Resultados e Discusso

Na eletroforese em gel de poliacrilamida as protenas migram atravs dos poros do

gel. O tamanho desses poros diminuem para concentraes crescentes de acrilamida,
formando uma malha cujo dimetro pode ser maior ou menor em funo dessa
concentrao.
A corrida eletrofortica atravs do gel ocorre devido ao tamanho dos poros do gel e
da massa molecular das protenas. Levando-se em conta um dado tamanho de poro, temse que quanto menor for a massa molecular da protena, mais facilmente ela correr em
relao s protenas de massa molecular mais alta.
As protenas pequenas movem-se rapidamente no gel, enquanto as grandes ficam
em cima, perto do ponto de aplicao da mistura. Por meio da visualizao dos
resultados, pode-se analisar tambm se as protenas tm carter bsico ou cido em
relao s outras. Como no processo executado na prtica o objetivo era o de detectar
protenas bsicas, as que possussem um menor deslocamento ao longo do gel
apresentariam essas caractersticas.
Pode-se visualizar as protenas no gel corando-as com um corante (Coomassie
Brilliant Blue) que, por sua vez, ser removido pelo cido actico aplicado. No entanto,
como o Coomassie Brilliant Blue impregna fortemente nas molculas das protenas,
mesmo aps sua remoo do gel, ele ainda ser bem visvel ligado s protenas, como
possvel visualizar na imagem abaixo.
Figura 1:
Corrida

eletrofortica. Da esquerda para direita: 1. Fuccina bsica; 2. Soro de cavalo; 3. Soroalbumina bovina; 4. Fibrinognio;
5. Hemoglobulina; 6. Peonha de cascavel; 7. Crotoxina (toxina purificada de cascavel); 8. Peonha de escorpio
amarelo; 9. TSTX1 (toxina purificada de escorpio amarelo).

No poo 1, como no foi aplicada nenhuma amostra, mas sim fuccina bsica para

monitorar a corrida eletrofortica, no se v nenhuma banda, j que o Comassie Brilliant

Blue no se fixa fuccina bsica. Quantos aos outros poos, possvel observar que
algumas amostras migraram mais e outras menos. Analisaremos o porqu.
As amostras 2, 3 e 4, onde se encontram as protenas plasmticas, soro de cavalo,
soroalbumina bovina e o fribrinognio, verifica-se que houve uma corrida notavelmente
reduzida, visto que essas protenas plasmticas so grandes e globulares, o que dificulta
que elas se movam pelo meio de suporte utilizado. Uma vez que o gel de poliacrilamida
tem uma malha mais fechada do que o gel de agarose, ele no to adequado para
analisar protenas plasmticas, que tem alta massa molecular.
Se o gel utilizado no experimento fosse o gel de agarose, as protenas plasmticas
teriam corrido mais, ou seja, com menor impedimento, pois a concentrao propiciaria
essa corrida, diferentemente do gel de poliacrilamida. Por essa razo, de extrema
importncia selecionar um meio de suporte adequado para uma determinada substncia
que se deseja analisar. Como o gel de poliacrilamida mais concentrado devido sua
malha de dimetro menor e o gel de agarose menos concentrado, o meio de suporte
mais adequado para o experimento com as protenas plasmticas 2, 3 e 4 seria o gel de
agarose. Dessa maneira, a concentrao do gel de poliacrilamida no foi adequada para
analisar essas amostras.
Se comparadas s amostras nos poos 2, 3 e 4, as amostras 6, 7, 8 e 9 migraram
para o polo de uma forma notavelmente mais acentuada. Isso se deve ao fato de que as
toxinas presentes na peonha de escorpio amarelo e aquelas presentes no veneno de
cascavel (essas peonhas, ou venenos, so amostras bastante complexas, contendo
diversos elementos) apresentam baixa massa molecular se comparadas s protenas
presentes no sangue de animais pipetadas nos poos 2, 3 e 4. O mesmo ocorre para as
toxinas purificadas isoladas de contaminantes presentes na peonha desses animais. A
distncia mais longa percorrida por essas toxinas, a crotoxina e o TSTX1, e a boa
resoluo observada em seus poos so explicadas pelo fato de que elas so amostras
de dimenses pequenas e, por conseguinte, bem mais visveis em gel de poliacrilamida.
A malha do gel de poliacrilamida tem um dado dimetro e as protenas plasmticas
no conseguem penetrar nesse tipo de gel de maneira suficiente para os objetivos do
experimento. Portanto, o gel de poliacrilamida no um meio de suporte adequado para
analisar esse tipo de protena (presentes nos poos 2, 3 e 4), enquanto para as amostras
nos poos 6, 7, 8 e 9, observa-se que o gel de poliacrilamida foi adequado para os fins
propostos. Ademais, importante acrescentar tambm que a hemoglobina teve uma
mobilidade boa nesse gel.

A peonha de cascavel e a toxina isolada de cascavel no apresentaram migrao

to boa quando comparadas ao veneno do escorpio amarelo e sua toxina isolada, o
TSTX1.
Podemos verificar que a peonha do escorpio e a toxina isolada TSTX1 tiveram
uma mobilidade muito maior do que todas a outras amostras pois penetraram na malha
com maior facilidade, j que so compostos de baixa massa molecular e so protenas
com carter mais bsico, ou seja, tm carter positivo nas condies em que foi realizada
a corrida eletrofortica. A razo para tal fato que elas tiveram a capacidade de entrar no
gel e serem atraadas para o polo negativo. Portanto, o pI delas est acima do pH
utilizado, pois nessas condies elas apresentam carter positivo, isto , bsico e foram
atradas para o polo oposto. No caso dessas amostras, a adequao do gel a mais
indicada.
Alm do tamanho e carter qumico (cido ou bsico) das amostras, o processo de
purificao das toxinas tambm pode ser avaliado pelo mtodo do gel de poliacrilamida,
pois foi possivel verificar que s havia uma banda de molculas nos poos das toxinas
isoladas, a crotoxina e o TSTX1. Esse fato implica que todos os outros contaminantes que
havia no veneno (ou peonha) da cascavel e do escorpio amarelo haviam sido
eliminados no processo de purificao (realizado previamente) e o que restou foram
somente as toxinas purificadas de interesse. Assim, foi possvel compreender que se
pode verificar o grau de pureza de amostras como as analisadas, a fim de empreg-las
posteriormente em experimentos.
Possveis causas de erros no experimento podem ocorrer no preparo de solues,
na formao de bolhas no gel e nas solues, no manuseio do gel, no tempo de corrida,
na montagem da placa, no preparo do tampo e na possibilidade de deix-lo extravasar
na placa.