UNINASSAU

Parâmetros e CQ de
Imunoensaios
Prof.: Ms. Gilberto Ferreira Linhares Júnior
 Parâmetros
CQ imunoensaios

• Deve auxiliar tomadas de decisão do clínico;

• Todo método analítico apresenta limitações;

• Real valor dos resultados obtidos;

• Resultado → Probabilidade de refletir a situação

clínica do paciente no momento da colheita da
amostra;
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 Parâmetros
CQ imunoensaios

Gold Standard Test (Teste de referência)

• Verdadeiro estado do paciente (Teoricamente);

• Definitivo e independente do teste avaliado;
• Definitivo: Busca direta da real causa da doença;
• Independente: Técnica e biologicamente não
relacionado ao teste avaliado;
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 Parâmetros
CQ imunoensaios

Gold Standard Test (Teste de referência)

• Ex.: Teste avaliado para infecção chagásica pela

presença do Ac anti-cruzi no soro;

• Referência: Não → Teste imunoenzimático de

fabricante diferente!

• Referência: Sim → Pesquisa direta no sangue;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Sensibilidade

• % Pacientes doentes → Resultado positivo;

• Sensibilidade clínica: (0 a 1 ou %):

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Sensibilidade clínica:

• Exemplo:

• 10 pacientes testados com referência e teste avaliado;

• Referência: 10 positivos (VP);

• Teste: 8 positivos + 2 falso-negativos (FN);

• Sensibilidade: 10 / (2 + 10) = 0,83 x 100 = 83%

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Sensibilidade analítica (técnica):

• Capacidade de quantificar analitos, Ac, Ag;

• Limite de detecção (LD):

– Menor quantidade do analito detectável, não
necessariamente quantificável;

• Limite de quantificação (LQ):

– Menor quantidade do analito quantificável com
exatidão e precisão apropriada;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Especificidade:

• % Pacientes sãos → Resultado negativo;

• Especificidade clínica: (0 a 1 ou %):

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Especificidade clínica:

• Exemplo:

• 10 pacientes testados com referência e teste avaliado;

• Referência: 10 negativos (VN);

• Teste: 9 negativos + 1 falso-positivo (FP);

• Especificidade: 10 / (1 + 10) = 0,90 x 100 = 90%

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 Parâmetros
CQ imunoensaios

Especificidade analítica (Técnica)

• Capacidade para medir exatamente analito na

presença de outros componentes:

- Impurezas;

- Produtos de degradação;

- Componentes da matriz;
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 Parâmetros
CQ imunoensaios

Especificidade analítica (Técnica)

• Em análise qualitativa (identificação)

• Resultados positivos na presença do composto;

• Resultados negativos na ausência do composto,

mas com compostos semelhantes presentes;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios

Especificidade analítica (Técnica)

• Em análise quantitativa (dosagem/teor):

1 - Comparação entre resultados:

- Amostras contaminadas com impureza;

- Amostras não contaminadas.

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 Parâmetros
CQ imunoensaios

Especificidade analítica (Técnica)

• Em análise quantitativa (dosagem/teor):

2 – Comparação com método oficial (específico):

- Alternativa na ausência de substâncias de referência;

- Testes sob condições de estresse exigidos (luz, calor,
umidade, hidrólise, oxidação);
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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Falso-positivos: Fatores

• Ac naturais, heteroAc;

• Ex.: Geralmente IgM → diferentes epítopos;

– Falso-positivos teste hemaglutinação para Chagas;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Falso-positivos: Fatores

• Indivíduo poliinfectado por parasitas intestinais;

• Síntese Ac → vários Ag alvo de testes

sorológicos;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Eficiência:

• Sinônimos: Acurácia, Precisão diagnóstica;

• % Diagnósticos corretos;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Eficiência:

• Exemplo:

• 10 pacientes testados com referência e teste avaliado;

• Teste: 4 VP, 4 VN, 1 FN, 1 FP;

• Especificidade: 4 + 4 / 10 = 0,80 x 100 = 80%

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Precisão

• Avaliação da proximidade entre série de resultados

de amostragem múltipla de mesma amostra;

• Expressa pelo desvio padrão relativo (DPR) ou

coeficiente de variação (CV%);

• Mínimo aceitável: variável, porém não superior a

5%;
Em que:
DPR é o desvio padrão relativo;
DP é o desvio padrão;
CMD é a concentração média.
 Parâmetros
CQ imunoensaios
Precisão Analítica (Técnica)

1. Repetibilidade (precisão intra-corrida);

2. Precisão intermediária (precisão inter-corridas);

3. Reprodutibilidade (precisão inter-laboratorial);

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Precisão Analítica (Técnica)

1. Repetibilidade (precisão intra-corrida):

- Curto período de tempo;

- Mesmo analista;
- Mesma instrumentação;
- Mínimo de 9 determinações (3 baixa, 3 média, 3
alta);
- Mínimo de 6 determinações (6 x 100% do teste);
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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Precisão Analítica (Técnica)

2. Precisão intermediária (inter-corridas):

- Mesmo laboratório;
- Diferentes analistas;
- Dias diferentes;
- Equipamentos diferentes;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Precisão Analítica (Técnica)

3. Reprodutibilidade (inter-laboratorial):

• Resultados obtidos por laboratórios diferentes;

• Diversos fatores envolvidos;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
3. Reprodutibilidade:

• Qualidade dos reagentes;

• Condição dos equipamentos (calibração, desgaste);

• Certificação ISO (International organization for

Standardization) → padronização da qualidade;
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 Parâmetros
CQ imunoensaios
3. Reprodutibilidade:

• Erros humanos: Forte influência;

• Ex.: Variações técnicas não previstas pelo

fabricante;
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 Parâmetros
CQ imunoensaios
3. Reprodutibilidade:

• Erros humanos: Forte influência;

• Ex.: Variações técnicas não previstas pelo

fabricante;
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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Linearidade

• Intervalo de concentração do analito com resultados

diretamente proporcionais;

• Coeficiente de correlação linear (r) mínimo aceitável:

0,99;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios

Exatidão

• Proximidade dos resultados obtidos com aqueles

verdadeiros;

• Determinação experimental;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Valores preditivos

• Precisão de um teste prever uma condição médica;

• Se resultado + → Qual probabilidade do indivíduo

estar de fato doente?

• Se resultado - → Qual probabilidade do indivíduo de

fato não estar doente?
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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Valores preditivos

• Positivo (VPP):

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Valores preditivos

• Negativo (VPN):

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 Sensibilidade x Especificidade
Teste: Descobrir → quem está bêbado?

Teste 1: Corda bamba 50m.

DESEMPENHO CONCLUSÃO
CAIU BÊBADO
NÃO CAIU NÃO BÊBADO

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 Sensibilidade x Especificidade
Teste: Descobrir → quem está bêbado?

Teste 1: Corda bamba 50m.

DESEMPENHO CONCLUSÃO
CAIU BÊBADO
NÃO CAIU NÃO BÊBADO

Teste: Alta sensibilidade (Maioria bêbada detectada);

Baixa especificidade (Muitos não bêbados
detectados como bêbados);

Risco: Falso positivo;

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 Sensibilidade x Especificidade
Teste: Descobrir → quem está bêbado?

Teste 2: Ponte 50m.

DESEMPENHO CONCLUSÃO
CAIU BÊBADO
NÃO CAIU NÃO BÊBADO

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 Sensibilidade x Especificidade
Teste: Descobrir → quem está bêbado?

Teste 2: Ponte 50m.

DESEMPENHO CONCLUSÃO
CAIU BÊBADO
NÃO CAIU NÃO BÊBADO

Teste: Baixa sensibilidade (Minoria bêbada detectada);

Alta especificidade (Poucos não bêbados
detectados como bêbados);

Risco: Falso negativo;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Conclusão:

Sensibilidade Especificidade

• Desafio: Método sensível e específico o suficiente para

o que se propõe;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios

• Ex 1: Triagem para doador de sangue;

• Necessária máxima sensibilidade! (100%)

• Nenhum falso negativo!

• Falso positivo aceitável!

• Risco de doença infecciosa evitado ao máximo;

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 Parâmetros
CQ imunoensaios

• Ex 2: Certeza diagnóstica (Teste HIV);

• Necessária máxima especificidade! (100%)

• Nenhum falso positivo!

• Risco de diagnóstico errado → catástrofe moral!

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Considerações importantes:

• Não existe teste 100% sensível e 100% específico;

• Busca do ponto de corte com máximos valores;

• Comunicação dos riscos de FP e FN ao usuário;

• Ex.: Sensibilidade 95% / Especificidade 98% → 5%

FN e 2% FP;
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 Parâmetros
CQ imunoensaios

Curva ROC (Receiver Operating Characteristic):

• Gráfico ideal para análise de testes;

• Ponto de corte → Menores falsos resultados;

• Sinônimos: Limiar de reatividade ou cut off point;

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Curva ROC
 Parâmetros
CQ imunoensaios
Likelihood ratio (LR)

• Teste só é útil → Mudança na decisão do clínico

quanto a probabilidade de haver alguma doença;

• Ou seja: Resultado diminui ou aumenta suspeita;

Teste
Probabilidade Probabilidade
pré-teste pós-teste

DIFERENTES
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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Likelihood ratio (LR)

• Medida da magnitude dessa mudança na

probabilidade;

• Diretamente ligada à Eficácia!

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 Parâmetros
CQ imunoensaios
Likelihood ratio (LR)

• Positivo: Probabilidade de confirmar doença;

• Negativo: Probabilidade de excluir doença;

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F I M