Prova Final de Genética Molecular: Teórica e Prática

● Perguntas para a prova

Perguntas prova prática (prioridade em decorar)

Extração de DNA
● QUAL O PAPEL DA CENTRIFUGAÇÃO NA EXTRAÇÃO DE DNA?
Remoção de gotas que possam ter se formado na tampa do tubo eppendorf -
decantação de material genético, separando DNA de outros componentes,
concentrando-o. Estes componentes (sobrenadantes) são então descartados.

● QUAL O PAPEL DO ETANOL NO PROCEDIMENTO DE EXTRAÇÃO DE

DNA?
Desidrata a amostra, impedindo a dissolução do DNA no meio aquoso

● O DNA PURIFICADO PODE SER SOLUBILIZADO?

Não, pois ao final do processo de purificação, o DNA é desidratado para que seja
feito o sequenciamento

Eletroforese
● COMO FUNCIONA UM SISTEMA DE ELETROFORESE PARA ANÁLISE
DE DNA EM GEL DE AGAROSE?
As partículas se movem em um fluido sob a influência de um campo elétrico. O
gel de agarose é colocado na bacia, e tem pequenos “poços” que estão imersos
numa solução tampão carregada eletricamente. O DNA vai ser então inserido
nestes poços. Posteriormente, sob a luz UV, o DNA (que foi corado com Azul de
Bromofenol) percorre o gel em direção ao pólo positivo em uma velocidade
lenta, e irá “correr” pela solução tampão - a luz UV vai tornar o corante visível, e
assim o DNA puro vai aparecer com determinados tipos de brilho seguindo o
ladder

● QUAIS CORANTES SÃO UTILIZADOS DURANTE UMA CORRIDA

ELETROFORÉTICA E POR QUÊ?
O corante utilizado foi o azul de bromofenol, xileno cianol, que facilitam a aplicação
da amostra no gel e auxiliam no monitoramento da corrida, já que apresentam
velocidade conhecida durante a migração na matriz em direção ao pólo positivo

● O QUE ACONTECERIA COM AS AMOSTRAS DE DNA SE A FONTE

ELÉTRICA DE UMA CORRIDA DE ELETROFORESE FOSSE
DESLIGADA?
A solução tampão perderia sua qualidade e as amostras de DNA não iriam percorrer o gel,
pois não haveria atração para um polo positivo.
 PCR
● O QUE É UM TERMOCICLADOR E COMO ELE FUNCIONA?
O termociclador é uma máquina que realiza amplificação de DNA, ou seja a
obtenção da mais cópias da amostra de DNA

● POR QUE O PROGRAMA DE PCR POSSUI CICLOS?

Pois em cada ciclo há um processo de diferente ocorrendo com o DNA sendo eles
desnaturação, hibridização e elongação.

● QUAIS REAGENTES COMPÕEM UMA REAÇÃO DE PCR?

Taq polimerase, primers, DNA molde e nucleotídeos

● O QUE DELIMITA A REGIÃO-ALVO EM UMA REAÇÃO DE PCR?

O que delimita a região alvo são os terminais 5’ dos primers.

● COMO É POSSÍVEL REALIZAR UMA REAÇÃO DE PCR CONSIDERANDO

QUE A AMOSTRA É UMA ESPÉCIE CUJA SEQUÊNCIA DE DNA É
DESCONHECIDA?
É possível realizar um PCR através de uma região que esteja conservada em outras
espécies como DNA ribossomal/mitocondrial, com o uso dos iniciadores universais
que permitem a amplificação deste trecho desconhecido. Os iniciadores universais
são projetados para hibridizar com regiões altamente conservadas do DNA,
permitindo que a região desconhecida entre os iniciadores seja amplificada

● O QUE SÃO PRIMERS UNIVERSAIS?

Os primers universais são sequências oligonucleotídicas projetadas para amplificar
amostras de DNA desconhecidas

● O QUE É A SIGLA Taq QUE ACOMPANHA O NOME DA DNA

POLIMERASE USADA NA REAÇÃO DE PCR?
A sigla Taq representa uma enzima polimerase termoestável isolada do
microrganismo Thermus aquaticus.

Fotodocumentação

● PARA QUE SERVE O TRANSILUMINADOR DE LUZ U.V.

Equipamento utilizado para emitir luz U.V sob a eletroforese e permitir uma
visualização clara dos resultados

● O QUE SE PRETENDE FOTOGRAFAR NO SISTEMA DE

FOTODOCUMENTAÇÃO?
Pretende-se fotografar se a extração de DNA foi bem sucedida, ou seja, se não
houve contaminação da amostra controle (que não deve conter DNA)
 Bioinformática

PARA QUE SERVEM ALINHAMENTOS DE SEQUÊNCIAS DE DNA?

Comparação de amostras genéticas a fim de verificar o grau de proximidade, se as
amostras são iguais ou não, se há mutações, seja em estudos filogenéticas, na
área da saúde, ou criminalística.

O QUE SÃO CROMATOGRAMAS?

Gráficos gerados a partir do sequenciamento de amostras de DNA comparada
entre si - verificação de erros de sequenciamento, detecção de mutações, e análises
filogenéticas

COMO SÃO IDENTIFICADAS AS DIVERGÊNCIAS NUCLEOTÍDICAS NA

COMPARAÇÃO ENTRE 2 SEQUÊNCIAS DE DNA?
Essas divergências são identificadas através de programas computacionais que
analisam os resultados dos sequenciamentos das amostras

A PRESENÇA DE SUBSTITUIÇÕES NUCLEOTÍDICAS IDENTIFICADAS NA

COMPARAÇÃO ENTRE SEQUÊNCIAS DE DIFERENTES ESPÉCIES ESTÁ
RELACIONADA À DISTÂNCIA GENÉTICA ENTRE ELES? COMO?
Sim, pois quanto mais as sequências divergirem entre si, ou seja, quanto mais
substituições nucleotídicas, mais mutações surgiram e contribuíram para o
distanciamento genético entre espécies.

Prova Teórica
Controle e expressão gênica em bactérias
Em bactérias, genes relacionados são frequentemente encontrados agrupados no
cromossomo, do qual podem ser transcritos por um promotor como uma unidade.
Esse conjunto de genes sob o controle de um único promotor é conhecido como
operon.
Um operon contém genes que atuam em um mesmo processo. Por exemplo, um
operon bem-estudado, chamado operon lac contém genes que codificam proteínas
envolvidas na absorção e no metabolismo de um açúcar em particular, a lactose.

https://pt.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulatio
n/regulation-of-gene-expression-and-cell-specialization/a/overview-gene-regul
ation-in-bacteria#:~:text=As%20bact%C3%A9rias%20t%C3%AAm%20mol%C3
%A9culas%20reguladoras,enzima%20da%20transcri%C3%A7%C3%A3o%2C%
20RNA%20polimerase.