Imunocitoquímica (ICQ)

Introdução à imunocitoquímica

Imuno- Relacionada com o antigênico e do anticorpo

Cito- Vem do grego Kyto e significa célula

Histo- Tecido

Química- Relacionado com as reações que ocorrem

São vários conjuntos de métodos que nos permitem detectar antigenios especificos nas
células, na célula queremos saber se nessa célula há certo tipo de antigenios, então essa
técnica vai achar, vai marcar que existem esses antigenios, ou seja, a imunocitoquímica é
baseada no reconhecimento da ligação anticorpo-antigenio, vai dizer se tem ou não e ainda irá
localizar onde os antigenos estão.

O Antigénio(Ag) é uma moléculam, geralmente é uma proteína, mas tambem pode ser um
carboidrato, lipdeos e ácidos nucleicos, e esse antigenio está presente na célula, e esse
antigenio tem uma zona ou várias na verdade, e nessa zona irá ficar o chamado Epítopo, um
determinante antigenico, e o porque de ser chamado assim, é devido que essa zona vai ligar o
anticorpo necessário para que ocorra a Imunocistoquímica, portanto no antigenio irá ter o
epítomo onde irá ser feita essa ligação, detectando o antigenio e caracterizando a célula, vai
ser exposta, e esses antígenos ´podem se localizar na parte membramar da célula, onde ele
fica na membrana da célula, pode ficsar tambem no citoplasma da célula ou então no núcleo
da célula.

O Anticorpo (AC) tem um formato de y, e é produzido pelo sistema imunitário, majoritamente

pelos plasmócitos, para a tecnica de ICQ o soro de anticorpo é obtido após imunização de
animais-alvo, sua principal função é combinar especificamente com o antígeno em condições
fisiológicas favoráveis à sua ligação,e esse anticorpo tambem tem um local de ligação, o
paratopo, ele se liga ao epítopo.

Depois dessa ligação será preciso de marcadores para localizar, detectar o antigenico. E há o
método direto e o método indantigen

Método direto- Havia um antigenio, um anticorpo, sempre era apenas um, sendo dificultoso
de avaliar. Só havia uma nticorpo e um antigeno.

Método indireto- Já há dois anticorpos ou mais, se tem o método indireto simples

O método indireto de avidina- biotína, e o mais avançado Polímero, que mostra

mais a intensidade e deixa mais fácil o reconhecimento.

O Método Polímero indireto tem sua constituição por anticorpos e enzimas todas acopladas a
um esqueleto interno, e se tem a conjução de grndes quantidades de marcadores permitindo
uma capacidade superior de amplificação, ocorrerá uma maior quantidade de cromogénio seja
precipitada, vai ser mais visualizado, então se tem a célula e o antigênio, depois irá ser
aplicado o anticorpo primário que irá se ligar ao antigenio, e seu anticorpo primario irá se ligar
ao polímero, então para ser visível ao microscópio irá ser necessário fazer a reação da enzima
com o substrato para se visualizar o cromogenio, que o precipitado vai dar a cor acastanhada e
naquele local irá ser visto onde estava o antneoplasia

O ICQ determina o tipo celular, o tipo de origem da célula, subclassifica as neoplasias, graduar
neoplasias.

Cell Block- É um método preferencial para utilizadores desse método, a fixação ocorre por
meio do formol neutro tamponado a 10%, é de fácil preservação, pode ser mantida a
arquitetura tecidolar, e é possível fazer vários cortes da mesma amostra.

Imunocitoquímica é um termo comummente utilizado na Histologia e é geralmente usado para

identificar proteínas específicas nos cortes de tecidos. Esta técnica baseia-se no fato de que
quando uma molécula estranha, antigénio, é introduzida num organismo, este geralmente
reage, produzido uma proteína, anticorpo, que combina-se especificamente com o antigénio.
A imunocitoquímica utiliza algumas substâncias marcadoras que têm a capacidade de se
ligarem aos anticorpos, sem que estes percam a sua capacidade de se acoplarem com o
antigénio. Para tal, existem duas formas distintas de o fazer, a técnica direta e a técnica
indireta.

Os três métodos mais usados para marcar os anticorpos são:

– Conjugação com composto fluorescente. Torna possível a identificação do anticorpo

marcado e, portanto, do antigénio a que ele se liga, pelo emprego do microscópio de
fluorescência.

– Conjugação com uma enzima. O anticorpo é localizado por meio de técnicas histoquímicas,
geralmente, usadas em enzimas. A enzima mais usada é a peroxidase, que pode ser localizada
pelo método DAB (3-3’diaminobenzidina) e visualizada tanto no microscópio ótico como no
eletrónico.

– Conjugação com uma substância que não se deixa atravessar pela luz e que dispersa
eletrões. Um dos marcadores mais frequentemente usados é o ouro, cujas partículas podem
ser visíveis nos microscópios ótico e eletrónico.

Técnica direta

Imagine-se que, de um determinado órgão de rato (ou de outro animal), se possa extrair e
purificar uma proteína, que será denominada de proteína Y (ou antigénio). Pretende-se saber
em que célula ou tecido do órgão ela se localiza. Injetando-se a proteína Y num outro animal,
por exemplo num coelho, este formará um anticorpo com a capacidade de se combinar de
uma forma específica com a proteína alvo, mas não com outras. Do sangue do coelho extrai-se
e purifica-se o anticorpo contra a proteína Y, podendo-se ligar quimicamente este anticorpo a
um composto fluorescente ou a um outro marcador. Assim, procedendo desta forma, obtém-
se um anticorpo que se liga à proteína de interesse (neste caso, proteína Y), e que consegue
ser identificado ao microscópio. De seguida, mergulha-se um corte do mesmo órgão do qual se
obteve a proteína Y numa solução que contenha o anticorpo marcado, haverá uma
combinação dos dois e as estruturas que contiverem a proteína Y serão visíveis.

Técnica indireta

Esta técnica é realizada da seguinte forma: faz-se a imersão do corte histológico em solução
com anticorpo não marcado, obtido do sangue de um animal no qual foi injetado o antigénio
cuja localização se pretende determinar. O anticorpo liga-se ao antigénio, mas não pode ser
observado ao microscópio, um vez que não está marcado. Seguidamente, imerge-se o
preparado em solução com antigamaglobulina marcada. Esta fixa-se à gamaglobulina que já
está ligada ao antigénio, revelando a sua localização. A antigamaglobulina é obtida pela injeção
da fração gamaglobulina no plasma sanguíneo do animal que recebeu injeções do antigénio
numa outra espécie diferente.

Os métodos imunocitoquímicos vêm sofrendo aperfeiçoamentos para que se obtenha uma

maior especificidade e uma localização cada vez mais precisa das macromoléculas
pesquisadas. Uma dessas melhorias é o método do ouro-proteína A que tem sido muito usado
e tem contribuído significativamente na investigação da Biologia Celular e na evolução de
algumas técnicas de diagnóstico médico.