ELETROFORESE CAPILAR:

Separação do DNA
Separação de DNA
Fase em que os fragmentos de DNA são separados de forma que um alelo
possa ser distinguido do outro

Como é feito?

A bandeja de amostra se move automaticamente

sob a extremidade do cátodo do capilar para
entregar cada amostra em sucessão
Separação de DNA
Mecanismos de separação de DNA:
Separação de DNA
Um padrão interno (size standard) é incluído
junto de cada amostra para determinar o
tamanho dos fragmentos

O capilar pode ser pensado como uma avenida

que é apenas larga o suficiente para uma
amostra por vez

Multicapilares: mais amostras analisadas

simultaneamente
 Componentes que influenciam o
processo de separação do DNA

POLÍMERO TAMPÃO CAPILAR

 Componentes que influenciam o
processo de separação do DNA
1) POLÍMERO

• Objetivo: alta capacidade de separação de fragmentos aliado a

baixa viscosidade
• Performance Optimazed Polymers (POP): POP-4 e POP-7
• Polidimetilacrilamida (4% ou 7%) + ureia
• POP-4: análise de fragmentos e genotipagem de STR
• POP-7: sequenciamento de Sanger (maior resolução)
 Componentes que influenciam o
processo de separação do DNA
2) TAMPÃO

• Promove a corrente elétrica

• Presente no cátodo e no ânodo
• Formado por 100 mM TAPS e 1 mM EDTA, ajustado para pH 8.0
• Aditivos ajudam a garantir que o DNA permaneça desnaturado:
ureia e 2-pirrolidinona
 Componentes que influenciam o
processo de separação do DNA
3) CAPILAR

• Central da separação da eletroforese em si

• Falha na eletroforese: contaminação da parede interna do capilar

(efeito build up)

• Solução: substituição dos capilares por volta de 100 injeções ou

quando a qualidade começar a declinar (monitoramento ativo)
Componentes que influenciam o
processo de separação do DNA
Separação do Detecção dos
DNA Fragmentos
Referências Bibliográficas
BUTLER, J.M. et al. 2004. Forensic DNA typing by capillary electrophoresis: using the ABI Prism
310 and 3100 Genetic Analyzers for STR analysis. Electrophoresis 25, p.1397–1412.

BUTLER, J.M. 2012. Capítulo 6. Capillary Electrophoresis: Principles and Instrumentation. In:
Advanced Topics in Forensic DNA Typing: Methodology. Academic Press, p. 141-165.

RODRIGUES, E. L., GARRIDO, R. G. 2020. Capítulo 9. Eletroforese Capilar. In: Introdução à

Genética Forense. Ed. Millenium, Campinas, p. 191-216.