprovado com Conceito Final D ou reprovado
com Conceito Final F. O(A) aluno(a) que obtiver conceito final D e tiver interesse em realizar o exame de
recuperao dever informar o(a) professor(a) com antecedncia.

A determinao do novo conceito final na disciplina envolver a relao entre os desempenhos obtidos na
avaliao de recuperao (exame) e o conceito final obtido na disciplina durante o quadrimestre (CF),
conforme tabela abaixo (tabela 4).

Tabela 4: Determinao do Novo Conceito Final a partir do conceito final obtido durante o
quadrimestre (CF) e o conceito obtido na avaliao de recuperao (Exame):
Exame
CF Desempenho A B C D F
D B B C D F
F C C D D F

7
 Prtica 1: Propriedades da gua, solubilidade e uso de micropipetas.

Ateno: no recarregar o celular no laboratrio. Em hiptese alguma, retirar aparelhos da

tomada! H micropipetas que requerem apertar boto para acertar o volume (figura abaixo).
Em caso de dvidas, consultar o(a) professor(a) e/ou os tcnicos no laboratrio.

Parte 1: Uso e calibrao de micropipetadores

Objetivos: aprender o modo de pipetagem direta (esgotamento total) no modo positivo, determinar
o limite de preciso de micropipetas e testar a sua calibrao (volume real).

Materiais
- gua destilada
- 1 unidade de micropipeta automtica de volume varivel por grupo (P1000)
- Balana de preciso de 1 mg (3 ou 4 casas decimais)
- Ponteiras
- 1 bquer de 50 mL
- Papel absorvente

Procedimento
Utilizar a micropipeta de volume varivel disponvel para o seu grupo (P1000).
1. Colocar o bquer seco na balana e zerar (clicar em tara). Sem retirar o bquer da balana,
execute o item 2 (abaixo). Evite manusear o bquer durante a pesagem, pois os resduos das mos
(gorduras, ceras, cosmticos) podem interferir na determinao da massa.
2. Pipetar gua com volume mximo, 100%, (nominal) da micropipeta no modo positivo para o
bquer. Em seguida, anotar a massa de gua numa tabela escrita no caderno de laboratrio. Zerar a
balana. Repetir esta etapa trs vezes.
3. Repetir os itens 1 e 2 para gua com 20%, 40%, 50%, 60% e 80% do volume mximo (nominal)
da micropipeta no modo positivo, ajustando o volume sempre no sentido horrio.

8
Anlise dos dados
1. Fazer uma tabela no caderno de laboratrio contendo os valores de massa de cada pipetagem.
2. Expressar o valor mdio do volume pipetado erro padro. Fazer uma anlise da variao de
volume por pipetagem. Comparar o volume real (massa da gua) com volume ajustado na
micropipeta.

Parte 2: Propriedades fsico-qumicas da gua e formao de micelas

Objetivo: estudar as propriedades fsico-qumicas da gua e a formao de micelas aquosas de SDS

(dodecil sulfato de sdio, C12H25SO4Na, representao abaixo) influenciadas pela fora inica do
meio. Estudar as interaes intermoleculares e solubilidade.

Dodecil sulfato de sdio, C12H25SO4Na

Materiais
- 7 tubos de ensaio de 20ml por grupo
- Suporte para tubos
- 1 unidade de micropipeta automtica de volume varivel por grupo (P20, P200, P1000)
- Ponteiras
- Papel absorvente
- 2 bquer de 50ml
- NaCl (cloreto de sdio M.M. 58,5 g/mol)
- Soluo de SDS (dodecil sulfato de sdio / C12H25NaO4S , M.M. 288 g/mol ) a 40 mmol/L
- Soluo de CaCl2 (cloreto de clcio M.M. 110,98 g/mol) 1 mol/L
- gua destilada
- Agitador Vrtex

Procedimento
Cada grupo dever preparar 5ml de soluo 1M de NaCl (1mol/L). Num bquer de 50mL, adicionar
a massa de NaCl calculada. No caderno, anotar a massa de NaCl realmente utilizada. Adicionar,
com o uso de micropipeta, 5ml de gua destilada no bquer. Colocar os respectivos volumes nos
tubos de ensaio conforme tabela abaixo. Ateno: usar uma ponteira para cada soluo. Aps a
adio do detergente em todos os tubos, agitar manualmente e depois no agitador Vrtex.

9
Na tabela, assinalar 0 se no observar a formao de espuma, + se observar a formao de
poucaespumaou++ se observar a formao de bastante espuma aps agitao.

Reagente
Tubo de
gua Surfactante Soluo Soluo Resposta
Ensaio
Destilada SDS NaCl 1M CaCl2 1M
2 ml
1 - - - ( )
(2000 l)
2 1925 l 75 l - - ( )
3 1800 l 200 l - - ( )
4 1575 l 75 l 350 l - ( )
5 1625 l 200 l 175 l - ( )
6 1575 l 75 l - 350 l ( )
7 1625 l 200 l - 175 l ( )

Anlise dos dados

1. Discutir os resultados obtidos.
2. A molcula de SDS polar ou apolar? Justifique.
3. Representar com o uso do modelo de esferas que representam os tomos a formao de uma
micela de SDS em gua (inserir legenda para os tomos). Apresentar as possveis interaes
intermoleculares que ocorrem na presena dos sais empregados.

Para a prxima aula

Procurar pelos valores de pK dos grupos ionizveis dos aminocidos que sero estudados na
prxima prtica. Apesar das solues serem previamente preparadas pela equipe tcnica do
laboratrio e fornecidas aos alunos, todos devero apresentar os clculos no caderno de laboratrio
para a preparao das solues envolvidas no experimento, admitindo a preparao de 100 mL de
cada e partindo dos reagentes comerciais.

Leituras complementares
FREITAS, M.M.C., SANTOS, F.K.G., LEITE, R.H.L., NBREGA, G.AS., NUNES, S.K.S.
Avaliao da interferncia de salinidade e dureza da gua no processo de micelizao com sabo
base. Revista Verde de Agroecologia e Desenvolvimento Sustentvel, v.8, n.4, p.136-146, out-dez,
2013.
ROCHA, W.R. Interaes intermoleculares. Cadernos Temticos de Qumica Nova na Escola, n.4,
p.31-36, Mai./2001.

10
 Prtica 2: Aminocidos: estudo da estrutura e propriedades cido-base.

Ateno: no recarregar o celular em nenhuma tomada do laboratrio! Em hiptese alguma,

retirar aparelhos da tomada.

Objetivo: determinar os valores de pKa de aminocidos por titulaes cido-base. Construir os

grficos e comparar os perfis das curvas, correlacionando os valores de pK a. Estudos da estrutura de
aminocidos, equilbrios qumicos, soluo tampo e reao cido-base.

Materiais
- Solues 0,05 mol/L de glicina, arginina e cido glutmico.
- Soluo 4 mol/L de HCl
- Soluo 0,125 mol/L de NaOH
- pHmetro
- 1 pipetas volumtricas de 20 mL
- 1 pipetas de Pasteur
- 1 bureta de 25ml
- 1 tubo Falcon de 50 mL

Procedimento
Para as titulaes, podero ser utilizados vrios aminocidos, sendo recomendado didaticamente o
uso de glicina, arginina e cido glutmico. Cada grupo dever titular um aminocido sugerido
pelo(a) professor(a) e os resultados devero ser compartilhados entre os grupos de modo que cada
grupo possua resultados referentes s trs titulaes.

1. Pipete 20 mL de uma soluo 0,05 mol/L da soluo de aminocido e adicione em um tubo

Falcon de 50 mL. Insira o eletrodo do pHmetro (devidamente calibrado) no tubo e faa a medida do
pH e anote o valor. Em seguida, acidifique a soluo do aminocido com HCl 4 mol/L at que o pH
do meio seja igual a 1,0. Seja cuidadoso na adio de cido e utilize conta-gotas nesta etapa.
2. Complete uma bureta de 25 mL com soluo de NaOH 0,125 mol/L e inicie a titulao
adicionando pores de 0,5 mL da base, medindo o pH aps cada adio. Lembre-se de agitar com
cuidado a mistura titulada e ento aferir o pH.
3. Efetue adies sucessivas at que o pH do meio apresente valor entre 12,7 a 13,0. Aps isso, lave
o eletrodo com gua destilada e coloque-o imerso na soluo tampo de armazenamento do
eletrodo.

Anlise dos dados

1. Construir uma tabela contendo os valores de pH juntamente com os respectivos volumes de
NaOH adicionados para cada aminocido titulado.
2. Lance em grfico os valores de pH (eixo y) em funo dos volumes da soluo titulante de NaOH
(eixo x). Faa isso para cada aminocido (trs grficos separados) e depois faa um grfico
contendo as trs curvas superpostas.
3. Indique nos grficos lanados individualmente os valores dos pKa (pKa1, pKa2 e pKaR se houver)
e indique o ponto isoeltrico (pI). Obtenha os valores de pKa determinados experimentalmente

11
(localizando os pontos de inflexo na curvas) e compare-os com os valores de referncia da
literatura.
4. Escreva as equaes de equilbrio (todas as etapas) das espcies qumicas envolvidas nas
titulaes.
5. Faa uma anlise do perfil das curvas obtidas correlacionando com os valores de pKa obtidos e as
funes orgnicas presentes. Voc acha que se fossem realizadas adies sucessivas de 0,25 mL de
soluo de NaOH seria possvel calcular o valor de pKa com maior preciso? E se fosse utilizada
uma soluo 0,1 mol/L de NaOH?
6. No caso especfico do cido glutmico, os primeiros valores de pKa so relativamente difceis de
serem obtidos experimentalmente. Explique estes fatos dizendo se as medidas citadas acima podem
melhorar a qualidade da curva e facilitar a obteno destes valores de pKa.
7. Aps construir todas as curvas aponte qual a espcie predominante nas solues iniciais de
aminocidos utilizadas (medida inicial do pH antes da adio do HCl). Explique suas respostas.
8. a. Utilizando a equao de Henderson-Hasselbalch, justifique qual seria a representao (A ou B)
predominante da estrutura geral de um aminocido em soluo aquosa com pH = 7. Considerar
pK1( -COO-) = 2 e pK2( -NH3+) = 10.

Equao de Henderson-Hasselbalch: pH = pKa + log [base conjugada (A-)]

[cido conjugado (HA)]

(A) (B)
b. Desconsiderando a cadeia lateral, seria possvel encontrar aminocidos com a estrutura A
(representada no item acima) em pH = 14? ( ) Sim ( ) No
9. Sabendo que o cloreto de sdio, NaCl, um slido inico que apresenta alta solubilidade em
gua; que o cido clordrico, HCl, um cido forte; e que o hidrxido de sdio, NaOH, uma base
forte, um aluno afirmou que caso fossem misturados num mesmo recipiente volumes iguais de
solues, de baixas e iguais concentraes, de cido clordrico e hidrxido de sdio, haveria apenas
a formao de gua. Alm disso, afirmou que aps a mistura os ons cloreto e sdio permaneceram
solubilizados da mesma forma que estavam na soluo de origem. Voc concorda com esse aluno?
Justifique sua resposta com o uso de reao qumica.

Para a prxima aula

No caderno de laboratrio, preencher a tabela do experimento 3 (p.13) com os volumes a serem
adicionados em cada tubo de ensaio (modelo de preenchimento na p.9).
Ler tpico informaes importantes (a partir da p.14).

Leitura complementar
MARCONATO, J.C., FRANCHETTI, S.M.M., PEDRO, R.J. Soluo tampo: uma proposta
experimental usando materiais de baixo custo. Qumica Nova na Escola, n.20, p.59-62, Nov./2004.

12
 Prtica 3: Espectrofotometria e dosagem de protenas pelo mtodo de Biureto.

Ateno: no recarregar o celular em nenhuma tomada do laboratrio. Em hiptese alguma,

retirar aparelhos da tomada.

O fenmeno de absoro de luz diretamente por macromolculas ou cromforos formados por

reaes secundrias usado para caracterizao espectral e/ou quantificao dessas substncias por
espectrofotometria. Este experimento didtico tem como proposta apresentar a tcnica de
espectrometria de absoro eletrnica no UV-vis aplicada Bioqumica, explorando a Lei de
Lambert-Beer. Para esta aula, ser usado o mtodo do Biureto para quantificao de protenas,
primeiramente determinando o comprimento de onda de mxima absoro do cromforo para se
construir uma curva-padro (curva de calibrao). Esta curva ser usada para a determinao da
concentrao de protenas de uma amostra desconhecida.

Objetivos: determinar o espectro de absoro UV-visvel do complexo formado entre os ons Cu2+
presentes no reagente de Biureto e protenas. Utilizar o comprimento de onda de absorbncia
mxima para a elaborao de uma curva-padro e determinao da absortividade. Calcular a
concentrao de protena em uma soluo de albumina bovina. Estudo da estrutura de protenas.

Materiais
- reagente de Biureto
- gua destilada
- espectrofotmetros
- cubetas
- papel absorvente macio para limpeza das cubetas
- 2 pipetas volumtricas de 2 mL
- pera
- estante
- 9 tubos de ensaio
- agitador tipo vrtex
- solues-padro de Albumina de Soro Bovino (BSA) com as seguintes concentraes em % (m/v):
0,125; 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,25 e 1,75.
- amostra de concentrao de protena desconhecida

Procedimentos

Como fazer a reao de Biureto: Adicionar 0,5 mL da amostra de concentrao de protena

desconhecida num tubo de ensaio; 0,5 ml de branco (gua destilada) em outro tubo de ensaio e 0,5
ml de cada soluo padro de albumina em cada um dos outros tubos. Adicionar gua destilada a
cada um dos tubos de ensaio, de forma que cada um apresente o volume igual a 1,5 mL. Agitar.
Adicionar 1,5 mL do reagente de Biureto e tornar a agitar. O volume total de cada tubo de ensaio
ficou igual a 3 ml. Considerando essas informaes, preencha a tabela a seguir com os volumes a
serem adicionados em cada tubo de ensaio. Aps 5 minutos a absorbncia pode ser determinada.

13
Preencher a tabela abaixo com os volumes a serem adicionados em cada tubo de ensaio.

Reagentes
Soluo padro de albumina % (m/v)
Tubos Amostra gua Biureto
0,125 0,25 0,5 0,75 1,0 1,25 1,75
1
2
3
4
5
6
7
8
9

1. Para a determinao do comprimento de onda, inicialmente, deve-se fazer a reao com o padro
de concentrao 0,25 %. Fazer um tubo branco, com a adio de gua no lugar do padro. Fazer a
aquisio do espectro de varredura (em espectrofotmetro) da reao obtida com a soluo padro
de concentrao 0,25 % de 400 a 800 nm, de 10 em 10 nm, zerando sempre com o branco a cada
mudana de comprimento de onda.
2. Para a elaborao da curva padro, numerar nove tubos de ensaio, sendo um branco, sete com
padres e um com a amostra desconhecida. Realizar a reao de Biureto e determinar a absorbncia
no comprimento de onda onde a absoro mxima, conforme dados obtidos no item acima. Usar
os padres para o clculo da absortividade e, aps isso, usar a absortividade para calcular a
concentrao da amostra desconhecida.

Anlise dos dados

1. Demonstrar os clculos para a obteno do reagente Biureto e das solues-padro de BSA.
2. Plotar a absorbncia da amostra do item 1 em funo do comprimento de onda, determinando o
comprimento de onda de mxima absorbncia.
3. Plotar as absorbncias das solues padro em funo da concentrao e calcular a absortividade.
4. Determinar a concentrao da amostra desconhecida.
5. Descrever o princpio do mtodo de Biureto para a dosagem de protenas, relacionando suas
vantagens e desvantagens em relao a outros mtodos para dosagem de protenas.

Informaes importantes
O termo medida fotomtrica foi definido originalmente como o ato de medir a intensidade da luz,
independente do comprimento de onda (energia). A maioria dos instrumentos tem, contudo,
mecanismos para isolar uma faixa estreita de comprimentos de onda do espectro. Os instrumentos
que usam filtros para esse propsito so referidos como fotmetros de filtro ou colormetros e os
que utilizam prismas ou grades de difreo so chamados de espectrofotmetros.
Comprimento de onda refere-se a distncia entre dois picos da propagao da luz que ocorre na
forma de onda, e essa distncia normente dada em nanmetros (nm). A radiao eletromagntica
14
inclui desde a energia radiante dos comprimentos de onda curtos dos raios aos comprimentos de
onda longos das ondas de rdio. O termo luz usado para descrever a energia dos comprimentos de
onda visveis ao olho humano e queles limtrofes. O olho humano capaz de detectar
comprimentos de onda entre 380 e 750 nm, entretanto espectrofotmetros so capazes de medir
tambm comprimentos de onda mais curtos (ultra-violeta, UV) ou mais longos (infra-vermelho, IV)
(Fig. 1).

Fig. 1. Espectro eletromagntico evidenciando a faixa dos comprimentos de onda visveis. (fonte:
http://www.arq.ufsc.br/labcon/arq5656/Curso_Iluminacao/07_cores/luz_01.htm e
http://www.wordpress.com/2009/03/teoriadacor_01.jpg).

A espectrofotometria um dos mtodos pticos de anlises mais usados nas investigaes

bioqumicas (Fig. 2). O espectrofotmetro um instrumento que permite comparar a intensidade de
luz absorvida ou transmitida por uma soluo que contm uma quantidade desconhecida de soluto,
e uma quantidade conhecida da mesma substncia. Todas as substncias podem absorver energia
radiante, como por exemplo, a gua que absorve fortemente na regio do IV. A absoro das
radiaes ultravioletas, visveis e infravermelhas dependem da estrutura molecular e caracterstica
para cada substncia qumica. Quando a luz atravessa uma soluo de determinada substncia, parte
da energia absorvida (absorbncia). A cor das substncias se deve a no absoro (transmitncia)
de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos
nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas no absorvidos. Esse fenmeno pode ser usado
para quantificao de substncias por meio da intensidade de absorbncia em um comprimento de
onda especfico, com base em uma curva-padro, utilizando-se da Lei de Lambert-Beer (PUNGOR,
1995).

Fig. 2. Esquema ptico simplificado de um espectrofotmetro. (fonte:

http://www.ufpa.br/ccen/quimica/espect2.jpg)
15
Fundamentao Terica
Considere um feixe de luz incidente com intensidade Io passando por uma cubeta contendo uma
soluo de uma determinada substncia que absorve luz de certo comprimento de onda (Fig. 3). A
intensidade do feixe de luz transmitido (I) ser sempre menor que Io, sendo que a transmitncia (T)
definida como uma relao entre a intensidade da luz transmitida e a intensidade da luz incidente
(Lei de Beer).
T = I/Io

Fig. 3. Esquema demonstrando a incidncia de um feixe de luz em uma

cubeta e sua transmitncia.
(fonte:http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/0/04/Beer_la
mbert.png/300px-Beer_lambert.png)

medida que aumentamos a concentrao da substncia em soluo, a transmitncia varia em

relao inversa ao logaritmo da concentrao. Em conseqncia disso, pode-se definir um novo
termo, absorbncia (A), que ser diretamente proporcional concentrao. Portanto,

A = log I/Io = log T

A = log 1/T

Dessa forma, a absorbncia direta e linearmente proporcional concentrao. Esta varia tambm
de forma direta com o caminho ptico (dimetro interno) da cubeta, ou seja, se dobrarmos o
caminho ptico mantendo a concentrao constante, teremos um valor de absorbncia duas vezes
maior. Essa relao frequentemente referida como Lei de Lambert-Beer:

A = a.b.c

Onde A = abosrbncia, a = constante de proporcionalidade (absortividade ou coeficiente de

extino), b = caminho ptico (em centmetros) e c = concentrao. Como os valores de A so
adimensionais, a unidade de a so as recprocas daquelas para b e c. Quando b = 1 cm (geralmente
) e c expresso em mol/L, a constante a pode ser chamada de absortividade ou coeficiente de
extino molar ( , epsilon) e constante para dado comprimento de onda, temperatura, pH,
solvente, etc. Assim, a proporcionalidade direta entre absorbncia e concentrao pode ser usada
para a determinao da absortividade de uma determinada substncia em determinada condio
experimental por meio de realizao de uma curva-padro. Para a construo dessa curva, solues
de concentraes conhecidas da substncia devem ser preparadas e as absorbncias determinadas
em determinado comprimento de onda. Posteriormente, essa absortividade pode ser utilizada para
quantificao dessa substncia em uma soluo, cuja concentrao desconhecida (VOET &
VOET, 2006).

16
Leituras complementares
ALMEIDA, V.V., CANESIN, E.A., SUZUKI, R.M., PALIOTO, G.F. Anlise qualitativa de
protenas em alimentos por meio de reao de complexao do on cprico. Qumica Nova na
Escola, v.35, n.1, p.34-40, Fev/2013.
ZAIA, D.A.M.; ZAIA, C.T.B.V.; LICHTIG, J. Determinao de protenas totais via
espectrofotometria: vantagens e desvantagens dos mtodos existentes. Qumica Nova, v.21, n.6,
p.787-793, 1998.

17
 Prtica 4: Atividade enzimtica e desnaturao de protenas.

Ateno: no recarregar o celular em nenhuma tomada do laboratrio. H micropipetas que

requerem apertar boto para acertar o volume.

Objetivo: demonstrar a atividade proteoltica presente no suco de abacaxi, o efeito da desnaturao

protica por temperatura e o efeito da alterao de solubilidade protica, e conseqente
precipitao, provocados pela adio de lcool ou sal de amnio em soluo de gelatina (colgeno).

Materiais Reagentes
- 8 tubos de ensaio de 20 mL - Soluo de sulfato de amnio 3 mol/L
- 1 tubo de ensaio de 30 mL - Etanol absoluto ou comercial 99,3 INPM
- Estante para tubos de ensaio - Abacaxi maduro (1 fatia mdia)
- Bquer de vidro de 100 mL (para aquecer - Gelatina incolor e sem sabor
gua) - gua destilada
- Bquer de 25 ou 50 mL (para gua destilada)
- Funil de vidro pequeno e gaze, tesoura para
cortar o papel de filtro
- Recipiente com gelo
- Almofariz e pistilo
- Pipetadores automticos de 1 mL e ponteiras,
ou pipetas de vidro de 5 mL
- Faca ou estilete
- Luvas de ltex
- Basto de vidro (para dissolver a gelatina)
- Placa aquecida ou banho-maria 100C
- Banho-maria 60C
- Banho-maria 30C
- Balana
-papel alumnio para pesagem da gelatina

Procedimento
Parte 1: Atividade enzimtica do suco de abacaxi e desnaturao protica por aquecimento.
Extrao do suco de abacaxi
Uma fatia de abacaxi deve ser cortada em pequenos pedaos. A extrao do suco ser feita
macerando-se os pedaos utilizando almofariz e pistilo. O suco deve em seguida ser filtrado
utilizando funil de vidro, fixo numa argola presa a um suporte universal, e gaze em um tubo de
ensaio de 20 mL. O tubo dever ser armazenado no gelo.
Preparo da gelatina
Pesar 2 g de gelatina incolor e sem sabor de qualquer marca comercialmente disponvel num papel
alumnio. Adicionar a gelatina a um bquer de 50ml contendo 20 mL de gua destilada aquecida a
60C. Mexer com basto de vidro at a total solubilizao. Aps solubilizao transferir para um
tubo de ensaio. Manter esse tubo em banho de 60oC at a sua utilizao.

Ensaio
Primeiramente, deve-se preparar as amostras de abacaxi. Para isso, utilizando tubos de ensaio de 20
mL, deve-se pipetar 2,0 mL de gua no tubo 1 e 2,0 mL do extrato de abacaxi nos tubos 2, 3 e 4.
18
O tubo 2 deve ser mantido temperatura ambiente, o tubo 3 aquecido 60C (banho de
aquecimento) e o tubo 4 fervido por 5 minutos. Aps este tempo de tratamento de cada uma das
amostras, resfriar no gelo imediatamente por 1 minuto. Aps o resfriamento das amostras fervidas
adicionar em todos os tubos a soluo de gelatina. Homogeneizar. Incubar as amostras por 10
minutos a 37oC e em seguida resfriar todas as amostras no gelo por 7 minutos, observar e anotar o
resultado.

Tabela 1. Resumo do procedimento experimental.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
gua 2,0 mL - - -
Amostra Abacaxi - 2,0 mL - -
Amostra Abacaxi 60C - - 2,0 mL -
Amostra Abacaxi Fervida - - - 2,0 mL
Gelatina 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL

Parte 2: Precipitao de protenas.

Pipetar nos tubos de ensaio de 20 mL os reagentes conforme a tabela 2, realizar o experimento em
temperatura ambiente (~ 25C). Observar e anotar o resultado para posterior discusso.

Tabela 2. Resumo do procedimento experimental.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
gua 2,0 mL - -
Sulfato de amnio - 2,0 mL -
Etanol Absoluto - - 2,0 mL
Gelatina 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL

Anlise dos dados

1. Prepara uma tabela indicando os resultados observados de cada experimento.
2. Tirar uma fotografia dos resultados para anexar ao caderno de laboratrio como figura.
3. Discutir o efeito do suco de abacaxi sobre o colgeno (gelatina).
4. Discutir o efeito da temperatura sobre as enzimas (proteases) presentes no suco do abacaxi.
5. Discutir o efeito do etanol e do sulfato de amnio sobre as protenas em soluo. Qual o princpio
de cada efeito?
6. Pesquisar qual(is) protease(s) est(o) presente(s) no suco de abacaxi.
6.1 Como poderia ser realizada a purificao dessa(s) protena(s)?
6.2 A atividade das proteases pode ser otimizada? Como?
7. Discuta o efeito da temperatura sobre a desnaturao de protenas no processo de cozimento dos
alimentos. Qual a importncia disso?
8. Por que se pode utilizar abacaxi para amaciar carnes? Qual a relao entre o suco do abacaxi e os
amaciantes de carnes comerciais.

Leitura complementar
FRANCISCO JR., W.E., FRANCISCO, W. Protenas: hidrlise, precipitao e um tema para o
ensino de qumica. Qumica Nova na Escola, n.24, p.12-16, Nov./2006.

19
 Prtica 5: Extrao e caracterizao de lipdios.

Ateno: no recarregar o celular em nenhuma tomada do laboratrio. H micropipetas que

requerem apertar boto para acertar o volume.

Objetivos: extrao de leo de soja e realizao de reao de saponificao e caracterizao das

propriedades fsico-qumicas dos sabes.

Materiais
Reagentes Materiais e vidrarias
- leo de soja - Liquidificador
- Soja moda e seca - Balana analtica
- gua destilada - Banho de aquecimento fervente ( 50C e
- Etanol 100C)
- ter etlico - Estante para tubos de ensaio
- Acetona - Pina de madeira
- Hidrxido de potssio - Pipeta graduada de 10 mL
- Hidrxido de sdio - Pipetador automtico e ponteiras de 1000 L
- Soluo de fenolftalena - Conta gotas ou pipeta de Pasteur
- cido clordrico - Esptula para pesagem
- Cloreto de Sdio - Proveta de 25 mL
- Tubos de ensaio
- Bquer de 100 mL
- Bquer de 10 mL
- Erlenmeyer de 125 mL
- Papel de filtro

Procedimentos

Extrao de leo vegetal da soja.

1. Em um bquer de 100 mL (bquer A), pesar 10 g de soja moda e seca.

2. Adicionar 25 mL de acetona e agitar por 5 minutos.
3. Pesar um segundo bquer (bquer B) e anotar sua massa.
4. Utilizando o bquer B e papel de filtro, filtrar a soluo obtida no bquer A.
5. Lavar o resduo obtido com 10 mL de acetona uma vez.
6. Evaporar o filtrado em chapa de aquecimento (200C), com agitao peridica, at a eliminao
da acetona. Ao final, ser obtido um resduo amarelo e viscoso.
7. Determinar o peso do produto obtido na etapa anterior e calcular o rendimento da extrao.

Solubilidade do leo de soja.

1. Numere 4 tubos de ensaio e coloque 1 mL dos seguintes solventes: gua, etanol, ter etlico e
acetona.
2. Adicione 1,0 mL de leo de soja a cada tubo e agite-os. Classifique os solventes segundo a
solubilidade apresentada pelo leo de soja.

20
 SOLUBILIDADE
TUBO SOLVENTE
(+, ++, +++ ou ++++)
1 gua

etanol
2
ter etlico
3
4 acetona

Reao de saponificao.

1. Preparar uma soluo de potassa alcolica 20% Em um erlenmeyer de 125 mL, misture 10 mL
de soluo aquosa de hidrxido de potssio (KOH) 40% a 10 mL de etanol.
2. Adicionar 5,0 mL de leo vegetal soluo de potassa alcolica e aquecer o sistema em banho-
maria FERVENTE durante 20 minutos.
3. Em um tubo de ensaio, adicionar 2 gotas da soluo obtida a 2,0 mL de gua destilada. Agitar.
Observe se h ou no formao de espuma e explique.
4. Esquematize a reao de hidrlise alcalina de um triacilglicerol na presena de hidrxido de
sdio e, alternativamente, na presena de hidrxido de potssio.
5. Esquematize uma molcula de sabo.

Separao de cidos graxos.

1. Transferir 4,0 mL do erlenmeyer contendo o sabo para um tubo de ensaio.

2. Adicionar 1 gota de fenolftalena (indicador de pH).
3. Manter o tubo de ensaio EM AGITAO e colocar, gota a gota, cido clordrico (HCl)
concentrado at que a soluo mude de colorao (rosa para incolor) indicando a viragem do
indicador.
4. Observe a diviso da mistura em duas fases. Que compostos representam cada uma das duas
fases? Esquematize a reao ocorrida.
5. Reserve a soluo para o teste posterior.

Ressaponificao.

1. Transferir 4 gotas da soluo obtida no item Separao de cidos graxos para um tubo de ensaio
contendo 5 mL de gua destilada quente.
2. Adicionar, gota a gota, soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 1 mol.L-1 ate que seja solubilizada
a parte oleosa.
3. Agitar o tubo e verificar se h formao de espuma.
4. Explicar a reao qumica ocorrida, seu mecanismo de ao e indicar o produto formado.

21
Propriedades emulsificantes dos sabes.

1. Agitar 5 gotas de leo de soja num tubo de ensaio contendo 5 mL de gua. Observe a formao
temporria de uma emulso gua-leo.
2. Repetir o mesmo teste, adicionando 5 gotas de sabo (obtido no item anterior) antes de agitar. O
que acontece com a emulso gua-leo?
3. Comparar a aparncia das duas emulses obtidas no 1 e 2 passos.

Anlise dos dados

1) Tabela apresentada no item Extrao de leo vegetal da soja com os respectivos valores de
solubilidade do leo de sojas nos diferentes solventes utilizados.
2) Resultado do rendimento da reao de extrao de leo da soja. Esquematizar frmula utilizada
para o clculo.
3) Esquema da reao de saponificao do leo de soja em presena de KOH.
4) Esquematizar uma molcula de sabo e discutir suas propriedades fsico-qumicas:
- Mostrar a reao de formao de cidos graxos a partir de sabes em meio cidos.
- Mostrar a reao de precipitao de sabes em solues rica em sal.
- Esquematizar uma molcula de sabo e discutir suas propriedades fsico-qumicas.
- Esquematizar e caracterizar uma reao de ressaponificao.

Exerccios
1. Como podem ser explicadas as diferenas de solubilidade do leo de soja nos diferentes solventes
usados no experimento?
2. Qual a importncia da determinao da solubilidade do leo de soja em diferentes solventes para
a parte de extrao de leo vegetal a partir da soja?
3. Por que se utiliza etanol na reao de saponificao?
4. Se o sabo feito de leos e gorduras, como capaz de limpar superfcies engorduradas? Como o
saboremoveasujeira?
5. Um produto apresentado como desentupidor lquido possui hidrxido de sdio em sua
composio. Explique, com o uso de reao qumica, o porqu de este produto desentupir pias
entupidas com gordura animal, mas no desentupir pias entupidas com qualquer resduo slido.

Leituras complementares
BARBOSA, A.B., SILVA, R.R. Xampus. Qumica Nova na Escola, n.2, p.3-6, Nov./1995.
MERON, F. O que uma gordura trans? Qumica Nova na Escola, v.32, n.2, p.78-83, Mai./2010.

22
Prtica 6: Carboidratos: estrutura e propriedades.

Ateno: no recarregar o celular em nenhuma tomada do laboratrio.

Objetivo: permitir a compreenso de processos de extrao do amido da batata e, aps etapa de

purificao e secagem, realizar sua caracterizao bioqumica. Para isso, so propostos os seguintes
objetivos especficos:
- extrair e purificar o amido da batata;
- realizar observao morfolgica por microscopia ptica;
- fazer a reao de identificao com iodo, variando condies de temperatura, utilizando tubos
abertos e tampados;
- fazer a reao qualitativa de identificao de acares redutores no amido utilizando o reagente de
Benedict, em comparao com solues de glicose e sacarose.

Materiais e Vidrarias Reagentes

- liquidificador; - batatas in natura;
- bquer 200 mL; - gua destilada;
- gaze; - lugol;
- estufa de secagem; - reagente de Benedict;
- papel de filtro; - soluo de glicose 1,0 % (m/v);
- bomba de vcuo; - soluo de sacarose 1,0 % (m/v);
- funil de Bchner; - suspenso de amido 1,0 % (m/v);
- balana analtica;
- papel de pesagem (ou vidro de relgio) e
esptulas;
- proveta 50 mL;
- estante para tubos de ensaio;
- 5 tubos de ensaio de 20ml
- pedao de papel alumnio para fechar tubo de
ensaio;
- lamparina;
- banho de aquecimento fervente (~ 100C);
- pipetador automtico e ponteiras de 500 e
1000 L;
- conta-gotas ou pipeta de Pasteur;
- pina de madeira

Procedimentos

Extrao do amido da batata (j realizado previamente pelo tcnico de laboratrio).

Homogeneizar 50g de batata descascada em liquidificador com 200 mL de gua destilada. Filtrar
em gaze dobrada, recolhendo a suspenso de amido em um bquer. Deixar o amido depositar no
fundo do bquer (~ 5 min). Desprezar cuidadosamente o sobrenadante. Adicionar cerca de 100 mL
de gua. Agitar, deixar decantar (~5 min), remover o sobrenadante. Repetir esse procedimento de
lavagem por 5 vezes. Juntar ao amido 200 mL de gua destilada, filtrar em Bchner e deixar secar
em estufa.

23
Preparo da suspenso de amido.
Pesar 0,5 g do amido seco e ressuspender em 50 mL de gua destilada [suspenso de amido 1,0 %
(m/v)].

Exame microscpico dos grnulos de amido.

Adicionar 2 mL desta soluo em 2 tubos de ensaio numerados 1 e 2. Ferver um deles at que a
soluo fique opalescente, agitando sempre. Pingar uma gota das solues dos tubos 1 e 2 um uma
lmina, cobrir com uma lamnula e observar em microscpio ptico. Pingar uma gota de lugol e
observar novamente em microscpio ptico.

Reao de caracterizao com iodo.

Tomar 4 tubos de ensaio, sendo um deles com tampa, e adicionar em dois deles (sendo um com
tampa) 1 mL de amido 1 % (m/v) e nos demais 1 mL de gua destilada e 1 mL de glicose 1 %
(m/v). Em seguida, adicionar 1 gota da soluo de lugol em cada um dos tubos de ensaio e observar
o resultado. Aquecer cuidadosamente o tubo tampado contendo amido (direto na chama) e observar
o resultado. Deixar o tubo resfriar e observar o resultado. Repetir o procedimento para o tubo sem
tampa contendo amido e anotar o resultado. ***CUIDADOS ESPECIAIS: 1. O tubo com tampa
deve estar com a mesma pouco (frouxa) e no muito apertada. 2. O aquecimento direto na chama
deve ser feito com auxlio da pina, com quantos ciclos forem necessrios (CADA CICLO: no
mximo 2 segundos na chama agitao fora da chama).

Pesquisa de poder redutor.

Tomar 4 tubos de ensaio e seguir procedimento abaixo:
Tubos Amostras (mL) H2O (mL) Benedict (mL)
B - 1,5 1,0
1* 1,0 0,5 1,0
2* 1,0 0,5 1,0
3* 1,0 0,5 1,0
*onde, 1, 2 e 3 so as amostras numeradas fornecidas para o experimento.

Em seguida, ferver os tubos em banho-maria por 5 minutos e observar as possveis alteraes.

Sabendo que entre as amostras 1, 2 e 3 tratam-se de glicose, amido e sacarose, identifique as
amostras em funo da colorao observada e discuta os resultados.

Exerccio
1. Considerando que amido e celulose so polmeros formados por resduos de glicose, apresente
uma hiptese explicativa para o fato de o amido ser hidrolisado pelas enzimas presentes no
organismo humano, mas a celulose no.

Leituras complementares
FRANCISCO JR., W.E. Carboidratos: estrutura, propriedades e funes. Qumica Nova na Escola,
n.29, p.8-13, Ago/2008.
SILVA, R.N.; MONTEIRO, V.N.; ALCANFOR, J.D.X.; ASSIS, E.M.; ASQUIERI, E.R.
Comparao de Mtodos para a Determinao de Acares Redutores e Totais em Mel. Cin.
Tecnol. Aliment., v.23, n.3, p.337-341, 2003.
24
Prtica 7: Extrao de DNA vegetal.

Ateno: no recarregar o celular no laboratrio.

Este experimento foi adaptado de: RODRIGUES, C.D.N., ALMEIDA, A.C., FURLAN, C.M.,
TANIGUSHI, D.G., SANTOS, D.Y.A.C., CHOW, F., MOTTA, L.B. DNA vegetal na sala de aula.
So Paulo: Departamento de Botnica IBUSP. ISBN: 978-85-85658-22-9. So Paulo, 2008, 8 p.

Objetivos: extrao de DNA de cebola. Estudo das interaes intermoleculares e de estruturas

qumicas. Identificar vantagens e desvantagens no uso de experimentos simples no ensino de
bioqumica.

Materiais e vidrarias Reagentes

- faca - meia cebola por grupo
- almofariz e pistilo - gelo
- banho maria - lcool gelado 92%
- caixa de isopor (para fazer banho de gelo) - detergente lquido neutro incolor
- filme plstico (PVC) - gua destilada
- papel de filtro - cloreto de sdio
- trs bqueres de 250ml
- um bquer de 50ml
- um funil
- argola e suporte universal
- uma proveta de 100 ml e uma de 10 ml
- um basto de vidro
- uma pipeta Pasteur

Procedimentos
1. Pesar 6g de cloreto de sdio no bquer de 250mL e adicionar 100 ml de gua destilada.
Acrescentar 10 ml de detergente lquido neutro. Misture vagarosamente com um basto de vidro
(esta a soluo de lise).
2. Pique meia cebola em pequenos pedaos, coloque-os no almofariz e pequena quantidade da
soluo de lise e triture com o uso do pistilo. Transferir a massa formada para o outro bquer de 250
ml. Lavar o almofariz com soluo de lise e sempre adicionar ao bquer. Misturar vagarosamente
com o basto de vidro. Cubra o bquer com filme plstico. Quanto mais triturada estiver a cebola,
maior ser sua superfcie de contato com a soluo de lise e maior a liberao de molculas de
DNA.
3. Incubar o bquer contendo cebola triturada em banho-maria a 70C por 20min.
4. Retire o bquer do banho-maria, filtre o material utilizando o funil e papel de filtro e recolha o
filtrado em outro bquer de 250 ml. Coloque 20 ml do filtrado em um bquer de 50ml.
5. Coloque o bquer com o material filtrado em um banho de gelo e deixe esfriar por 5 min.
6. Retire o bquer do banho de gelo e adicione, com a pipeta Pasteur, o lcool gelado escorrendo
bem vagarosamente pela parede do bquer. No agitar o lcool com a soluo. O volume de lcool
deve ser aproximadamente igual ao do material filtrado adicionado ao bquer. Aguardar cerca de 10
minutos.

25
7. Observar o precipitado como uma nuvem esbranquiada no fundo da fase alcolica (conforme
figura a seguir). Com o basto de vidro limpo, faa movimentos circulares buscando retirar a
amostra de DNA da mistura.

Imagem: RODRIGUES, et al. 2008.

Anlise dos dados

1. Por que foi necessrio macerar a cebola e utilizar de detergente e sal de cozinha? Qual a funo
destes? E do lcool?
2. Compare os resultados obtidos nesse experimento com os que esto apresentados por Rodrigues
et al. (2008) e disponvel em: http://botanicaonline.com.br/geral/arquivos/bmaterial6.pdf (acesso em
13/09/17).
3. Por que protena e DNA podem sofrer alteraes na estrutura qumica em presena de etanol?
Justificar a resposta com o uso de estruturas qumicas e interaes intermoleculares possivelmente
envolvidas.
4. A partir da realizao desse experimento seria possvel afirmar que houve precipitao de DNA?
H limitaes experimentais? Apontar vantagens e desvantagens no uso desse experimento para o
ensino de bioqumica. Consultar as leituras complementares.

Leituras complementares
FURLAN, C.M., ALMEIDA, A.C., RODRIGUES, C.D.N., TANIGUSHI, D.G., SANTOS,
D.Y.A.C., MOTTA, L.B., CHOW, F. Extrao de DNA vegetal: o que estamos realmente
ensinando em sala de aula? Qumica Nova na Escola, v.33, n.1, p.32-36, Fev/2011.
HODSON, D. Experimentos na cincia e no ensino de cincias. Educacional Philosophy and
Theory, n.20, p.53-66, 1988. Traduo, para estudo, de Paulo A. Porto. Disponvel em
http://www.iq.usp.br/palporto/TextoHodsonExperimentacao.pdf (acesso em 13/09/17).
PINHATI, F.R. Eletroforese de DNA: dos laboratrios de biologia molecular para as salas de aula.
Qumica Nova na Escola, v.37, n.4, p.316-319, Nov/2015.
RODRIGUES, C.D.N., ALMEIDA, A.C., FURLAN, C.M., TANIGUSHI, D.G., SANTOS,
D.Y.A.C., CHOW, F., MOTTA, L.B. DNA vegetal na sala de aula. So Paulo: Departamento de
Botnica IBUSP. ISBN: 978-85-85658-22-9. So Paulo, 2008, 8 p.
THIEMANN, O.H. A descoberta da estrutura do DNA: de Mendel a Watson e Crick. Qumica
Nova na Escola, n.17, p.13-19, Mai/2003.

26