Coprocultura – continuação Todas enterobacteriaceaes fermentam

glicose

Microrganismos envolvidos na gastroenterite: Doenças:

 Enterobacteriaceae:  Salmonelose não tifóide (DTA): são

E. coli (6 tipos –E. coli transmitidas por alimentos, geralmente
enteropatogênica, E. coli é autolimitada entre pessoas
enteroagregativa, E. coli saudáveis (embora possa levar à
enteroinvasiva , E. coli morte em alguns casos).
enterotoxigênica, E. coli  Febre tifóide - Salmonella entérica
difusamente aderente e E. coli sorotipo TYPHI: é mais grave, taxa de
enterohemorrágica.); Shigella mortalidade maior que a salmonelose
spp; Salmonella spp; Yersinia não tifóide.
enterocolítica. A dose infectante varia de 105−8 células,
 Campylobacter jejuni porém em pacientes Imunocomprometidos
(Campylobacteriaceae) têm sido observados doses ≤ a 103
 Vibrio cholerae (Vibrionaceae)
Os humanos são os únicos reservatórios
conhecidos de Salmonella enterica sorotipo
Salmonellas typhi.

Existe dois grupos de Salmonella: Salmonellas não tifóide se constituem em

 Salmonella entérica: com 6 espécies,
onde a Salmonella entérica subsp.
Entérica é responsável por 99% das
salmoneloses humanas.
 Salmonella bongori
Características:
patógenos primários de animais (aves
domésticas, mamíferos e répteis).
Por ex: ovos crus das galinhas.
Encontram-se em 9,6% das superfícies de
ovos e 3,2% das gemas de ovos de
consumo, porque elas penetram pela casca.

 Não esporogênicos, anaeróbios

facultativos e oxidase negativos.
 Possuem formas de bacilos curtos
com largura de 0,7 a 0,5 µm e
cumprimento de 2 a 5 µm, sendo a
maioria móvel com flagelos Se houver uma fissura ou se tiver sem a
peritríquios e anaeróbios facultativos. película no ovo não utilize.
 A melhor temperatura para o
Intoxicação alimentar
crescimento das bactérias do gênero
Salmonella é de 35°C Sintomas: Diarreia, náuseas, vômitos e dores
(TEMPERATURA DO CORPO) abdominais (após 6 a 72 horas da ingestão
 Fermenta a glicose e outros de alimentos ou água contaminados)
carboidratos com produção de ácidos
A gravidade depende da resistência do
e usualmente gás
paciente e da virulência da cepa.
 Não fermenta os carboidratos lactose
nem sacarose. (TSI: fica alcalino- a taxa de mortalidade da febre tifóide é de
ácido) 10% e das demais salmonelose geralmente é
menos de 1%.
Fluxograma do isolamento de Salmonella
spp. em espécimes fecais - Fezes
(suspensão)
O mais utilizado é o meio HE e agar SS.
Meio TSI: Alcalino- ácido com produção de
H2S.
Ureia: negativa (não vira rosa/vermelha)
SIM: motilidade positiva, produção de H2S e
indol negativo.
Citrato: positivo (utilizou o citrato como fonte
de carbono)
Ornitina: positiva (púrpura)
Lisina: positiva
Fenilalanina: negativa (não ficou verde
musgo quando adicionou o cloreto férrico)
SHIGELLA
Shigelose: Disenteria bacilar.
4 espécies envolvidas na shigelose:
 S. dysenteriae: provoca infecção mais
grave.
 S. boydii: é rara
 S. flexneri: prevalentes após a S.
dysenteriae
 S. sonnei: prevalentes após a S.
dysenteriae
A ingestão de 100-200 células pode
provocar a doença.
Características:
 não formadores de esporos, imóveis,
anaeróbios facultativos
 Fermentam a glicose com produção
de ácido geralmente sem gás (não
provoca o CO2)
 não possuem cápsula, exceto S.
flexneri e S. boydii
 Não hidrolisam uréia, não produzem
gás sulfídrico
 não descarboxilam a lisina e não
utilizam citrato.
É uma doença estritamente humana
Transmissão oral-fecal, transmitida
geralmente por manipuladores de alimentos
Sintomas: dor abdominal e cólica, diarreia
com sangue, pus ou muco; febre, vômitos e
tenesmo.
Duram 1 ou 2 dias
A ingestão de 100 a 200 células
provocam a doença
Algumas cepas são responsáveis por
uma taxa de letalidade de 10 a 15% e
produzem uma enterotoxina tipo Shiga
(semelhante a Verotoxina da E. coli
O157:H7).
Nos países desenvolvidos a S. sonnei é a
mais prevalente e a S. dysenteriae está
relacionado à forma mais grave da doença.
No Brasil, estudos mostram a prevalência da TSI: alcalino-ácido
S. flexneri sobre a S. sonnei.
SIM: motilidade negativa, indol negativo, sem
Identificação bioquímica da Shigella produção de H2S.
dysenteriae
UREIA: negativa
CITRATO: negativa
ORNITINA; positiva
LISINA: negativa
Escherichia coli
Provoca enterites principalmente em
crianças, causando epidemias em berçários.
A maioria das infecções são
endógenas, com contaminação a partir do
intestino onde ocorrem - como microbiota
normal.
TSI: alcalino-ácido (A contaminação do menino ocorre com as
fezes do próprio menino - por ficar sujo por
SIM: motilidade negativa, indol positivo, sem
muito tempo e acaba contaminando outros
produção de H2S. (como o indol é 45%
meninos)
positivo ele pode ficar negativo)
E. coli causadoras de gastroenterites:
UREIA: negativa (Porque a bactéria não
E. coli enterohemorrágica (EHEC), No
apresentou a urease)
intestino grosso. Provoca uma diarréia
CITRATO: negativa (não utilizou o citrato sanguinolenta.
como fonte de carbono)
OBS:
ORNITINA; negativa (não houve
A E. coli enterohemorrágica pode evoluir
descarboxilação)
para a síndrome hemolítica urêmica (SHU) e
LISINA: negativa (não houve colite hemorrágica.
descarboxilação)
A Identificação é feita pela detecção do
Identificação bioquímica da Shigella sonnei sorotipo O157:H7.(verotoxinas)
NOVO SOROTIPO: O 104:H4 (descoberto
em 2011)
 Após a internalização da toxina ela se liga
ao ácido ribonucleico ribossomal (RNAr) e
interrompe a síntese proteica, causando a
destruição das vilosidades intestinais
resultando em diminuição da absorção
com aumento relativo da secreção de
líquido.
 A toxina esse SLT (toxinas shiga ou
shiga-light) tem preferência pelas células
do glomérulo renal, que sendo destruída
resultam na diminuição da filtração
 glomerular e insuficiência renal aguda
causando a síndrome hemolítica urêmica
(SHU).
 A síndrome hemolítico urêmica (SHU) é
uma doença grave, observada mais
frequentemente em crianças de pouca
idade, que se caracteriza por anemia
hemolítica microangiopática,
trombocitopenia, insuficiência renal
aguda, Hipertensão e, possivelmente,
sinais de sobrecarga hídrica, diátese
hemorrágica e sinais e sintomas
neurológicos.
O que ocorre nos vasos?
Ocorre uma aglomeração de plaquetas que
formam microtrombos, podendo provocar
anemia
Um meio para identificação desse sorotipo de
E.coli hemorrágica é o Agar de sorbitol
Macconkey (SMAC). É um meio parcialmente
seletivo para diferenciação utilizado no
isolamento de E. coli 0157: H7. A maioria
desses tipos de E. coli hemorrágica não irão
fermentar o D- sorbitol e aparecem como
colônias incolores no agar de sorbitol
Macconkey.
E. coli enteroagregativa (EAEC)
 Ocorre principalmente em crianças e
ocasionam uma diarréia aquosa e
mucoide.
 Promovem aderência agregativa dos
bacilos
 Encurtamento das micro vilosidades
 Diminui a absorção de líquidos
 é uma diarréia crônica que dura 14
dias, então pode provocar uma
desidratação intensa.
E coli difusamente aderente (daec)
 Provoca diarreia aquosa sem
sangue
 Estimula alongamento das micro
vilosidades
 Não é muito grave
E coli enteropatogênica (EPEC)
 Diarreia em criança
 Diarreia aquosa com muco e sem
sangue = dose infectante muito baixa.
 Em alguns casos de doenças em
adultos, o inóculo é geralmente similar
a outros enteropatogênicos (Cerca de
10^(6)) para causar infecção.
 Promovem a destruição da estrutura
normal das microvilosidades
 Duração média 24 horas
E coli entero tocci gênica (ETEC)
 Diarréia da criança desmamada
 Diarreia do viajante
 Diarreia aquosa (semelhante à
causada pelo vibrio cholerae)
 Produz 2 enterotoxinas (LT-termolábil
e ST-termoestável) que estimulam a
 hipersecreção de líquidos e eletrólitos
provocando uma Diarreia aquosa, ou
seja, promove desidratação intensa
E coli enteroinvasiva.(EIEC)
 Promovem invasão e destruição de
células epiteliais que revestem o
colón
 diarreia aquosa com muco e
sangue
 Produz uma doença conhecida
como “disenteria bacilar” muito
semelhante à causada por shigella.
Dose infectante muito baixa
(estimula em pouco mais de 10
células bacterianas). São
frequentemente fermentadores
tardios (ou não fermentadores) de
lactose, imóveis, com prova de
lisina descarboxilase negativa,
sendo, portanto, facilmente
confundidos com Shigella.
Tem que ser identificada pelo sorotipo, pois
as provas bioquímicas podem ser facilmente
confundidas com as da Shigella.
TSI: ácido-ácido
SIM: motilidade positiva, indol positivo e sem
produção de H2S
UREIA: negativa
CITRATO: negativa
ORNITINA: positiva (é 65%positiva)
LISINA: positiva
Yersinia enterocolitica
Provoca diarréia, vômito, febre e Fortes
dores abdominais
Os sintomas aparecem após 24 a 48
horas após a ingestão de alimentos
contaminados
Relacionado à gastrointerite aguda,
podendo causar uma forma grave que simula
apendicite. (muito localizada do lado direito)
Encontradas em carnes (de porco,
carneiro, de boi etc), ostras, peixes e leite
cru.
A refrigeração não reduz o risco de
Transmissão a Y. enterocolitica é
psicotrópica e se multiplica em alimentos
refrigerados.
Características:
 Cocobacilos Gram negativos, imóvel a
37ºC, anaeróbios facultativo.
 Meio de cultura: Agar cefsulodina-
irgasan-novobiocina (CIN)
 Temperatura de incubação: 22 a 29ºC
 Nesse meio de cultura as colônias se
apresentam: Colônias chatas com
centro vermelho.
 Nos meios SS e MacConkey as
colônias são pequenas, pálidas ou
incolores, devendo ser incubado por
mais de 24 horas.
 Enriquecimento alcalino-KOH a 0,25%
em solução salina
 TSI ácido/ácido por fermentação de
sacarose.
Colônias brancas com centro vermelho-
colônia em forma de olho de boi
TSI: ácido-ácido, pois fermenta sacarose
SIM: não tem motilidade, indol positivo.
 UREIA: positiva
CITRATO: negativo
ORNITINA: positivo
LISINA: negativa
Campylobacter jejuni
(Campylobacteriaceae)
Reconhecido após 1972
Provoca diarréia, dores abdominais e
febre
Os sintomas aparecem após 2 a 5 dias da
ingestão de alimentos ou água contaminados Outro meio muito utilizado (KARMALI)
contém carvão ativado e colônias de
A ingestão de 400-500 bactérias pode Campylobacter possuem cor branca.
causar doenças
Ocasionalmente podem invadir a corrente
sanguínea e causar endocardites, artrite
sépticas ou meningites
Pesquisa de Campylobacter:

 Material: fezes ou suave retal

 Bastonetes Gram negativos, curvo ou
espiralados, móvel (flagelo Monopolar)
 O flagelo é responsável pelo seu
movimento característico em forma de
saca-rolha ou vaivem
 São oxidases, catalases positivas e VIBRIO CHOLERAE (Vibrionaceae)
reduzem nitrato a nitrito
Características gerais:
 Incapazes de fermentar ou oxidar
carboidrato, ou seja, TSI AL/AL  bastonetes gram negativos curvos com
 Microaerófilos aparência de virgula, altamente móveis,
 Termófilas possuem um único flagelo polar.
 Anaeróbios facultativos, não formam
Meio de cultura: base rica adicionando de
esporos e produzem citocromo-oxidase,
10% de sangue de Carneiro, suplementado
característica que os diferencia das
com 4 antibióticos: anfotericina B, cefalotina,
bactérias da família enterobacteriaceae.
polimixina b, trimetoprim e vancomicina.
 Dos vibriões que são clinicamente
incubação a 42 °C em temperatura de 5 a significantes para o homem o Vibrio
15% de O2 e 5 a 12% de CO2 cholerae é o mais importante

Formam colônias pequenas, não hemolíticas

e geralmente acinzentadas, com bordas
irregulares.

Vibrio cholerae, sorogrupos 01 e 0139,
produz uma enterotoxina que é responsável
pelos sintomas da gastroenterite. Esses
organismos não invadem a parede intestinal;
desse modo nenhum ou poucos de
leucócitos são encontrados nas fezes.
Cólera:
 Transmitidos por contaminação fecal
(Água e alimentos)
 Reservatórios: frutos do mar (camarão,
ostras)
 A dose infectante varia de 10^(6) a
10^(11) UFC
 Essas bactérias são sensíveis aos ácidos
do estômago
 Período de incubação de 6 a 48 horas.
 Início abrupto de diarreia aquosa
(“diarreia em forma de água de arroz”);
quantidade de fezes pode exceder 1L.
 Provoca Vômitos
 Grande perda de líquidos e ele eletrólitos
podendo levar ao choque de hipovolemia
 Câimbras musculares
 Perda do turgor da pele, principalmente
do abdômen que é um sinal
característico
 Doença se estende por 2 a 7 dias e a
recuperação depende da quantidade de
líquidos perdida e a rapidez da reposição
destes
 A morte pode ocorrer devido aos
choques hipovolêmicos, acidez
metabólica e uremia resultante da
necrose tubular aguda
Meio de identificação:
Meio TCBS (tiossulfato-citrato-sais-biliares-
sacarose)
 Seletivo e diferencial
 Formam colônias amarelas, meio
amarelo por produção de sacarose
 inibidores: sais biliares e citrato de sódio
 indicadores: azul de bromotimol e azul
de timol
(é preferível colocar o nome todo do meio na
prova, pois é o diferencial do biomédico,
saber tudo)
Pega o swab com amostras de fezes
passa para o meio tcbs ou coloca as fezes e
coloca na água peptonada alcalina, que é o
meio de enriquecimento para o vibrio porque
ele sobrevive muito bem nesse meio,
enquanto outros microorganismos não.
Se houve crescimento inicial na
primeira placa do meio tcbs podemos partir
para fazer outros testes, se não houver
vamos colocar o enriquecimento (água
peptonada) que é de 6 a 8 horas novamente
no meio tcbs
Este processo acontece ao mesmo
tempo, a inoculação direta (TCBS) demora
de 18 a 24 hrs e a segunda (indireta- ÁGUA
PEPTONADA) 6 a 8 hrs
Depois se obtém as colônias características
que são colônias amarelas circulares,
brilhantes e convexas
Depois faz testes bioquímicos:
TSI: acido-ácido, porque eles fermentam
também a sacarose e pode fazer a sorologia
para identificar o sorotipo
Oxidase positiva
O meio de triagem é o TSI mas
também faz a oxidase
Pode tbm fazer outras provas
bioquimicas complementares:
Outros testes:
 catalase: positiva
 indol: positiva/negativo;
 lisina descarboxilases: positiva
Identificação e isolamento de Vibrio cholerae
O processo de isolamento e identificação
compreenderá as seguintes etapas:
a) enriquecimento em água peptonada
alcalina (APA), seguido de incubação entre
35o a 37oC, durante 6 a 8 horas;
b) repique em TCBS-ágar, que deverá
permanecer incubado por 18 a 24 horas, a
37º C; no caso de fezes, realizar também
uma semeadura direta em TCBS-ágar;
c) seleção de 5 a 10 colônias típicas,
sacarose-positivas: colônias amarelas,
circulares, de 2 a 3mm de diâmetro,
brilhantes e convexas;
d) inoculação em meios de triagem: Kligler,
TSI ;
e) teste de oxidase;
f) aglutinação rápida, em lâmina, com anti-
soro polivalente de V. cholerae sorogrupo O1
e, se negativo, com anti-soro de V. cholerae
sorogrupo O139;
g) sorotipagem, para determinar os tipos
Inaba, Ogawa ou Hikojima de V. cholerae
O1, com os respectivos anti-soros
monovalentes (Inaba e Ogawa).
(estudar essa tabelinha de cima – ajuda
muito)
A desinteria é causada pela E.coli,
Salmonella e as shigellas
As Klebsiellas e os proteus são
enterobacteriaceaes que não causam
disenteria, mas podem estar localizados em
outros sitios e é importante sua identificação.
A diferença entre os proteus: P. vulgaris
(fermenta sacarose +, indol +, ornitina -); P.
mirabilis (não fermenta sacarose -, indol - ,
ornitina +)
Quem fermenta sacarose o TSI fica
ácido- ácido
Quem não fermenta sacarose o TSI
fica alcalino-ácido
A diferença das Klebsiellas: K. penumoniae
(indol -); K. oxytoca (indol +)
A diferença das shigellas: S. dysenteriae
(indol 45% positivo (+/-), ornitina -) S. sonnei
(indol -, ornitina +)
As klebsiellas e a E. coli tem o TSI ácido-
ácido sem produção de H2S (OBSERVAR
AS PROVAS QUE DIFERENCIAM ELAS)
A prova DNAse identifica a Serratia, DEVIDA
Provas que diferenciam E. coli de K.
ALTA PRODUÇÃO.
pneumoniae: indol, citrato e urease.
H2S positivo, Fenilalanina positivo
Provas que diferenciam E. coli de K. oxytoca:
citrato e urease. • Indol + Proteus vulgaris PB 92%

As provas fenilalananina e urease diferencia • Indol negativo Proteus mirabilis PB 94%

proteus da salmonela

H2S negativo, Fenilalanina positivo

 Indol (+) Citrato (+) Ureia (-)

Providencia spp. PB 88%
 Citrato (-) Ureia (+) Morganella
morganii PB 72%
(Isso para definir a identificação do grupo
Proteus, Morganella e Providencia)

A maioria das cepas de Salmonella são

LDC (lisina descarboxilase) positiva no
entanto cepas LDC negativas podem ocorrer.
Para diferenciar estas cepas (Salmonella
LDC negativa), pode ser verificada a
fermentação do glicerol.
A maioria das cepas de Salmonella não
fermenta o glicerol em 18 a 24 horas,
enquanto que a maioria das espécies de
Citrobacter H2S positivas é fermentadora do
glicerol em 18 a 24 horas.

Isso é para não confundir Salmonella com

Citrobacter, pois as colônias são parecidas.