Phoneutria

E SEU POTENCIAL TERAPEUTICO NA ISQUEMIA CEREBRAL

O veneno da aranha tem se

mostrado uma fonte promissora
de compostos bioativos para
pesquisa farmacêutica

O VENENO QUE
CURA?
•Isquemia cerebral;
•Quantificação do
•característica da
processo apoptótico;
phoneutria negriventer;
•estrutura e farmacologia
•Ações do seu veneno; das neurotoxinas do
•preparação; veneno;
•neuroproteção toxina •Padronização e
Phtx3-3 é Phtx3-4: validação do modelo
•jogos ; experimental;
•Liberação de glutomato •O calcio intracelular 1
durante o processo de •Objetivo do estudo
esquemia cerebral;

ESSE JORNAL ESTÁ DISPONÍVEL

NO QR CODE NA PÁGINA 20
1
 ISQUEMIA
CEREBRAL
A isquemia cerebral pode ser
focal (atinge apenas um
determinado vaso) ou global
(atinge todo o cerebro).
Sua gravidade depende do
tempo, duração, e localização.

O processo da isquemia se dá na diminuição

do fluxo sanguíneo em determinada região
esse feito é acompanhado por redução da
quantidade de o2 e de glicose assim acontece
uma cr ise Celular energética ,uma forma de
previni r a mor te celular as células que estão
na região isquêmico começa a iniciar o
processo de glicose anaeróbica esse processo
faz com que seja ofer tado uma pequena
quantidade de energia para manter a
sobrevida neural.

Essa crise celular energética acaba

interrompendo a atividade de varios
mecanismos vitais (como as bombas iônicas
que depende de energia para a sua sobrevida)
ocorre um aumento da concentração de íons
principalmente aumento na concentração de
cálcio intracelular e de potássio extracelular ,
ocorre também um aumento de concentração
de neurotransmissores principalmente o de
glutamato que é o principal neurotransmissor
excitatorio no dnv de mamíferos .
2

2
 LIBERAÇÃO DE GLUTAMATO
DURANTE O PROCESSO DE ISQUEMIA CEREBRAL

Durante o processo de isquemia cerebral, os pesquisadores realizaram experimentos para

avaliar a eficácia de agentes neuroprotetores na redução da liberação de glutamato durante
o processo de morte celular causado pela isquemia cerebral.

Utilizando fatias de córtex cerebral de ratos, eles

mediram a liberação de glutamato após submeter
algumas amostras ao processo isquêmico e outras
não. Os resultados mostraram que as amostras
submetidas à isquemia apresentaram uma maior
liberação de glutamato em comparação com o
controle. Em seguida, os pesquisadores
investigaram o papel do cálcio extracelular nesse
processo isquêmico. Pré- incubando as amostras
com uma solução contendo baixa concentração de
cálcio ou na presença de EGTA, eles observaram
uma redução na liberação de glutamato em
comparação com as amostras submetidas apenas à
isquemia.

Para avaliar o efeito dos canais de cálcio dependentes de voltagem na liberação de

glutamato durante o processo de isquemia, foram utilizadas toxinas bloqueadoras
desses canais (w- conotoxina MVIIC 100uM e w-conotoxina GVIA 100uM). Foi observada
uma redução na liberação de glutamato quando comparada com as fatias submetidas
apenas à isquemia. Em seguida, foram realizados experimentos utilizando toxinas da
aranha Phoneutria nigriventer, que também resultaram em redução na liberação de
glutamato. A ação de ferramentas farmacológicas para reduzir a concentração de cálcio
no processo apoptótico durante a isquemia cerebral in vitro. Eles utilizaram ensaios
fluorimétricos para quantificar o processo apoptótico, detectando a quantidade de
caspase-3. Os primeiros experimentos foram realizados com bloqueadores de canais de
cálcio externo e toxinas da aranha Phoneutria nigriventer, mas não observaram redução
no processo apoptótico. Em seguida, realizaram experimentos com bloqueadores de
cálcio interno e observaram uma redução significativa na atividade de caspase-3.

3
 CARACTERÍSTICAS DA
PHONEUTRIA NEGRIVENTER
Phoneutria negriventer são carnívoros se alimentam de insetos como grilos e
baratas, elas tem hábitos domiciliares quando estão no período de
acasalamento, quando os machos tornam-se mai s ativos à procura das fêmeas,
assim se tem mais ocorrência de acidentes que ocorrem frequentemente à
noite dentro das residências, onde elas podem estar “escondidas” em matériais
de construção, entulhos lenha e até mesmo dentro de calçados.
MORFOLOGIA EXTERNA DAS ARANHAS

4
Seu corpo é dividido em cefalotorax e abdome articulam- se quatro pares de
pernas um par de pedipalpo é um par de quelíceras. Nas quelicias estão os ferrões
utilizado para a inoculação do veneno, ela é popularmente chamada de aranha
“armadeira“ pois no seu comportamento de defesa se apoiam nas patas traseiras
erguem as dianteira e os palpos abrem as quelíceras tornando- se bem visível os
ferrões.
O quadro clínico das pessoas que foram acometidas podem variar, como: dor
imediata (é o sintoma mais frequente). Em apenas 1% dos casos as pessoas se
apresentam assintomáticas após a picada. Sua intensidade é variável, podendo se
irradiar por todo membro acometido. Outras manifestações são: edema, eritema,
parestesia e sudorese no local da picada.

4
 ESTRUTURA E FARMACOLOGIA
DAS NEUROTOXINAS DO VENENO DAS ARANHAS

As aranhas, em particular as espécies Latrodectus, Loxosceles e Phoneutria,

produzem venenos com neurotoxinas valiosas. Essas toxinas incluem polipeptídeos
com peso molecular entre 3000 e 10000 Da, bem como proteínas de alto peso
molecular.

Elas afetam canais de cálcio e sódio sensíveis à

voltagem, que são cruciais para funções neuronais,
musculares e cardíacas. Por exemplo, as ω-
agatoxinas bloqueiam canais de cálcio com alta
afinidade, e as µagatoxinas retardam a inativação
dos canais de sódio dependentes de voltagem, de 2 5 6
forma semelhante às toxinas de escorpião. Essas
descobertas têm aplicações na pesquisa
farmacológica.
AÇÕES DO SEU VENENO

O veneno da aranha é constituído por proteinas,polipeptídeo, enzimasácidos necleicos,

monoaminassais inorgânicos e toxinas políaminas. Os principais alvos dessas toxinas são
os receptores pré sinápticos que são envolvidas nas liberações de neurotransmissores.

Do veneno da aranha foram isolados inibidores de fosfolipase A2(PLA) este agente pode
ser utilizado como ferramenta farmacológica ou na regulação da atividade de PLA2 em
várias doenças incluindo a desordem neurológica.

A pla2 pertence a um grupo heterogêneo de enzimas que hidrolisam especialmente

ácidos graxos da membrana lipídica e produzem uma variedade de medidas
inflamatórias como; prostaglantromboxanos, leucotrienos, lipoxinas, e fatos ativados de
plaqueta.

Os inibidores de pla2 tem apresentado sucesso no tratamento de desordem neurológica

associado a PLA2 como a isquemia cerebral .

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 PADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO
DO MODELO EXPERIMENTAL

Ultiliza-se células do cérebro em laboratório para testar novas substâncias.

Usam um método de coloração para ver se as células estão vivas ou mortas.

Esse modelo é mais barato e rápido do que usar animais para os testes.

Existem outros métodos que também

podem ser usados para estudar as células
do cérebro, como: análises microscópicas e
medidas bioquímicas. (Esses métodos são
mais complicados e demoram mais tempo.)
Outros métodos bioquímicos são usados para
verificar se as células estão vivas.
Em algumas dessas metodologias usam
marcadores da atividade das mitocôndrias,
que são partes das células.
Um desses métodos é o uso de uma
substância chamada cloreto de
trifeniltretazolium (TTC), que forma um
depósito nas células com mitocôndrias ativas
(Esse método não é bom para ver como as
células são por dentro e precisa de outras
etapas para ser feito).
Outros métodos usam a liberação de uma
substância chamada lactato desidrogenase, o
consumo de glicose e oxigênio ou a medida
dos níveis de ATP (esses métodos são usados
em modelos de células e em modelos de
doenças do cérebro), mas eles não são fáceis
de usar em fatias do cérebro.
Esses experimentos precisam ser feitos com
cuidado e não conseguem ver ao mesmo
tempo as células que são vulneráveis e as que
são resistentes a um problema no cérebro.
Outro método usado é medir os sinais
elétricos dos neurônios do hipocampo (esse
método é rápido e fácil,mas precisa de um
equipamento especial).
Foi realizado experimentos usando
substâncias para estudar células cerebrais,
descobriram que reduzir a quantidade de
cálcio nas células pode protegê-las de danos.
Usando uma substância chamada EGTA para
reduzir o cálcio externo, mas não todo o
cálcio. Isso foi importante porque reduzir
muito o cálcio pode causar a morte das
células.

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 PADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO
DO MODELO EXPERIMENTAL

Exite um efeito paradoxal do cálcio, que foi

descoberto por cientistas em 1966. Foi
realizado experimentos em células do
coração e do cérebro e descobriram que
quando a concentração de cálcio é baixa, a
concentração de sódio aumenta e isso pode
levar à morte das células.

Uma substância chamada tetrodotoxina

pode bloquear os canais de sódio e ajudar a
tratar problemas no cérebro causados pela
falta de oxigênio.

Vários remédios estão sendo testados para ajudar as pessoas, mas alguns deles
não estão funcionando muito bem.

Dois remédios chamados lifarizine e lubeluzole causaram pressão baixa nos

pacientes, então os testes com esses remédios foram interrompidos.

Nossos experimentos mostraram que um remédio chamado TTX pode proteger

o cérebro, e isso confirma o que outros estudos já mostraram. Isso significa que o
nosso modelo de estudo é realmente bom.

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 PADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO
DO MODELO EXPERIMENTAL

PREPARAÇÃO
Método para o fracionamento do veneno da Phoneutria nigriventer, através
do qual o veneno é processado em uma combinação de filtrações em gel e
RFPLC, gerando 3 frações neurotóxicas distintas (PhTx1 a PhTx3) .

Preparação das fatias do hipocampo de ratos da raça wista pesando 150 a

200g , de ambos os sexos eles foram sacrificados pela decapitação em
guilhotina, o cérebro foi removido rapidamente e os hipocampos foram
dissecados e fatiados em 400um de espessura e levados a câmera de
7perfussão para os procedimentos subsequentes.

Fatias do hipocampo foram incubados nas câmeras para fatias de tecido no

meio ACSF com glicose e oxigenadas (mistura carbogenica contendo 95%de
o2 em temperatura de 36,5 c’ por um período de 1 hora e 30 min para a
recuperação do trauma mecânico da dissecação). Também foram utilizados
células SN56 (linhagem neuronal) para fazer teste farmacológico que
produzem neuronprotrção em fatias de hipocampo de ratos.

As células SN56 foram cultivadas em meio DMEM contendo 3,7g de NaHCO3,

por litro, 2mM de glutamina, penicilina/estreptomicina a 1%, 10% de soro fetal
bovino. (ANA CRISTINA DO NASCIMENTO, 2007)

8
 NEUROPROTEÇÃO
TOXINA PHT3-3

imagem representa fatia

do hipocampo em
isquemia cerebral sem o
uso da toxina phtx3-3

imagem representa
fatia do hipocampo em
isquemia cerebral com o
uso da toxina phtx3-3

“As fatias de hipocampo foram perfundidas com solução ACSF com glicose e
aeradas com mistura carbogênica (95% de O2 e 5% de CO2) durante 1h e 30
minutos para recuperação do trauma mecânico. Após este processo uma das
câmaras contendo parte das fatias foi submetida a um processo de pré-incubação
com uma solução contendo 0,8nM de TX3-3 e a outra câmara sofreu o mesmo
processo sendo que esta continha apenas ACSF. Em seguida as fatias foram
perfundidas por uma solução isquêmica (privada de glicose e de O2 e aerada com
N2). Após o processo isquêmico, ambas as fatias foram submetidas à recuperação
por um período de 4 horas com solução ACSF com glicose e aeradas com mistura
carbogênica (95% de O2 e 5% de CO2).” - Segundo artigo EFEITO DAS
NEUROTOXINAS DA ARANHA PHONEUTRIA NIGRIVENTER NA ISQUEMIA
CEREBRAL IN VITRO pag.52

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 NEUROPROTEÇÃO
TOXINA PHT3-4

imagem representa fatia

do hipocampo em
isquemia cerebral sem o
uso da toxina phtx3-4

imagem representa fatia

do hipocampo em
isquemcerebral com o
uso da toxina phtx3-4

“As fatias de hipocampo foram perfundidas com solução ACSF com glicose e
aeradas com mistura carbogênica (95% de O2 e 5% de CO2) durante 1h e 30
minutos para recuperação do trauma mecânico. Após este processo uma das
câmaras contendo parte das fatias foi submetida a um processo de pré-
incubação com uma solução contendo 16nM de TX3-4 e a outra câmara sofreu o
mesmo processo sendo que esta continha apenas ACSF. Em seguida as fatias
foram perfundidas por uma solução isquêmica (privada de glicose e de O2 e
aerada com N2). Após o processo isquêmico, ambas as fatias foram submetidas à
recuperação por um período de 4 horas com solução ACSF com glicose e aeradas
com mistura carbogênica (95% de O2 e 5% de CO2)” - Segundo artigo EFEITO
DAS NEUROTOXINAS DA ARANHA PHONEUTRIA NIGRIVENTER NA ISQUEMIA
CEREBRAL IN VITRO pag.52

10
 NEUROPROTEÇÃO
O CÁLCIO INTRACELULAR PARTICIPA DO PROCESSO DE ISQUEMIA
CEREBRAL IN VITRO:

Ainda não sabemos se outros canais

de cálcio também são afetados pela
isquemia, mas nossos resultados
sugerem que essas substâncias
podem ajudar a manter ou
aumentar a atividade de certos
canais de cálcio para proteger o
cérebro.
O cálcio dentro das células do
cérebro pode causar danos quando
há falta de oxigênio. Isso acontece
porque o cálcio entra nas células
através de canais especiais e causa a
morte das células.
Em nosso estudo, descobrimos que algumas substâncias
que reduzem o cálcio dentro das células também reduzem
a morte celular. Isso sugere que o cálcio é importante para
o processo de morte celular.
Realizamos experimentos para ver
como algumas substâncias afetam
uma atividade chamada caspase-3
Testamos bloqueadores de canais
de cálcio e toxinas de uma aranha
chamada Phoneutria nigriventer.

Em um estudo, os Descobrimos que essas substâncias não

pesquisadores descobriram que conseguiram reduzir a atividade da caspase-
o cálcio que já estava dentro das 3
células do cérebro estava
envolvido nesse processo. Eles
também descobriram que uma
parte chamada retículo Isso significa que as toxinas da aranha podem não
endoplasmático era responsável ter influência na morte celular após um evento
por proteger as células do
cérebro. Eles descobriram isso chamado isquemia. Mas elas podem participar de
usando medicamentos outro tipo de morte celular chamada apoptose,
especiais que bloqueiam os através da ativação de um fator chamado AIF.
receptores no retículo
endoplasmático. para a Vamos fazer mais experimentos para ter certeza do
mitocôndria. Isso faz com que a papel das toxinas da aranha nesse processo.
mitocôndria libere substâncias
que causam a morte celular

11
 NEUROPROTEÇÃO
ASPECTOS BÁSICOS DA SINALIZAÇÃO DE CÁLCIO INTRACELULAR

O cálcio intracelular é essencial para regular funções celulares. É mantido por

entradas e saídas controladas, envolvendo diversos canais e sistemas. A sinalização de
cálcio ocorre através de variações na sua concentração intracelular, provenientes de
estoques internos e externos. Diferentes tipos de canais de cálcio na membrana
celular contribuem para isso, junto com a liberação de cálcio de estoques internos,
regulada por receptores específicos. O cálcio é removido por mecanismos como
trocadores de sódio/cálcio e bombas de cálcio. Essa sinalização é fundamental para
controlar muitos processos celulares.

PAPEL DO CÁLCIO NA ISQUEMIA CEREBRAL

A excitotoxicidade em doenças como a isquemia cerebral envolve o excesso de cálcio

intracelular devido à superestimulação dos receptores de glutamato. Inicialmente,
acreditava-se que o aumento do cálcio citoplasmático era diretamente prejudicial. No
entanto, outras hipóteses, como o envolvimento do cálcio nas mitocôndrias e no
retículo endoplasmático, são agora consideradas. A bomba SERCA é afetada durante
aisquemia, comprometendo a homeostase do cálcio. O acoplamento entre o retículo
endoplasmático e as mitocôndrias é crucial na morte celular. Em resumo, o
desequilíbrio do cálcio desempenha um papel crucial na isquemia cerebral e na
morte neuronal.

12
 NEUROPROTEÇÃO
NEUROTOXINA TX3-4 APRESENTOU NEUROPROTEÇÃO SUPERIOR

Neurotoxina phtx3-4 apresentou efeito de neuroproteção superior se comparada com

a toxina phtx3-3 . Essas toxinas são conhecidas por liberar neurotransmissores como
Acetilcolina e Glutamato eles são importante no bloqueio de canais de cálcio, foi
realizado testes nas fatias de hipocampos com a toxina phtx3-3 de (8.0nm) foi
observado uma redução de 68+4%2. já utilizando a toxina phtx3-4 (8.00nm) e foi
observado uma redução de 77+3.8% de células mortas

ATÓXINA PHTX3-3 E PHTX3-4 APRESENTAM EFEITO

NEUROPROTETOR DE ATÉ 1 HORA APÓS O EVENTO ISQUÊMICO
INSTALADO

As toxinas phtx3-3 e phtx3-4 da aranha Phoneutria negriventer são capazes de produzir

efeito neuroprotetor de até 1 hora no modelo de isquemia cerebral invitro foram realizados
testes no hipocampo de ratos da raça Wister de 10,20,30 e 60 minutos do processo
isquêmico instalado Atóxina phtx3-3 e phtx3-4 apresentam efeito neuroprotetor de até 1
hora após o evento isquêmico instalado Primeiramente foi realizado experimento com a
isotoxina TX3-3. As fatias de hipocampo foram submetidas ao processo de isquemia
durante 10 min com uma solução contendo ACSF e aerado por uma mistura carbogênica
contendo(95% de N2 e 5% de CO2). Após 10, 20, 30 e 60 min em experimentos separados,
foi adicionado 8.0nM de TX3-3 por 30 min. Em seguida, as fatias foram mantidas em uma
solução ACSF aerada com uma mistura carbogênica contendo 95% de O2 e 5% de CO2
durante 4 horas (período de reperfusão). Foi observado efeito neuroprotetor da toxina TX3-
3 de (62±3.2%), (56±4.6%), (65.5±4.8%) e (48±3.6%) após 10, 20, 30 e 60 min respondo te do
processo de isquemia instalado. Segundo artigo EFEITO DAS NEUROTOXINAS DA ARANHA
PHONEUTRIA NIGRIVENTER NA ISQUEMIA CEREBRAL IN VITRO :

13
 JOGO DA ARANHA!

CAÇAPALAVRAS CRUZADINHA

p h o N e u t r I a s t y l o
r a d n e g e a s b t e q n T
e l c c i a r g q l u i e n a
p i u e o t a x u p t n o g m
a k s u t j p i e x e e i u a
r s i t u i ê x m V a n n a t
a l m l k b u k i g s f g g u
ç a n i x ò t c a r a n h a l
ã i s w a l i o o i n g a e g
o c a r e t c l f l g p a c c
d o h i r d o j z y i p b i b
p s p e e c h u a a x n r o r
s p s h j f s d x q j v a v n
s l p q w o t i a c x d n t s
n e u r o p r o t e ç ã o e q
ENCONTRE AS PALAVRAS:
PHONEUTRIA
TÒXINA
NEUROPROTEÇÃO
ACETILCOLINA
VENENO ARANHA
PREPARAÇÃO GLUTAMATO
ISQUEMIA
TERAPÊUTICO

14
 JOGO DA ARANHA!

VAMOS COLORIR?! LIGUE OS PONTINHOS

15
 OBJETIVO DO ESTUDO
O objetivo geral deste trabalho foi investigar a ação de neurotoxinas do veneno da
aranha Phoneutria nigriventer como agentes neuroprotetores na isquemia cerebral in
vitro. Os objetivos específicos deste trabalho foram:
- Estudar o efeito neuroprotetor da fração PhTX3 e tx3-4 do veneno da aranha
Phoneutria nigriventer em um modelo de isquemia cerebral in vitro.
- Estudar o efeito neuroprotetor isolado das toxinas TX3-3 e TX3-4
- Estudar o efeito neuroprotetor dessas toxinas em diferentes intervalos de tempo
após a instalação do processo isquêmico.
- Estudar o papel do cálcio intracelular no processo de isquemia cerebral in vitro.
-Estudar O papel do glutamato nesse processo de isquemia
-Estudar todo o conjunto que leva a esse neuroproteção

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 CONCLUSÃO

NOS EXPERIMENTOS FEITOS FICOU CONSTATADO QUE APÒS 2 HORAS DO EVENTO

ISQUÊMICO INSTALADO NÃO FOI OBSERVADO EFEITO NEUROPROTETOR
SIGNIFICATIVO. OS BLOQUEADORES DE CANAIS DE CÁLCIO EM CONDIÇÕES
ISQUEMICAS ESTA SENDO ESTUDADO A FRAÇÃO PHTX3 DO VENENO DA ARANHA
PHONEUTRIA NIGRIVENTER É UM BLOQUEADOR DE CANAIS DE CÁLCIO QUE INIBE A
LIBERAÇÃO DE GLUTAMATO ,A CAPTAÇÃO DE CÁLCIO E TAMBÉM A RECAPTAÇÃO DE
GLUTAMATO EM SINAPTOSSOMAS FOI DEMONSTRADO QUE A TOXINA TX3-4 INIBE A
LIBERAÇÃO DE GLUTAMATO INDEPENDENTE DE NO ESTUDO DOI DEMONSTRAMOS
QUE A FRAÇÃO PHTX3 (1ΜG/ML) FOI CAPAZ DE CONFERIR NEUROPROTEÇÃO (82 ± 4.1%)
EM UM MODELO EXPERIMENTAL IN VITRO UTILIZANDO FATIAS DE HIPOCAMPO
CEREBRAL DE RATOS DE ANBOS OS SEXOS DA RAÇA WISTA E CÉLULAS SN56
SUBMETIDAS AO EVENTO ISQUÊMICO. AS ISOTOXINAS TX3-3 (8NM) E TX3-4(8NM)
TAMBÉM APRESENTARAM EFEITO NEUROPROTETOR (77± 3.8% E 68 ± 4.2%)
RESPECTIVAMENTE UTILIZANDO FATIAS DE HIPOCAMPO CEREBRAL DE RATOS
SUBMETIDAS AO EVENTO ISQUÊMICO. A FRAÇÃO PHTX3 E AS TOXINAS TX3-3 E TX3-4
APRESENTARAM EFEITO NEUROPROTETOR ATÉ 1 HORA APÓS O EVENTO ISQUÊMICO
INSTALADO. ESSE EFEITO FOI SIGNIFICATIVAMENTE REDUZIDO APÓS 1 HORA E 30
MINUTOS DO EVENTO ISQUÊMICO INSTALADO.AS TOXINAS DA ARANHA NÃO FORAM
CAPAZES DE REDUZIR A ATIVIDADE DE UMA PROTEINA CACHAMADACASPASE-3 QUE
ESTÁ ENVOLVIDA NA MORTE CELULAR . DIANTE DOS ESTUDOS REALIZADOS SE CHEGA
A CONCLUSÃO QUE AS TÒXINAS PRESENTES NO VENENO DA ARANHA PHONEUTRIA
NIGRIVENTER (FRAÇÃO PHTX3, TX3-3 E TX3-4) APRESENTARAM EFEITO
NEUROPROTETOR SIGNIFICATIVO, MOSTRANDO SER UMA NOVA CLASSE DE AGENTES
TERAPÊUTICOS COM GRANDE POTENCIAL DE UTILIZAÇÃO NOS CASOS DE ISQUEMIA
CEREBRAL.

17
 ESSE ESTUDO FOI PRODUZIDO POR

•Ana Cristina do Nascimento Pinheiro

•Orientador: Marcus Vinícius Gomez Co-
•Orientadores: Prof. André Ricardo Massensini
•profa. Cristina Guatimosim Fonseca

Produzido na
Universidade Federal de Minas Gerais
Instituto de Ciências Biológicas
BELO HORIZONTE 2007
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1) Cristina do nascimento Pinheiro,Ana.isquemia cerebral in vitro.2007.disponível em:

<https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/SMOC-7EGGWM/1/tese_ana_configurad a.pdf>.
Acesso em: 31 jul.2023.

2) moura,Leonardo.Gerador de cruzadinha.[2017?]. Disponível em:

<https://criadordecruzadinhas.com.br/>.Acesso em: 04 out.2023.

3) Secretaria da saúde Conteúdo. Acidentes por aranha.2015.Disponível em

<https://www.saude.pr.gov.br/Pagina/Acidentes-por-Aranhas>.Acesso em: 17 Nov.2023.

18
 ESSE ESTUDO FOI PRODUZIDO POR
IMAGENS

1. IMAGEM1-PAG1 DISPONIVEL EM: https://www.flickr.com/photos/cowyeow/6322492076/

2. IMAGEM2-PAG2 DISPONIVEL EM: https://www.restorevisionclinic.com/glaucoma-is-no-

longer-a-disease-of-elevated-intraocular-pressure

3. IMAGEM3-PAG3 DISPONIVEL EM: https://psicologiaymente.com/neurociencias/glutamato-

neurotransmisor IMAGEM3-PAG3

4. IMAGEM4-PAG4 DISPONIVEL EM: https://www.portalsaofrancisco.com.br/biologia/aranhas

IMAGEM4-PAG4

5. IMAGEM5-PAG5 DISPONIVEL EM: https://pngtree.com/freepng/red-muscle-decoration-

illustration_4761669.html?sce=sol_pin IMAGEM5-PAG5

6. IMAGEM6-PAG4 DISPONIVEL EM: https://scienze.fanpage.it/tachiaritmia-l-alterazione-del-

ritmo-cardiaco-che-alterna-accelerazioni-a-battiti-normali/ IMAGEM6-PAG4

7. IMAGEM6-PAG5 DISPONIVEL EM: https://scienze.fanpage.it/tachiaritmia-l-alterazione-del-

ritmo-cardiaco-che-alterna-accelerazioni-a-battiti-normali/ IMAGEM6-PAG5

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 ESCANEIE!
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Beatriz Silva Nunes de Oliveira RGM:32148763

Bianca Mota Lima RGM:32148763
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Silvani pereira oliveira RGM: 24811866
ORIENTADOR: JOSÉ PEDRO
UNICID-2023

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