23/06/2021

Introdução à
Biologia Celular e do
Desenvolvimento
Aula Prática 03

Prof. Dra. Ana Paula Scaramal Ricietto

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• Compreender como ocorre a extração do DNA e

análise laboratorial desse material genético.

Extração de DNA
do morango: parte I

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 Os alunos deverão escolher 3 morangos (ou banana) e remover as folhas,

deixando somente o pseudofruto;

 Peça que coloquem os morangos dentro de um saco plástico limpo (com

fecho – tipo ziploc) para macerá-los com as mãos até que resulte em uma
pasta homogênea; Extração de DNA do
morango: parte I
 Transferir a pasta homogênea de morangos para um Becker;

 Em outro Becker, misturar: 150 mL de água destilada, uma colher de sopa

de detergente líquido neutro e uma colher de chá de sal de cozinha.
Mexer com bastão de vidro para misturá-los. Esse procedimento deve ser
realizado em baixa velocidade para não obter espuma;

 Deixar a mistura em repouso por 30 minutos, mexendo levemente com

bastão de vidro de vez em quando;

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Célula vegetal

DNA

Fonte: Adaptado de LadyofHats / Wikimedia Commons. Disponível em https://pt.m.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lula_vegetal#/media/Ficheiro%3APlant_cell_structure_pt.svg. Acesso

em 22 mai. 2021.

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Núcleo celular CÉLULA DNA

Cromatina e estrutura do cromossomo condensado DNA
Telômero
Poro
nuclear Solenoides

Nucleossomo
s
Centrômero

Braço

Histonas

Cromossomo
condensado NÚCLEO CROMOSSOMO
Fonte: adaptado de Stackexchange. Disponível em https://biology.stackexchange.com/questions/47944/the-human-has-46-double-chromosomes-or-simple-chromosomes. Acesso em Fonte: Adaptado de LadyofHats / Wikimedia Commons. Disponível em https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Eukaryote_DNA.svg#/media/File:Eukaryote_DNA.svg. Acesso em 20 jul.
22 mai. 2021. 2020.

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Evolução da estrutura do DNA

Fonte: Wikimedia Commons / Sponk. Disponível em https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Difference_DNA_RNA-ES.svg#/media/File:Difference_DNA_RNA-ES.svg. Acesso em 22 mai 2021. Fonte: PIERCE, B. A. Genética: um enfoque conceitual. 5. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2017.

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Estrutura do DNA Estrutura do DNA

1.Análise química: Quando analisaram a composição do 2.Estudos de difração por raios X: Watson e Crick usaram
DNA de muitos organismos diferentes, Erwin Chargaff e dados de difração de raios X sobre a estrutura do DNA
colaboradores constataram que a concentração de timina apresentados por Maurice Wilkins, Rosalind Franklin e seus
era sempre igual à de adenina e que a concentração de colaboradores. Esses dados indicaram que o DNA era uma
citosina era sempre igual à de guanina. estrutura bifilamentar, altamente organizada, com
subestruturas repetidas a intervalos de 0,34 nanômetro (1
nm = 10–9 m) ao longo do eixo da molécula.

Fonte: SNUSTAD, D. P. Fundamentos de genética. 7. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2020. Fonte: SNUSTAD, D. P. Fundamentos de genética. 7. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2020.

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Etapas da extração
1. LISE CELULAR
• Rompimento da célula e remoção de membranas
• Detergente: rompem as membranas devido à natureza anfipática

Etapas de 2. PURIFICAÇÃO DO DNA

• Remoção de componentes celulares como proteínas, organelas e restos
extração celulares
• Adição de protease
• Acetato de sódio ou amônio
• Fenol/clorofórmio

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Etapas da extração
3. PRECIPITAÇÃO DO DNA
• Separação do DNA e remoção dos sais
• Etanol ou isopropanol (gelado)
• Centrifugação (pellet)

4. REIDRATAÇÃO
• DNA solubilizado em água ultrapura ou tampão Células são
Conteúdos Debris celulares são O DNA é precipitado
lisadas usando
tratados com centrifugados formando o com etanol. Sua
• Armazenamento -20°C um detergente
proteases e pellet. O sobrenadante forma viscosa
que rompe a
membrana RNAse. contendo DNA é transferido permite que seja
celular. para um novo tubo. enrolado em um
bastão.
Fonte: Adaptado de Reading: Basic Techniques to Manipulate Genetic Material. Disponível em https://courses.lumenlearning.com/bio1/chapter/reading-biotechnology-and-genetic-
information/. Acesso em 22 mai. 2021.

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 Após 30 minutos, colocar uma peneira sobre um Becker limpo e filtrar a

solução preparada para separar o líquido da pasta do morango;

 Colocar 25 mL da solução filtrada em um tubo de ensaio;

 Depois, colocar 50 mL de álcool comum, sem misturar o álcool com a

solução. O álcool deve ser colocado lentamente pela parede do tubo de

Extração de DNA ensaio;

 Aguardar aproximadamente 3 minutos para que ocorra a precipitação

do morango: parte II do DNA;

 Visualizar o material no tubo de ensaio.

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Extração de DNA do
morango - II

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 Verificar se todos os alunos conseguiram preparar a solução utilizada;

 Verificar se os alunos conseguiram executar todas as etapas da extração

do DNA do morango/banana, compreendendo a função de cada uma das
etapas;

 Verificar se todos os alunos conseguiram obter o material contendo o

DNA do morango/banana;

 Esclarecer as possíveis dúvidas dos alunos quanto à extração do DNA em

célula vegetal.

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