ESTRUTURA

CROMOSSÔMICA
-Uma célula humana contém 2m de DNA
-Imagine uma célula típica, com 10 micrômetros de diâmetro, ampliada do tamanho de
uma sala de aula com 10m de um lado a outro. O DNA deve ser representado por
2000km de um fio, ocupando muito espaço na sala
-Agora duplique este DNA, transformando cada fita simples em uma fita dupla
-Se você quiser evitar emaranhamentos e confusões em sua sala de aula cheia de fios,
deve organizá-los de alguma forma muito precisa
-É isso que os cromossomos fazem na célula!
-O tamanho do DNA no núcleo de cada célula é enorme
-O DNA precisa ser compactado!
-Essa compactação envolve uma série de proteínas num número distinto de etapas,
cada uma com sua taxa de empacotamento

-Como a célula sai de uma estrutura linear e chega a uma estrutura compacta chamada
cromossomos?
-O cromossomo representa o estágio final de compactação da molécula de DNA ao
longo de um determinado ciclo.
-Nos eucariotos: o DNA no núcleo está organizado em um conjunto de cromossomos -
Genoma Nuclear
-Cada cromossomo consiste de uma única molécula linear de DNA, associada com
proteínas que enrolam e compactam os finos fios de DNA.

ESTÁGIOS:
1° ESTÁGIO: A fibra Nucleossômica
-A molécula do DNA é enrolada sobre
um corpo formado por 8 moléculas de
Histonas, e esse octâmero de histonas é
formado por quatro tipos de histonas
principais: H2A, H2B, H3 e H4.
-As histonas são proteínas básicas com
um domínio globular e variam na sua
cauda n-terminal e por serem básicas,
se associam com as características
ácidas do DNA.
-A molécula do DNA dá 1.7 voltas de
DNA sobre o octâmero de histonas
formando a Partícula Core
-Essas interações são mantidas entre os
fosfatos do DNA e os aminoácidos
básicos das histonas através de ligações
eletrostáticas que mantém a partícula
core estável.
-Uma histona H1 (não faz parte do
octâmero) se liga lateralmente à
partícula Core, estabilizando e selando
essa interação entre o DNA e o
octâmero de histonas. Essa estrutura é
chamada de Cromatossomo:partícula
core + histona H1
-Quando temos o cromotassomo
conectados por um DNA espaçador, ou
linker DNA,é formado o Nucleossomo
-Em média cerca de 200 pares de base
estão envolvidos na compactação e na
formação de um nucleossomo
-A taxa de empacotamento possui uma
magnitude de ordem 7x(10nm de
diâmetro)
-Se degradarmos essas conexões,
chegamos a cerca de 200 nucleotídeos
por octâmero de histonas na sua
compactação

-MONTAGEM DOS NUCLEOSSOMOS:

-A montagem dos nucleossomos ocorre na Fase S, logo após a síntese do DNA
-Quando o DNA está associado às proteínas ele é chamado de Cromatina
-1°: H3 e H4 são depositadas por uma enzima chamada CAF 1 (Chromatin Assembly
Factor)
-2°: H2A E H2B são depositadas pela enzima NAP 1 (Nucleossome Assembly
Protein)
-3°: H1 é adiciona posteriormente

-Como a replicação e a transcrição ocorrem na fibra nucleossômica?

-Para a replicação do DNA ocorrer, há um grande complexo proteico (RNA
polimerase, DNA polimerase) com uma certa magnitude de enzimas, na chamada
bolha de replicação/transcrição e a molécula do DNA precisa ser acessível, mas como
isso é possível frente a sua compactação?
-Nucleossomos: obstáculos para passagem dos complexos proteicos
-Para que aconteçam, as interações entre o DNA e as histonas devem ser
momentaneamente perdidas

-Acetilações das histonas:

-Lisinas 9 e 14 (N-terminal da H3) - -Lisinas 8 e 16
-Reduz as interações entre as histonas e o DNA pela perda da interatividade
eletrostática, tornando o DNA mais acessível, logo os genes ficam ativados
-Esse processo é realizado pelas enzimas HATs (histone acetyltransferases) e HDACs
(Histone Deacetylases)
-Ao acetilar as histonas o DNA se torna mais acessível

-Remodelamento da Cromatina
-A acetilação das histonas nem sempre é suficiente para tornar o DNA acessível para a
transcrição, por isso faz-se necessário os Complexos de Remodelamento da cromatina
que desestabilizam a estrutura nucleossômica, fazendo quebras físicas nas
conectividades entre o DNA e as histonas com uso de ATP com várias subunidades
(ATPases)

-Metilação das Histonas

-Processo contrário
-Lisina 9 (N-terminal da H3)
-A ação das enzimas Metiltransferases (HMT) recruta outras proteínas como HP1 e a
Mec02 (repressoras transcricionais) que causam um maior empacotamento do DNA
com as histonas e permanecem no caminho da RNA polimerase bloqueando qualquer
ação da mesma, ou seja, a transcrição não acontece

-Fosforilação das histonas

-A fosforilação da H1: neutraliza as cargas positivas e destrói a ligação histona-DNA
-A transcrição acontece

2° ESTÁGIO: Formação das Solenoides

-A Fibra nucleossômica é enrolada sobre uma hélice regular com 6 nucleossomos por
volta. (Finch and Klung, 1976)
-Estrutura de solenoide ou bobina
-Modelo solenoide do empacotamento da cromatina
(PESQUISAR IMAGEM)
-A taxa de empacotamento tem uma ordem de grandeza de 40-50X (30nm de
diâmetro)

OS CROMOSSOMOS NA INTÉRFASE:
-O núcleo interfásico: os cromossomos
passam a maior parte do tempo e
realizam a maioria de suas funções
(transcrição e replicação)
-A cromatina está ancorada sobre uma
estrutura nuclear proteica
-A matriz nuclear serve de suporte para
que a fibra solenoica se ancore e forme
uma das etapas de compactação,
formando estruturas na forma de loops
-Esses sítios de ligação entre o DNA e a
matriz nuclear são chamados de MARs.
-2 tipos de proteínas não histônicas na
matriz: Sc (Scaffold) I e Sc II (principal
proteína segregação + condensação)
-Taxa de empacotamento = 2000X
(260nm de diâmetro)

ESTRUTURA DOS CROMOSSOMOS MITÓTICOS e MEIÓTICOS:

-Assim como na intérfase a estrutura proteinácea nas quais loops de 30nm da fibra
cromatínica se aderem

CONDENSAÇÃO CROMOSSÔMICA:
-Estágios finais:
-Cromômeros: agregação de fibras sem uma orientação definida
-Taxa de empacotamento = 10000X (2000nm de diâmetro)

BIOQUÍMICA DA CONSDENSAÇÃO
-Várias proteínas envolvidas: histonas, topoisomerase II, tininas
-Condensinas: induzem o enovelamento do DNA e se ligam a ele estabilizando-o
-São proteínas elásticas que funcionam como se fossem grampos, possuem duas
subunidades, um domínio de ATP (ou seja, exigem gasto energético) e atuam como
estabilizadoras das formações do solenoide, dos loops, etc
-Cada cromossomo representa o estágio
final de compactação de uma molécula
de DNA
-A formação e compactação do DNA
também é essencial para a divisão
equalitária de material genético nas
células filhas durante o processo da fase
M do ciclo celular

OUTRAS MANEIRAS DE SE EMPACOTAR O DNA:

-Fibra Nucleossômica: quase universal entre os eucariotos, exemplos principais:
-Espermatozóides (espaço físico limitado) - tipo especial de histonas: protaminas,
arranjam a molécula de DNA de forma hexagonal formando uma estrutura mais densa
-Dinoflagelados: não é compactado em nucleossomos, existe um complexo com
proteínas básicas e uma grande quantidade de metais associados (Mn, Fe, Ni, Cu e Zn)
-O Cromossomo bacteriano:
-Apresentam um "cromossomo", mas que não é realmente um cromossomo pois não
seguem todos esses estágios de compactação dos eucariotos, porém seguem a mesma
regra do DNA se associando a proteínas. No caso das bactérias o DNA é circular e se
associa com proteínas formando o Nucleóide
-1° proteínas se ligam ao DNA formando loops
-2° supercoiling (super enovelamento): enzimas girase e topoisomerase promovem o
enovelamento deixando-a com um tamanho menor

REGIÕES ESPECIALIZADAS DOS CROMOSSOMOS:

CENTRÔMEROS E CINETÓCOROS
-Uma das características essenciais de todos os cromossomos é a presença se um
Centrômero e de um Telômero

CENTRÔMEROS:
-Constrição primária do cromossomo
-Região por onde as cromátides irmãs são unidas
-Local onde os microtúbulos se ligam
-Constrição que aparenta não estar dividida
-Por que o centrômero aparece como uma constrição?
-Resultado de como o DNA centromérico está organizado
-A região centromérica apresenta duas propriedades relevantes que atuam em conjunto
para que essa região tenha uma compactação diferente das demais regiões do
cromossomo
- Sequências de DNA específicos - alfa-satélite:loops menores e mais aderidos ao
scaffold
-Presença de uma histona H3 variante, a CENH3 que faz com que a interação do DNA
com a histona seja muito maior, deixando essa região muito mais compactada e
estrangulada
-O DNA dos centrômeros já foi dividido e as cromátides permanecem unidas em
alguns pontos
-Coesinas: mantém as cromátides-irmãs unidas durante o processo
-A partir do momento que a molécula do DNA se duplica e passa pela compactação
gera duas cópias que permanecem unidas e serão separadas durante a divisão celular.
-A conexão feita pelas coesinas, em algum momento, será quebrada para que as
cromátides-irmãs se separem

-O que faz de um centrômero, um centrômero?

-Na maioria dos eucariotos as sequências dos centrômeros são muito variáveis e quase
sempre específicas, além de conter uma grande quantidade de DNAs repetitivos
1- Deve haver alguma sequência específica e fundamental para a formação dos
centrômeros:
-Existe o gene CENP-B box que é um sítio de ligação para a proteína centromérica
CENP-B
2- Seria mais importante a organização estrutural desta região do que as sequências
que a compõe

Forma: depende da posição do centrômero no cromossomo

-Metacêntrico: posição mediana do centrômero, com dois braços de igual tamanho
-Sub-Metacêntrico: posição do centrômero deslocada do centro, com dois braços de
tamanhos desiguais
-Acrocêntrico: posição do centrômero quase terminal - o braço é bem menor do que
no sub-metacêntrico

CINETÓCOROS:
-É a estrutura proteica por onde os centrômeros se ligam às fibras do fuso durante a
mitose e a meiose
-é o intermediário proteico entre os microtúbulos e o cromossomo
-Uma camada densa aderida a superfície da cromatina centromérica circundada por
duas camadas eletro densas, interna e externa (corona-adesão dos microtúbulos)

-Proteínas do Cinetócoro
-Aspectos estruturais e funcionais dos centrômeros
-Grande número de proteínas que, coletivamente, são chamadas de CENPS=
CENtromeric Proteins

-A maioria dos eucariotos: cromossomos monocêntricos e cinetócoros discretos

-Algumas plantas e animais: cromossomos holocêntricos, pois os microtúbulos se
ligam ao longo de todo o cromossomo; como se existissem múltiplos genes com sítios
de ligação para os cinetócoros

-Tipos:
-Múltiplos cinetócoros discretos
-Cinetócoro único e alongado por todo o cromossomo

TELÔMEROS:
-Nos procariotos há apenas uma molécula de DNA circular
-Nos eucariotos os cromossomos possuem extremidades
-Extremidades dos cromossomos: telômeros
-Sequências repetitivas curtas e conservadas: sequências teloméricas
-Em muitos eucariotos: (TTAGGG)n
-Papel dos telômeros:
-Garantir a síntese correta do DNA nas -Molde de RNA complementar a
pontas dos cromossomos sequência telomérica
-Manter a estabilidade do cromossomo -A telomerase está ativa na nossa célula
somente no período embrionário, onde
-A enzima telomerase é uma DNA-
ela coloca, na extremidade do
Polimerase especial: além do
cromossomo, uma grande quantidade
componente da enzima, possui também
de sequências repetitivas TTAGGG,
um componenete de RNA
que serve pera que o que é perdido a
-A telomerase consiste em: cada ciclo de replicação seja essa
"gordura" incluída pela telomerase, ao
-Uma transcriptase reversa: transforma
invés de genes importantes.
uma fita simples de RNA como molde
numa fita de DNA, complementar à sua
sequência

-Como os telômeros protegem as extremidades dos cromossomos?

-DNA telomérico é organizado em uma -A fita do DNA está mais
cromatina não-nucleossômica: descompactada no final e forma um
Telosomo loop escondendo sua extremidade final,
deixando-a inacessível para a digestão
-A dupla fita forma um grande loop (t-
de outras enzimas que talvez queiram
loop)
degradá-la
-Uma fita simples rica em GC forma
-Região heterocromática adjacente
um loop menor (d-loop)
-TPE (Telomeric position effect)

CROMOSSOMOS GIGANTES:
-Existem em situações especiais
-Cromossomos plumosos (lampbrush)
-Cromossomos Politênicos

1-Cromossomos Plumosos:
-Possuem uma morfologia particular e
são bem visíveis na intérfase: etapas da
meiose das fêmeas de alguns animais
(ovócitos de anfíbios)
-Intensa atividade gênica para garantir o
desenvolvimento correto do embrião
após a fertilização
-Os cromossomos plumosos descompactadas garantindo uma
representam essas alças nas etapas de expressão gênica mais proeminente
compactação do DNA mais

-O que representam os loops?

-Regiões gênicas que estão sendo altamente expressas, com uma intensa síntese de
RNA
-Após essa síntese, as alças voltam a se condensar, e os cromossomos readquirem sua
forma típica

2-Cromossomos Politênicos:
-Apresentam uma morfologia particular genes entram em atividade, havendo
e são bem visíveis na intérfase uma intensa síntese de RNA
-Presentes em células das glândulas
salivares de larvas de insetos, a fim de
-Cromossomos Piltênicos de Dipera:
produzir muitas enzimas digestivas
-Expressão gênica diferenciada ao
-Intensa atividade gênica para a síntese
longo do desenvolvimento larval
de um grande número de enzimas
digestivas -Puffs: Anéis de Balbiani, possuem
posições variadas
-Sucessivos ciclos de replicação do
DNA sem que ocorra a divisão celular
-Filamentos permanecem unidos lado a
lado, formando um cromossomo muito
espesso e grande com múltiplas
moléculas de DNA
-Cromossomos gigantes contendo
milhares de vezes a quantidade normal
de DNA
-Pode haver regiões mais escuras e
densas que representam genes que estão
sendo múltiplas vezes expressos
-Em certos momentos do
desenvolvimento, algumas bandas
formam os "puffs": locais em que os