iotecnologia e Bioinformática Prof. Dra.

Luciana Belmont

Marcadores Moleculares
 Fenótipo e Genótipo
Fenótipo

Propriedades observáveis de um indivíduo, que

se desenvolveram sob a influência do genótipo
ou de fatores ambientais.
 Fenótipo e Genótipo
Genótipo

Constituição genética de um organismo, ou

seja, conjunto completo dos genes (genoma).
CONCEITO

Qualquer característica morfológica

ou molecular que diferencia
indivíduos e que seja facilmente
detectável.
Soja transgênica
Gene de
tolerância ao
. glifosato

No Brasil
Genótipos resistentes a herbicidas,
resistente a insetos, plantas tolerantes
à seca e modificadas para produzir
maior quantidade de óleo e óleo com
melhor qualidade
 Tipos de Marcadores genéticos
Marcadores fenotípicos
Características do organismo - Ex. cor da pele, cor e tipo de
cabelo, presença de pelos, etc.

Marcadores bioquímicos
Presença ou ausência de compostos - Ex. isoenzimas, proteínas
ou de polissacarídeos específicos, etc.

Marcadores moleculares
Presença ou ausência de sequências de DNA ou RNA - Ex.
genes ou regiões não-codificantes - alteração em uma ou mais
 Tipos de Marcadores genéticos
USOS
• Testes de paternidade
• Exames genéticos - aberrações cromossômicas para
Humanos, animais, plantas e microrganismos
• Causas forenses (criminais, patenteamento)
• Estudos básicos de genômica e proteômica
• Estudos ambientais (conservação de germoplasma,
avaliação da diversidade genética)
• Estudos evolucionários e populacional
• Melhoramento animal e vegetal (seleção assistida, seleção
de progenitores)
 Marcadores genéticos morfológicos

 Fenótipo de fácil identificação, normalmente identificado

por um único alelo.
 Genes associados a caracteres morfológicos
 Características desejáveis são selecionadas nos genitores
para os cruzamentos, ou seja, características qualitativas

Ex.: cor da flor, formato da

semente e hábito de
 Marcadores genéticos morfológicos

 Desvantagens:
Baseados no pressuposto de que a similaridade
morfológica indicará a similaridade genética.
Sofrem influência do ambiente.
 Marcadores genéticos bioquímicos

 são caracterizados por uma alteração na sequência

de aminoácidos, ou na ordem desses aminoácidos,
que compõem a estrutura primária dessa proteína, e
isso pode ocorrer devido a alterações genéticas ou
epigenéticas.
 Marcadores genéticos bioquímicos

Dois grupos: Isoenzimas e

Aloenzimas
proteínas são proteínas
codificadas por um codificadas por
par de alelos diferentes alelos
situados em pertencentes ao mesmo
diferentes loci. lócus.
 Marcadores genéticosExemplo:
bioquímicos
glucoquinase que não é inibida
pela glucose-6-fosfato.
Isoenzimas
As suas diferentes funções de regulação e a
proteínas sua menor afinidade pela glucose,
permitem-lhe ter diferentes funções nas
codificadas por um células de determinados órgãos, como o
par de alelos controle da libertação de insulina pelas
situados em células beta do pâncreas, ou a iniciação da
diferentes loci. síntese de glicogênio pelas células do
fígado.

Ambos os processos devem ocorrer

somente quando a glucose é abundante, ou
 Marcadores genéticos bioquímicos

Aloenzimas Exemplo: DNA polimerase (síntese de

DNA)
são proteínas
Alterações significativas nesta enzima
codificadas por refletem eventos significativos na história
diferentes alelos evolutiva dos organismos.
pertencentes ao mesmo
lócus. A DNA polimerase apresenta diferenças
relativamente pequenas na sua sequência
de aminoácidos entre filos e até mesmo
reinos.
Marcadores Moleculares baseados no DNA

Caracterização de um fenótipo por meio de genes expressos

ou segmentos específicos de DNA.

 São caracterizados pela variação nos nucleotídeos da

sequencia de DNA
 São herdados geneticamente
 Não são influenciados pelo ambiente
O marcador molecular é definido como uma sequência de DNA
que é diferente entre os organismos estudados, essa diferença é
chamada de poliformismo.
Exemplo

Todos eles possuem os mesmos

genes para a cor do pelo, genes que
determinam a altura, que controlam
o temperamento, entre outras
características.

Mas se todos possuem genes iguais,

 A cor dos pelos, por exemplo, é controlada por 4 genes principais

 Cada um desses genes pode apresentar uma quantidade, ou uma

sequência diferente de nucleotídeos que os compõe, chamados de
“alelos”

 Os alelos são versões do mesmo gene!

 Variabilidade genética
 Classes de marcadores moleculares
Método de detecção:

RFLP (polimorfismo de comprimento de fragmento de

limitação )
É usado para a análise de testes padrões, onde fragmenta o
DNA a fim de encontrar diferenças genéticas entre os
organismos.
 Classes de marcadores moleculares

Aplicações do RFLP
Determinar a
Mapeamento Determinar
origem de
do genoma doenças
uma amostra
genéticas
(teste de
paternidade)
 Classes de marcadores moleculares

Como é feito o RFLP?

Determinar a
origem de Identificar um suspeito em uma
uma amostra análise forense
 Classes de marcadores moleculares
Como é feito o RFLP?

Extração de
Suspeito 1 Suspeito
2 DNA das
amostras
Evidência
Vítima
 Classes de marcadores moleculares
Como é feito o RFLP?

Enzima de restrição
A enzima de restrição
reconhece os sítios
específicos do DNA,
cortando-os em
fragmentos.
 Classes de marcadores moleculares
Como é feito o RFLP?

Aplicação em gel de agarose

DNA fragmentado
Separa as amostras por tamanho e
carga
 Classes de marcadores moleculares
Como é feito o RFLP?
 Classes de marcadores moleculares
Como é feito o RFLP?
 Classes de marcadores moleculares
RFLP
Vantagens: resultados estáveis e reprodutíveis, cobertura ampla
do genoma, possibilidade de utilização de sondas heterólogas.

Limitações: Desenvolvimento de sondas é oneroso e laborioso,

não permite automatização de suas etapas e não existe uma
biblioteca de sondas para espécies de menor importância
econômica.

Aplicações: Estudos de variabilidade genética, estrutura de

 Classes de marcadores moleculares
Método de detecção:

2, Baseados em Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)

RAPD (Polimorfismo de DNA Amplificado ao acaso)
Consiste na amplificação do DNA por PCR, utilizando
primers de sequencias arbitrárias com 10 nucleotídeos.
 Classes de marcadores moleculares
Método de detecção:

RAPD (Polimorfismo de DNA Amplificado ao acaso)

é uma variação da PCR com duas características:

O primer tem
Utiliza um primer sequencia
único ao invés de arbitrária, por tanto
um par sua sequencia alvo
é desconhecida.
 Classes de marcadores moleculares
Método de detecção:

Aplicações: Construção de
mapas genéticos

Determinação da Relações
diversidade filogenéticas
 Classes de marcadores moleculares

Como é feito o RAPD?

PCR
convenciona
Extração do l
DNA
 Classes de marcadores moleculares
Como é feito o RAPD?

Eletroforese em
gel de agarose
 Classes de marcadores moleculares
RAPD
Vantagens: Facilidade de execução, não exige sequenciamento
e desenho de primer específicos, necessita de pouca quantidade
de DNA

Desvantagens: Baixa informação genética em cada locus e

baixa reprodutibilidade.

Aplicação: Determinação da diversidade e estrutura genética,

estabelecimento de relações filogenéticas e diferenciação de
espécies próximas.
 Situação-problema

"Como os marcadores moleculares podem ser

aplicados no
melhoramento genético de plantas?"
 Marcadores genéticos são unidades herdáveis
simples

Sucesso no melhoramento de plantas depende da

capacidade de distinguir fatores genéticos herdáveis
dos fatores ambientais.
 Atividade Verificadora de Aprendizagem
Realização da metodologia ativa Aprendizagem Baseada em Equipes (ABE)

Equipes deverão ser responsáveis pela aplicação do método aos outros grupos,
cabendo a cada equipe:

a. Estudar o tema escolhido pelo professor para o seu grupo;

b. Escolher na literatura ou desenvolver um material didático a ser aplicado aos
demais grupos (livros, texto, pranchas de slides, vídeos, entre outros);
c. Disponibilizar o material às outras equipes com tempo hábil para estudo;
d. Redigir a avaliação (teste de múltipla escolha contendo 4 alternativas cada
questão);
e. Aplicar em sala de aula os testes individuais e em equipes; f. Realizar uma
conferência dando.